Indice de Sesiones IRC (chats)
[19:07] <marcialg> Creo que ahora mismo solo están presentes los compañeros de
Granada.
[19:09] <marcialg> En ese caso, vamos a empezasr con la Comunicacion 13. Es de los
compañeros Argentinos, que tienen problemas con su servidor.
[19:09] <m.jesus> es que en argentina es pelin temprano..... eso si no jeuga
argentina hoy en el mundial
[19:09] <marcialg> Pero me han pedido que les mande por e-mail cualquier pregunta
que suja y habrá que responderlas "ooff line", aunque sea otro día..
[19:09] <m.jesus> por empezamos... sacamos el texto?
[19:10] <msanchez> creo que si
[19:10] Comunicación Nº
013
[19:10] MORFOGENESIS ULTRAESTRUCTURAL DE LA CELULA COILOCITICA PRODUCIDA POR
EL VIRUS PAPILOMA HUMANO (VPH)
[19:10] Frede Silvia, Hliba Ernesto.
[19:10] Dto. De Microscopía Electrónica,Facultad de Ciencias Médicas Universidad
Nacional de Córdoba,Argentina.
[19:10] Cátedra de Patología,Facultad de Ciencias Químicas,Universidad Nacional
de Córdoba,Argentina.
[19:10] RESUMEN
[19:10] La célula patognómonica de la infección por el VPH, se observa en
los epitelios por medios de la microscopía de luz ,con un aspecto morfológicamente
relevante:una gran cavidad perinuclear, prácticamente vacía. Este virus, posee un
trofismo selectivo por epitelios genitales, de piel y de órganos como esófago o larínge
y actualmente se reconocen más de 60 cepas, siendo algunas de ellas potencialmente
oncogénicas.
[19:10] El objetivo de este trabajo fue analizar por medio Microscopía
Electrónica de Trasmisión. los eventos morfogénicos que conducen a la formación de la
cavidad citoplasmática mencionada,observando la célula infectada desde los sectores
basales del epitelio hasta los elementos mas superficiales
[19:11] MATERIAL Y METODOS: Un total de 50 materiales fueron estudiados a través de
Microscopía óptica,Microscopía de Alta Resolución (MOAR) y Microscopía Electrónica
de Trasmisión. Todos fueron epitelios de genitales femeninos y poseían diagnóstico
colpocitológico y/o histopatológico, que sugerían fuertemente la infección. Se
procesaron siguiendo los protocolos de fijación e inclusión para M.O y MET ,y fueron
observados en un Microscopio Electrónico Elmiskop 1 Sie
[19:11] RESULTADOS: a través de las distintas y numerosas observaciones realizadas
por medio del análisis ultraestructural,se pudo determinar que las alteraciones
morfológicas comienzan ya, en el epitelio basal, donde se observan a nivel
citoplasmático la aparición de pequeñas formaciones vacuolares. Estas originan
pequeñas disoluciones y retracción de los tonofilamentos y organelas que, al ir
ascendiendo hacia el estrato intermedio se hacen más amplias y extensas,
[19:11] dejando espacios electrón-lúcidos en el citosol, con desaparición de
mitocondrias y agrupación anárquica de los filamentos de queratina. Ya en el epitelio
superficial, prácticamente la cavidad (coilo-Koilo,derivado del griego) está
completamente formada,encontrándose en ocasiones partículas viricas en el núcleo,o
fuera de él en plena cavidad. De éste hecho morfológico se infiere que si bien el VPH
tiene doble acción sobre las células infectadas:1-citólisis con modificación de
organoides y citoesqueleto y 2- penetración en el ADN nuclear,persistiendo en el genoma.
La célula Basal es la primera en afectarse a nivel de su citoesqueleto con la
desaparición y disposición incorrecta de los tonofilamentos que conforman el mismo
[19:12] Pueden visitar el trabajo en:
[19:12] http://www.conganat.org/iicongreso/comunic/013/
[19:12] A CONTINUACION LOS AUTORES COMENTAN SU TRABAJO ...
[19:12] Creo que ido muy deprisa no?
[19:12] <m.jesus> bueno, si, pudiste flodearte, pero cualquera puede repasarlo
dando hacia arriba la flecha de la ventana del canal
[19:14] <marcialg> ¿QUé es la Microscopía de Alta Resolución?
[19:14] <m.jesus> por lo que he dedudico, son cortes de una micra vistos a
gran aumento
[19:14] <m.jesus> de los que se obtienen para control de cortes de ME
[19:14] <m.jesus> pero podia ser una buena pregunta
[19:15] <m.jesus> bueno.... las fotos que han colocado de ME son excelentes!
[19:15] <m.jesus> lo que si me he cuestionado al ver las imagenes es.....
[19:15] <m.jesus> ¿hasta que unto esos cambios son degenerativos sin mas
por la picnosis, y no por accion del virus, como atribuyen?
[19:16] <m.jesus> al final solo se trata e vacuolización perinuclear
[19:18] <marcialg> No debe ser artefacto pues parece que las muestras estaban
fijadas directamente en el Karnovsky
[19:18] <m.jesus> marcial.. creo recordar haber leído que fueron
desparafinadas
[19:19] <marcialg> El material obtenido por raspado se fijó en fijador de Karnovsky
enfriado(glutaraldehído-paraformaldehído) a PH 7,2 enfriado, centrifugándoselo a 3000
r.p.m.; se quitó el sobrenadante,volviéndoselo a centrifugar para lograr un sedimento
óptimo. Los especímenes de biópsias quirúrgicas,se fijaron en el mismo fijador,
iniciándose el procesamiento para electromicroscopía.
[19:19] <marcialg> Todos los materiales fueron incluídos en Araldita.
[19:19] <m.jesus> ahhhhh perdon, error mío!
[19:19] <marcialg> Me surge otra duda sobre técnicas
[19:20] <marcialg> ¿Es habitual usar Metenamina plata en cortes semifinos?
[19:20] <m.jesus> si, por ejemplo en biopsias renales se hace
[19:20] <msanchez> yo personalemente nunca la he usado
[19:20] <marcialg> Lo digo por la figura nº 2
[19:20] <m.jesus> y queda que te desmayas....
[19:21] <m.jesus> pues pùedes hacerlo.... espactacular
[19:21] <m.jesus> eso si, el tiempo de incubacion en la plata en vez de 4 horas puee
ser de menos de 1 hora...
[19:21] <m.jesus> o lo vigilas, o la quemas
[19:22] <marcialg> Si os parece, pasamos a la comunicación nº 34
[19:22] <m.jesus> > vale....... gracias...
[19:22] Comunicación Nº
034
[19:23]
[19:23] EXPRESIÓN INMUNOHISTOQUÍMICA DE RECEPTORES HORMONALES EN SARCOMAS
PRIMARIOS DE HUESO
[19:23] *HERNANDEZ, P; RAMÍREZ-TORTOSA, C; PEREGRINA, M; ANDÚJAR, M;
O´VALLE, F; ANEIROS, J; GARCÍA DEL MORAL, R.
[19:23] *SERVICIO DE TRAUMATOLOGÍA Y ANATOMÍA PATOLÓGICA. HOSPITAL CLÍNICO
UNIVERSITARIO
[19:24] DEPARTAMENTO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA. FACULTAD DE MEDICINA.
[19:24] AV. DE MADRID S/N. 18012 GRANADA. ESPAÑA
[19:24] Resumen
[19:24] INTRODUCCIÓN: Aunque se han descrito receptores para estrógenos en
osteoblastos y condrocitos tanto humanos como en ratas, así como en cultivo de células
procedentes de osteosarcomas de rata, no se ha demostrado aún su presencia en tumores
óseos humanos.
[19:25] OBJETIVO: Analizar la expresión de receptores hormonales (Estrógenos
y Progesterona) en una serie de 44 tumores óseos malignos (32 osteosarcomas y 12
condrosarcomas).
[19:25] MATERIAL Y MÉTODOS : Anticuerpos primarios : Anti-receptor
estrogénico 1D5, dilución 1 :50 (MO) DAKO-Dinamarca- ; Anti-receptor progesterona : PGR
1A6 dilución 1:20 (MO) BIOGENEX-USA-.Método de estreptavidina-biotina con fosfatasa
alcalina. Evaluación independiente de 2 patólogos y puntuación en base a una escala
semicuantitativa de 4 grados (1.Negativa, 2. Positividad <10% de las células, 3. Entre
el 10 y 50%, 4. Superior al 50%).
[19:25] RESULTADOS : Obtuvimos una positividad (patrón de tinción nuclear)
del 50% para receptores estrogénicos y del 27,27% para receptores de progesterona en la
serie global. No evidenciamos diferencias de expresión estadísticamente significativas
entre osteosarcomas y condrosarcomas (positividad estrogénica : 53,12%Osteosarcomas y
41,66% en condrosarcomas ; Positividad a Progesterona : 25% en Osteosarcomas y 33% en
Condrosarcomas). La positividad y puntuación semicuantitativa no se relacionaron
con el comportamiento biológico del tumor, ni afectó a la curva de supervivencia e
intervalo libre de enfermedad de los pacientes de nuestra serie.
[19:25] La puntuación semicuantitativa de la expresión
estrogénica fue significativamente mayor en el sexo femenino (Mann Whitney, p<0,005).
[19:26] CONCLUSIONES: 1º.- Tanto los osteosarcomas como los condrosarcomas
expresan receptores estrogénicos y de progesterona, con una mayor intensidad en aquellos
ocurrentes en mujeres. 2º.- Su presencia abre una vía terapéutica potencialmente útil
al igual que ocurre con el carcinoma de mama.
> bueno, despues de oir a un guru en el congreso de barcelona - y ver las imágenes de
PAP correspondientes- (creo que goldman) que el sarcoma de ewing expresaba queratina, ya
no me extraña nada.
[19:26] Pueden visitar el trabajo en:
[19:26] http://www.conganat.org/iicongreso/comunic/034/
[19:27] A CONTINUACION LOS AUTORES COMENTAN SU TRABAJO
[19:27] ¿Está presentes los autores de este trabajo?
[19:28] <m.jesus> paco..... es de tu gente esto no??
[19:28] <PACO> si pero yo no se mucho de ese tema
[19:30] de todas formas si teneis alguna duda yo se las puedo trasmitir
[19:28] <m.jesus> bueno, despues de oir a un guru en el congreso de barcelona - y
ver las imágenes de PAP correspondientes- (creo que goldman) que el sarcoma de ewing
expresaba queratina, ya no me extraña nada.
[19:29] <msanchez> quisiera hacer una pregunta....
[19:29] <m.jesus> venga Miguel....
[19:30] <msanchez> en relación con la positividad de los receptores de
estrógenos...
[19:30] <msanchez> cuando los valoramos contando nucleros postivos etc...
[19:31] <msanchez> hablamos de postividad cuando hay más de un 10% en
general...
[19:31] <msanchez> pero esa cifra mágica del 10% de donde sale?
[19:31] <m.jesus> jejjeejejjejejejeej muy bueno Miguel...... imagino que alguien
tazó por ahí la linea.... sin mas evidencia que su criterio
[19:32] <marcialg> En otros trabajos dicen que tiene que ser un 60% de positividad
para darlo como (+) ¿no?
[19:29] <m.jesus> ¿por que se pretened que tiene interés
terapeútico el hallazgo?
[19:30] <fresno> Alguno de los casos se trataron con antiestrógenos
(tamoxifeno)?
[19:31] <marcialg> En la discusión hablan algo del tamoxifeno.
[19:33] <msanchez> sabeís si en este estudio se realizaron determeinaciones
por RI??
[19:33] <m.jesus> RI=radioinmunnoensayo?
[19:33] <msanchez> en efecto.
[19:34] <msanchez> me refiero a determinaciones bioquímicas
[19:34] <marcialg> Pues me parece que Paco tendrá que trasladarles la pregunta
[19:34] <m.jesus> pues nada,, paco.. apunta apunta......
[19:34] <PACO> cual la del RI?
[19:35] <msanchez> me refería al radioinmunoinmunoensayo (RIA)
[19:36] <PACO> En cuanto al RIA, a que tipo de RIA se refiere
[19:35] <marcialg> Yo tengo otra duda: ¿no se contradice la conclusión 2ª
(que abre una vía tyerapéutica) con el hecho de que en el trabajo no se haya observado
correlación con la superviciencia o comportamiento del tumor
[19:35] <m.jesus> sip..... es verdad...... se contradice
[19:37] <PACO> En cuanto a la contradición esa tambien quereis que se la tramita
[19:37] <marcialg> Sí, puedes comentaselo también lo de la contradicción...
[19:37] <m.jesus> y la pregunta de fresno
[19:37] <PACO> ok, me pondre en contacto con ellos
[19:37] <marcialg> PAsamos si queréis a la Comunicación 40.
[19:38] <msanchez> ok
[19:38] Comunicación Nº
040
[19:38]
[19:38] Apoptosis en carcinoma urotelial de vías altas.
[19:39] Relación con la proliferación, expresión de p53 y supervivencia.
[19:39] Sofía Pérez, Agustín Rey, Pedro Lara, José Marín, Elena Redondo,
Rosa Apolinario.
[19:39] Hospital Ntra. Sra. del Pino.
[19:39] C/ Ángel Guimerá 93
[19:39] 35004 Las Palmas
[19:40] España
[19:40] Resumen
[19:40] INTRODUCCION:
[19:40] El tratamiento de los tumores del tracto urinario superior se basa
fundamentalmente en el grado histológico y el estadío. En los últimos años, la
proliferación tumoral y la expresión de p53 han demostrado ser factores pronósticos de
interés en estas neoplasias transicionales.
[19:41] El objetivo de este estudio es determinar el Índice de Apoptosis (IA)
de estos tumores y su relación con las características clínico-patológicas. También
se analiza el valor predictivo del IA en la
[19:41] progresión tumoral y supervivencia a largo plazo.
[19:41] METODO:
[19:42] Se incluyeron en el estudio 92 pacientes afectos de carcinomas
uroteliales de pelvis renal y uréter diagnosticados y tratados entre 1975 y 1993. Las
células apoptóticas se identificaron en preparaciones teñidas con hematoxilina y
eosina. Se relacionó el Indice Apoptótico (IA) con la localización tumoral, el grado
histológico, la proliferación tumoral medida por Ki67 e índice mitótico, la expresión
de p53, la invasión local (T), ganglionar (N), vascular y perineural, y el
estadío (TNM) (Mann-Whitney o T-test, y test de ANOVA).
[19:42] Además se relacionaron estos factores con la
supervivencia en el análisis univariante (log-rank test) ymultivariante (test de Cox).
[19:42] RESULTADOS:
[19:42] El IA se relacionó con la proliferación tumoral medida por Ki67 y
con el índice mitótico (p<0,00001), grado histológico (p<0,0001), T
(p<0,0001), N (p<0,001) y el estadío TNM (p<0,0001). Existe también una
relación estadísticamente significativa con la invasión vascular (p<0,006) y la
invasión perineural (p<0,015). La supervivencia actuarial a los cinco años para todo
el grupo fue del 76%. Los pacientes con bajos niveles de apoptosis en sus tumores
(IA<0,88) tuvieron una mayor supervivencia (81%) que aquéllos con alto IA (>0,88),
con una supervivencia del 60% (p<0,021).
[19:43] En el análisis multivariante, solo el estadío T (p<0,0002)
y la expresión combinada de Ki67-p53 (p<0,026) fueron estadísticamente
significativos.
[19:43] CONCLUSIONES:
[19:43] El IA está relacionado con el aumento de la proliferación y
progresión de la enfermedad y es de valor pronóstico en la supervivencia a largo plazo
de los tumores de pelvis renal y uréter.
[19:44] Pueden visitar el trabajo en:
[19:44] http://www.conganat.org/iicongreso/comunic/040/
[19:44] A CONTINUACION LOS AUTORES COMENTAN SU TRABAJO
[19:45] ¿Algún comentario?
[19:46] <msanchez> Impresiona en este trabajo la enorme significación de
los resultados.
[19:46] <msanchez> Me gustaría conocer como se realizaron los contajes,
manual, semiautomático, automático. Y si fueron hechos por un observador o por varios.
[19:46] <sp> Fueron hechas al M.O por un solo observador
[19:47] <sp> pero en trabajo previo lo habíamos validado tanto con otro observador,
como intraobservador
[19:47] <fresno> Me gustaría saber si se incluyeron carcinomas "in
situ" en el estudio
[19:49] <sp> 20 casos eran Ta y 30 T1
[19:51] <sp> algo que sorprende pero que no es nuevo es que si bien a priori
parece que a más apoptosis "mejor pronóstico"
[19:51] <sp> nos encontramos lo contrario, cuantas más ce´lulas mueren por
apoptosis, "peor va el tumor"
[19:52] <sp> y esto tal vez en parte se explique por la relación entre
proliferación y muerte celular.
[19:54] <marcialg> ¿Habéis probado P53 de varios fabricantes? ¿Hay
diferencias?
[19:55] <sp> a tu pregunta marcialg, no puedo contestarte en este trabajo se usó el
mismo p53.
[19:55] <marcialg> Es que tenemos problemas con ese marcador... No importa.
[19:56] <sp> No estçá el anatomopatólogo que utilizó la te´cnica y como tb ha
determinado p53 en otros tejidos tal vez si haya usado diferentes Ac
[19:56] <sp> pero no en uete trabajo
[19:56] <marcialg> De acuerdo, ya os enviaré un e-mail, entonces...
[19:56] <marcialg> Pasamos si quereis a la Comunicacion 43, de Oviedo.
[19:57] <msanchez> ok
[19:57]
Comunicación Nº 043
[19:57] SIGNIFICADO PRONOSTICO DE LA EXPRESION DE PROTEINAS RELACIONADAS
[19:57] CON LA APOPTOSIS BCL-2 Y BAX EN CARCINOMA DUCTAL INFILTRANTE DE MAMA
[19:57] CON GANGLIOS LINFATICOS NEGATIVOS
[19:57] MF Fresno, MJ Pérez del Rio, B. Madrigal, M Veiga, JM Diaz
Iglesias(*) y A Herrero
[19:58] Hospital Central de Asturias (HC).Centro Universitario. Oviedo
[19:58] Servicio de Anatomía Patológica
[19:58] (*) Servicio de Anatomía Patológica. Hospital Insular de Gran
Canaria
[19:58] RESUMEN
[19:58] Bcl-2 y Bax son proteínas codificadas por una familia de genes que
participan en el mantenimiento del equilibrio entre la proliferación celular y la
apoptosis. Hemos investigado su expesión inmunohistoquímica en 95 CDI de mama con
ganglios linfáticos negativos con un seguimiento medio de 74meses.
[19:58] La positividad para Bcl-2 se correlacionó con factores pronósticos
favorables: bajo grado nuclear e histológico, ausencia de necrosis tumoral y muy
estrechamente con los receptores de estrógenos (P<0.0001). Se constató una
asociación inversa significativa (p<0.001) con marcadores de agresividad como p53 y
alto índice de proliferación celular (Mib-1).
[19:58] Los casos con positividad moderada/intensa mostraron una mejor
supervivencia global (p="0.05)" y un período libre de enfermedad más largo
(p="0.1)." No observamos correlación entre la expresión de Bax y grado
nuclear, histológico, RE y necrosis tumoral, si bien los casos con tinción intensa se
observaron en tumores de grado histologico y nuclear alto, bajo contenido de RE y tinción
negativa o débil de Bcl-2. Igualmente los casos con alta expresión de Bax (1
[19:58] En conclusion, la expresión de Bcl-2 se asoció con factores
pronósticos favorables, mientras que solamente los casos con intensa positividad para Bax
se observaron es tumores mas agresivos y con una sobrevivencia mas corta. Unicamente la
asociación Bcl-2 negativo/Bax intenso constituye un grupo de pacientes con tumores
agresivos.
[19:59] Pueden visitar el trabajo en:
[19:59] http://www.conganat.org/iicongreso/comunic/043/
[19:59] A CONTINUACION LOS AUTORES COMENTAN SU TRABAJO ...
[20:00] <fresno> Solamente resaltar desde el punto de vista metodologico
la dificultad que nos planteo valorar los resultados con Bax
[20:01] <fresno> La inmunotincion es muy heterogenea y existe mucho fondo
[20:02] <marcialg> Pero eso del fondo seguro que lo arreglais en breve
[20:02] <marcialg> En la Figura 2 no se ve tanto Fondo, pero claro... estará
seleccionado el campo
[20:02] <fresno> No creo que sea tal facil, ya que si diluyes el suero la tincion es
muy poco valorable
[20:03] <marcialg> Puede usar estufa a 180º en vez de microondas u olla a presió o
cambiar de buffer citrato... Algo se os ocurrirá
[20:03] <fresno> Por supuesto hemos seleccionado los mejores ejemplos, los casos con
tinción intensa no plantean problemas
[20:04] <fresno> Lo mejor es conseguir un buen monoclonal
[20:04] <marcialg> Siendo prácticos. En un hospital donde el presupuesto es
escaso.... ¿Qué elijo, p53, blc2, bax, catepsina... para ayudar en el pronóstico de un
carcinoma de mama (aparte de receptores)?
[20:04] <fresno> p53
[20:05] <marcialg> Vaya, el que no me sale....
[20:05] <fresno> nosotros utilizamos DO7
[20:06] <marcialg> Gracias, ya hemos probado DO7. Me interesa la pregunta que te
hace Miguel....
[20:05] <msanchez> usasteís algún sistema de análisis de imagen para las
determinaciones?
[20:06] <fresno> no, si te refieres a proceso de imagen automatizado
[20:06] <msanchez> ok
[20:06] <m.jesus> hummmm ¿cuanto tardará en salir un nuevo
marcador??
[20:08] <msanchez> sabe alguien de algún sistema de análisis que se esté
empleando de forma rutinaria en algún servicio/departamento para el análisis de la
"inmuno"?
[20:09] <marcialg> Seguro que los cubanos ya lo usan
[20:10] <marcialg> Es decir, los Cubanos (pregunta a Rosa Coro Antich) tienen varios
trabajos sobre el tema de analisis de imagen
[20:10] <msanchez> gracias Marcial
[20:10] <marcialg> Hola. Pasamos a las Comunicaciones de Granada, primero la c046
[20:11] <marcialg> Paco Arrebola ¿Lo cuentas tú o lo hago yo? Me refiero al
resumen
[20:11] <PACO> Empiza pasando el resumenEn este trabajo describimos un metodo
semiautomatico, aplicable a cualquier programa de analisis de imagen existente en el
mercado, que permita cuantificar correctamente bandas de ácidos nucleicos en geles de
agarosa.
[20:12]
Comunicación Nº 046
[20:12] Cuantificación de Ácidos Nucléicos Desarrollados en Gel de Agarosa.
Diseño y Validación de un Método Simple de Análisis Digital de Imagen.
[20:12] Francisco Arrebola, Marco Masseroli, Francisco O'Valle, Mª Eugenia
Reguero, Asunción Olmo, Mariano Aguilar, Raimundo G. Del Moral.
[20:12] Departamento de Anatomía Patológica, Facultad de Medicina y Hospital
Universitario, Universidad de Granada, Granada, España
[20:12] Adiós Florentino
[20:13] RESUMEN
[20:13] INTRODUCCIÓN: Las determinaciones moleculares se están imponiendo
como técnicas complementarias en el diagnóstico y la investigación en patología.
[20:13] Para la identificación de los cambios en la expresión del mRNA se
requiere el establecimiento de controles internos de calidad de la reacción,
normalización de las muestras, así como de un adecuado método de cuantificación.
[20:13] Actualmente existen diferentes técnicas de las cuales la más
utilizada es el desarrollo de muestras de ácidos nucléicos en geles de agarosa marcados
con bromuro de etídio (BrEt).
[20:13] Debido a la diversidad de métodos existentes para la cuantificación
de las bandas, su elevado coste y en algunos casos su complejidad o imprecisión, hemos
diseñado un método simple basado en el análisis digital de imagen que permite realizar
una cuantificación densitométrica de las bandas de ácidos nucléicos.
[20:13] Este trabajo describe el método de análisis de imagen diseñado y su
validación.
[20:13] MATERIAL Y MÉTODOS: Los algoritmos de procesamiento de imagen
diseñados para la cuantificación de bandas de ácidos nucléicos desarrollados en geles
de agarosa se implementaron utilizando el programa Visilog 4.0â para el desarrollo de
aplicaciones de análisis digital de imagen.
[20:14] Para la validación del método realizado se utilizó un gel de
"estándar" marcado con BrEt y obtenido desarrollando diluciones seriadas
conocidas de un producto de RT-PCR. Del gel colocado sobre un transiluminador de luz
ultravioleta se capturó una imagen digital y se cuantificaron densitométricamente las
bandas de ácidos nucléicos en la imagen mediante los algoritmos diseñados.
[20:14] De los valores de cuantificación obtenidos se valoraron sus
relaciones con las cantidades de "estándar" realmente presentes en cada una de
las bandas y se evaluó su replicabilidad analizando estadísticamente los resultados
obtenidos en cuatro cuantificaciones sucesivas de la misma imagen del gel de
"estándar".
[20:14] RESULTADOS Y DISCUSIÓN: El método diseñado permite cuantificar
densitométricamente las bandas de ácidos nucléicos desarrollados en geles de agarosa
mediante captura de una imagen digital del gel y procesamiento de la imagen para la
segmentación de las áreas de las bandas presentes.
[20:14] Los resultados de validación mostraron que los valores
densitométricos cuantificados presentan una elevada correlación lineal (r=0.993) con las
cantidades reales de "estándar" presentes en cada banda.
[20:14] El análisis de las proporciones entre cantidades de
"estándar" y sus valores cuantificados de densidad óptica mostró que los
errores de cuantificación son pequeños y las diferencias entre réplicas sucesivas no
son significativas. Por lo tanto, el método desarrollado proporciona una cuantificación
de bandas de ácidos nucléicos objetiva, fiable, precisa y reproducible.
[20:15] CONCLUSIONES: El método automatizado de análisis de imagen ilustrado
en este trabajo representa un simple instrumento de gran utilidad para la exacta y
reproducible cuantificación de las bandas de ácidos nucléicos desarrollados en gel de
agarosa.
[20:15] Pueden visitar el trabajo en:
[20:15] http://www.conganat.org/iicongreso/comunic/046/
[20:15] A CONTINUACION LOS AUTORES COMENTAN SU TRABAJO ...
[20:16] <PACO> En este trabajo describimos un metodo, aplicable a
cualquier programa de analisis de imagen existente en el mercado, que permita cuantificar
correctamente bandas de ácidos nucleicos en geles de agarosa.
[20:16] <m.jesus> inclusive el programa VIDS ??
[20:16] <m.jesus> que es que tenemos nosotros?
[20:17] <PACO> Creo que todos los programas de análisis de imagen funciona igual
[20:17] <m.jesus> cual usais vosotros?
[20:17] <PACO> De todas formas el ingeniero informatico no esta aqui que es el que
sabe de eso
[20:18] <PACO> Nosotros tenemos el Visilog 4.0
[20:18] <msanchez> Me gustaría saber si alguién conoce el programa
"Scion Image" que está basado en el "NIH Image".
[20:18] <m.jesus> ni idea!
[20:18] <PACO> Pero la sistematica es igual en todos
[20:18] <marcialg> Paco. Por lo visto habéus usado un software comercial
(Visilog)... ¿Teníais experiencia previa en tros temas de analisis de imagen con ese
software? ¿Cuanto cuesta el programa?
[20:19] <PACO> Estos programas se pueden recoger por la reded a nivel privado
[20:19] <PACO> Y son gratuitos
[20:19] <m.jesus> ahhhhhhh si?
[20:19] <m.jesus> en que url?
[20:20] <marcialg> Eso, eso, suelta el url
[20:20] <PACO> el problema es al ponerlos en funcionamiento en Instituciones
[20:20] <msanchez> si el que yo he comentado hace un momento es de libre
distribución
[20:20] <msanchez> un momento
[20:20] <jlera> y puedes decir alguna dirección de dónde PACO??
[20:20] <msanchez> Scion Corporation
[20:20] <msanchez> 82 Worman's Mill Ct., Suite H
[20:20] <msanchez> Frederick, MD 21701
[20:20] <msanchez> Phone: (301) 695-7870
[20:20] <msanchez> FAX: (301) 695-0035
[20:20] <msanchez> eMail: info@scioncorp.com
[20:20] <msanchez> Web Site: http://www.scioncorp.com
[20:21] <PACO> Ahora mismo no se pero si queires me mandas un e-mail y mañana te
las digo
[20:21] <m.jesus> que bueno Miguel!!!
[20:22] <PACO> El que nosotros tenemos a qui se compro
[20:22] <marcialg> De acuerdo, paco, pero mejor manda el e-mail a l-iicv-tc@listserv.rediris.es
[20:22] <PACO> ok
[20:22] <m.jesus> ay Paco... yo nosotros pagamos un millon
[20:22] <m.jesus> sniffffffffffffffffffffff
[20:23] <jlera> si, es mejor que lo mandes a la lista, para que todos los inscritos
nos enteremos
[20:22] <marcialg> ¿Pasamos a la com48 que se nos hace tarde ¿ok?
[20:22] <msanchez> ok
[20:22] <m.jesus> pero no dejas ni respirar jejejjeje
[20:23]
Comunicación Nº 048
[20:23] Efecto de Tacrolimus® y Ciclosporina A sobre la
Expresión de Glicoproteína P en Células Tubulares Renales en Cultivo.
[20:23] Francisco Arrebola, Francisco O'Valle, Asunción Olmo, Mariano
Aguilar, Marco Masseroli, Mª Eugenia Reguero, Francisco Revelles, Rafael Carvia, Marina
Higueras, Belén Espigares, Raimundo G. Del Moral.
[20:23] Departamento de Anatomía Patológica, Facultad de Medicina y Hospital
Universitario, Universidad de Granada, Granada, España
[20:23] RESUMEN
[20:23] INTRODUCCIÓN: La glicoproteína P (gp-P) es fuertemente expresada en
el borde apical de los túbulos contorneados proximales y se detecta en líneas celulares
en cultivo, procedentes de los mismos.
[20:23] La función fisiológica exacta de gp-P en el riñón no está
totalmente definida, existen evidencias de que juega un papel importante en los mecanismos
detoxicantes renales cuando se produce una agresión por xenobióticos actuando como
aspirador de moléculas hidrofóbicas.
[20:24] Nuestro grupo ha demostrado en biopsias de trasplante renal, la
relación entre los depósitos intrarrenales de Ciclosporina A (CsA) y el incremento en la
expresión de gp-P. Este mismo fenómeno lo hemos constatado con líneas celulares de
túbulo renal. Alternativamente, la CsA puede actuar bloqueando funcionalmente a la gp-P.
Presentamos el estudio comparativo del efecto in vitro de tres inmunosupresores (IS) sobre
la modulación de la expresión de gp-P y su ca
[20:24] MATERIAL Y MÉTODOS: Los ensayos in vitro se han realizado con las
líneas celulares de túbulo renal MDCK y LLC-PK1 mantenidas en medio de cultivo MEM más
5% de SBFI y con la línea celular NIH-MDR-G185 transfectada con el gen mdr1 humano e
incubada con DMEM más 10% de SBFI. La inducción farmacológica se ha llevado a cabo con
dosis subletales (IC70) de los IS: CsA (1.85µM y 10µM), Tacrolimus® (FK506) (10µM),
Azatioprina (AZA) (105µM y 207µM), siendo los tiempo
[20:24] Se han valorado mediante citometría de flujo los siguientes
parámetros: expresión de gp-P (AcMo JSB-1); número de células positivas (%POS);
incorporación media de fluorescencia específica (IMFE); ciclo celular y estimación de
la fracción de crecimiento (FC); inducción o bloqueo funcional de la gp-P usando como
sustrato un colorante fluorescente, Rodamina 123 (Rh123), y determinando el canal medio de
fluorescencia (CMF).
[20:24] RESULTADOS Y DISCUSIÓN: En condiciones basales el %POS y la
intensidad de expresión de gp-P medida en IMFE fue similar para las líneas de túbulo
renal (%POS MDCK: 83.65±22.71 y LLC-PK1: 81.28±20.5) (IMFE MDCK: 22.6±2.1 y LLC-PK1:
27.9±5.1) y muy superior en la línea control transfectada NIH-MDR-G185 (%POS: 99±0.1%
IMFE: 122.8±15.4).
[20:24] La incubación con los IS modificó el IMFE en ambas líneas (ANOVA,
p<0.001), siendo desde los 7 días para la línea MDCK y a partir de los 15 días en la
línea LLC-PK1. Como se ve en la siguiente tabla, la mayor inducción la proporcionó la
AZA seguido por la CsA y FK506.
[20:24] Así tras quince días de tratamiento para las dos líneas se mantuvo
la inducción de gp-P frente a los cultivos control (ANOVA, p<0.01) excepto para FK506
que perdería la significación estadística. Comparando FK506 con CsA, esta última
induce mayor expresión de gp-P de forma estadísticamente significativa (Newman-Keuls,
p<0.05) en las líneas de túbulo renal y en los dos tiempos analizados.
[20:24] En la línea transfectada NIH-MDR-G185 los ensayos con Rh123 pusieron
de manifiesto el efecto modulador de los IS sobre la gp-P. FK506 y CsA produjeron de forma
significativa un mayor acúmulo intracelular de Rh123 con referencia al bloqueante
Verapamil, y AZA que fue la que menos produjo. Como se ve en la siguiente tabla, para las
líneas tubulares el efecto modulador de los IS sobre la gp-P fue menos evidente.
[20:24] CONCLUSIONES: 1) In vitro los fármacos con potencial nefrotóxico
inducen la sobreexpresión de gp-P tras incubación prolongada.
[20:25] (las tablas no se han incluido). Podeis verlas en el Web
[20:25] 2) El FK506 comparativamente induce menor expresión de gp-P y
simultáneamente conduce al bloqueo funcional de esta molécula de forma significativa;
[20:25] esta doble acción estimuladora y bloqueante, puede ser de gran
aplicación en el manejo terapéutico de los enfermos transplantados.
[20:25] Pueden visitar el trabajo en:
[20:25] http://www.conganat.org/iicongreso/comunic/048/
[20:25] A CONTINUACION LOS AUTORES COMENTAN SU TRABAJO ...
[20:26] <PACO> Con este trabajo intentamos ver el posible efecto
farmacologico sobre la expresion de pg-P en el riñon
[20:26] <PACO> El ensayo es invitro
[20:26] <m.jesus> el efecto farmacológico de que?
[20:27] <PACO> El efecto farmacologicos sobre la expresion de glicoproteina-P
[20:28] <PACO> en celulas en cultivo procedentes de riñon
[20:28] <m.jesus> pero de que fármacos??
[20:29] <PACO> de tres inmunosupresores Azatiprina ,Ciclosporina, FK506
[20:30] <PACO> La determinacion de los niveles de glicoproteina P se realiza
por citometria de flujo
[20:29] <m.jesus> anda!!
[20:29] <m.jesus> oyes...
[20:29] <m.jesus> la azatioprina
[20:30] <m.jesus> no reproduce una lesion similar
ultraestructuralmente a la nefropatia del trasnplante?
[20:30] <PACO> no se no trato ese tema
[20:30] <PACO> recuerda que soy boticario
[20:30] <m.jesus> si, recuerdo.... perdona por meterme en campo ajeno
[20:30] <m.jesus> pero me gustaria que pudieras indagar acerca de ese eefecto
[20:30] <m.jesus> hae unos años me ptropece con ese interrogante....
[20:31] <PACO> bueno te perdono si quieres podemos profundizar un poco mas
[20:31] <m.jesus> y hasta ahora no esta resuelto
[20:31] <PACO> a que te refieres
[20:32] <PACO> con el problema en que
[20:32] <m.jesus> a lo siguiente: la azatioprina produce un
desdoblamiento de la MB glomerular...?
[20:32] <m.jesus> osea, una especial degeneracion de la lamina interna de la
idem ??
[20:33] <PACO> Principalmente la azatioprina es un analogo de las bases y produce
una para del ciclo celular
[20:33] <m.jesus> si... y altera las membranas basales?
[20:34] <PACO> repito una parada de las celualas en al fase G2M del ciclo celular
[20:34] <PACO> bueno y la duda
[20:34] <marcialg> ¿El estudio concluye que el Tacrolimus es mejor para el
tratamiento del trasplante renal o es un farmaco que habría que asociar a los demás para
evitar la sobreexpresión de gp-p?
[20:35] <PACO> y???
[20:36] <marcialg> Qería comproibar que había entendido las conclusiones (las
siglas me lian un poco)
[20:36] <PACO> siglas?? de los farmacos
[20:37] <marcialg> FK506 = Tacrolimus
[20:37] <PACO> Es que si no se ponene siglas esto es interminable
[20:37] <marcialg> Tienes razón
[20:37] <PACO> si el tacrolimus es el nombre comercial de fk506
[20:38] <marcialg> Pero yoe, en vuestro trabajo ¿estudiais la asociacion de
esos fármacos?
[20:39] <PACO> no, pero el efecto bloqueante de uno puede pontenciar los efectos de
los otros "si se administraran conjuntamente
[20:39] <marcialg> Justo. Eso quería saber
[20:39] <PACO> ya que todo se vehiculan por la misma cia
[20:40] <marcialg> ¿cia?
[20:40] <PACO> repito ya que todos se vehiculan por la misma via
[20:40] <PACO> La glicoproteina-P
[20:40] <PACO> que un sistema detoxicante
[20:41] <marcialg> "aspirador de moléculas hidrofóbicas"
[20:41] <marcialg> Me hizo gracia esa denominación
[20:41] <PACO> protege de la agresion farmacologica a las celulas que la expresan
constitutivamente
[20:42] <marcialg> Sé que vais a odiar, pero....
[20:42] <PACO> Fue definida asi por primera vez por Gottesman
[20:42] <m.jesus> paco..... se trata de que habeis diseñado un modelo
experimental para expeimentar farmacos??
[20:43] <PACO> si de eso se trata , ademas hemos ensayado otros muchos farmacos
[20:42] <marcialg> Gracias a Todos los autores de Comunicaciones, sobre todo a Paco
y a MF Fresno y a ¿sp?
[20:42] <PACO> vaya ya que me empezaba agustar esto
[20:43] <marcialg> Te peudes quedar, algún fármaco caerá
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