APLICACIÓN DE LAS TÉCNICAS INMUNOHISTOQUÍMICAS AL ESTUDIO DE LOS SÍNDROMES LINFOPROLIFERATIVOS*

Dr. Tomás Álvaro Naranjo, Dr. Ramón Bosch Príncep, Dra. Salomé Martínez González, Dra. Mª Teresa Salvadó Usach  

  2.- Inmunofenotipo normal del sistema linfoide

• Ganglios linfáticos
• Bazo
• Tejido linfoide asociado a las mucosas
• Piel
• Elementos no linfoides del ganglio linfático
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Ganglios linfáticos (GL): 

 El córtex:

    El córtex del GL muestra agregados linfoides denominados  folículos linfoides, que pueden mostrar una porción central más clara denominada Centro germinal (CG), y una zona más periférica denominada manto.
    Los folículos sin CG se denominan folículos primarios (FP) y los que si lo presentan secundarios (FS). Estos folículos son áreas ricas en células B.

• Los FP están cosntituídos por células B predominantemente maduras y que no han sido estimuladas recientemente por Ags. Expresan Ig de superficie ( l o k ) con cadenas pesadas (m o d ).
• Los FS se desarrollan en respuesta a la estimulación antigénica y en ellos las Cél. B proliferan y dan origen a una prole de células que producen Acs con una alta afinidad para los Ags.
• El CG presenta una zona clara y una zona oscura:
• La zona oscura es la zona más cercana al área paracortical, es rica en centroblastos (células grandes).
• La zona clara, está generalmente polarizada hacia el sitio de entrada de Ags como el seno subcapsular y es rica en centrocitos (células pequeñas hendidas), células dendríticas y linfocitos T CD4+ (helper/inductores). Ambas zonas poseen macrófagos con cuerpos tingibles.
• Las células dendríticas foliculares, que residen en los centros germinales, presentan los Ags sobre su superficie y su función es la de activar selectivamente las células B para que se unan al Ag con una alta afinidad.
• Las células del CG carecen de expresión de proteína bcl-2 pero si expresan CD10.
• Las células plasmáticas totalmente diferenciadas se desarrollan fuera de los centros germinales y pueden emigrar a otros tejidos fuera del GL.
• La zona del manto está constiuída por células B de morfología y fenotipo similar a los linfocitos B del folículo primario. En contraste con las célulasB del CG, éstas expresan inmunoglobulinas de superficie, carecen de cadena J y presentan un bajo índice proliferativo. También expresan CD21, CD32, CD35 y bcl-2 y no expresan CD10 ni CD38.

Paracórtex: 

    Las áreas parafoliculares o Paracórtex son las situadas entre los folículos de células B y la médula del GL y están ocupadas predominantemente por linfocitos T, en su mayoría CD4+. En los GL no estimulados, estas células T tienen la apariencia de linfocitos pequeños y son citológicamente indistinguibles de los linfocitos B de los FP o de los de la zona del manto de los FS.
    Cuando se produce la estimulación antigénica, el número de células T grandes aumenta y el paracórtex muestra un aspecto moteado al examen con bajos aumentos. Con estimulaciones antigénicas intensas, como ocurre en la infección por el virus de Epstein-Barr, el paracórtex puede contener inmunoblatos B infectados por virus así como un número grande de células T immunoblásticas reactivas.
    También se encuentran vénulas de endotelio alto y células dendríticas interdigitantes (CDI), siendo estas últimas las encargadas de presentar los Ags al linfocito T helper nativo iniciando las respuestas de las células T a Ags proteicos que se encuentran en el ganglio. Las CDI tienen un núcleo irregular, pálido, vesicular y citoplasma abundante y claro que muestra interdigitaciones con linfocitos T a través de largos procesos citoplásmicos finos. Las CDI tienen un marcado parecido fenotípico con las células presentadoras de Ags de la piel (Cél. de Langerhans). Derivan de la MO, expresan numerosos marcadores mielomonocíticos y expresan una positividad nuclear fuerte para la proteína S-100.

Médula: 

    La médula es la porción más central y próxima al hilio. Los cordones medulares son la porción de la médula ocupada por linfocitos y que corresponden a la porción más central (medular) del componente linfoide del GL donde predominan los linfocitos B y las células plasmáticas. También se observan senos linfáticos medulares así como estructuras vasculonerviosas.

Inmunofenotipo de los diferentes componentes celulares del Ganglio Linfático  

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Bazo: 

    El bazo está constituido por una cápsula fibrosa que lo delimita, una pulpa blanca que constituye el compartimento linfoide del bazo y una pulpa roja constituida por estructuras vasculares mayoritariamente.

    La pulpa blanca: consiste en áreas foliculares ricas en células B y en las vainas linfoides periarteriolares ricas en células T.

    Vainas linfoides periarteriolares ricas en células T: Es la contrapartida esplénica de la región paracortical de los GL y se encuentran rodeando las arterias esplénicas desde su salida de las trabéculas fibrosas. Las células T, de composición y fenotipo similar a aquellas del paracórtex del GL, predominan en estas áreas que también contienen CDI y macrófagos. Las vainas linfoides se atenúan cuando los vasos arteriales se transforman en arteriolas.

    Folículos de Células B primarios y secundarios: Los folículos primarios y secundarios se localizan frecuentemente en los puntos de división arterial, en la periferia de la zona T y tienen idéntica citología y fenotipo que los folículos primarios y secundarios del GL. Porque el bazo es parte del sistema vascular más que del sistema inmune y carece de linfáticos aferentes está relativamente protegido de los antígenos exógenos. Esta es la razón por la que el bazo del adulto normal tiene un mayor número de folículos primarios que de secundarios. La zona marginal, que rodea el folículo primario y la zona del manto de los folículos secundarios, consiste en una zona de células linfoides de mediano tamaño con un citoplasma claro prominente. La cromatina nuclear de las células de la zona marginal es algo menos densa que la de los linfocitos. Los linfocitos de la zona marginal se encuentran mezclados con un número variable de células plasmáticas, células T y macrófagos y expresan inmunoglobulinas de superficie con cadenas pesadas delta. Estas células típicamente tienen receptores para la porción Fc de las IgG y se tiñen para los receptores del complemento I y II (CD35 y CD21) y para la fosfatasa alcalina. Al contrario que los linfocitos del manto, las células B de la zona marginal carecen generalmente de la expresión de la isoforma CD45 reconocida por el antígeno KiB3 así como de CD23. Algunas células linfoides de tamaño intermedio pueden ser identificadas también en las placas de Peyer infiltrando el epitelio que cubre los folículos. Las células B de la zona marginal puede ocasionalmente verse en el GL, particularmente en el mesenterio donde colecciones de estas células pueden polarizarse hacia el seno subcapsular.

Pulpa roja: La pulpa esplénica es roja debido a su gran volumen de eritrocitos. Esta zona está compuesta por cuatro estructuras vasculares: 1) vasos arteriales finos y no anastosmosados; 2) una red reticular que consiste en placas de tejido celular que se encuentra entre los sinusoides y que comprende los cordones esplénicos; 3) vasos venosos grandes y de pared fina; 4) venas de la pulpa que drenan los sinusoides.

Sinusoides: La red reticular consiste en un sistema que se ramifica de cordones que se encuentran entre los senos. Después que la arteria central da ramos para la pulpa blanca y la zona marginal, los troncos principales corren por el interior de los cordones de la pulpa roja, ramificándose en vasos finos y rectos que no presentan anastomosis (penicilli) y que se abren directamente al interior de la red reticular de los cordones. Poco antes que terminen estos pueden tener una cubierta de macrófagos. Esta cubierta puede tener eritrocitos, granulocitos y otras células sanguíneas. Estas cubiertas bien desarrolladas pueden contener muchos macrófagos esplénicos que poseen una capacidad fagocítica extraordinaria y que son probablemente los sitios de aclaramiento (limpieza) de partículas sanguíneas y pueden incluso controlar el flujo sanguíneo esplénico. Estas cubiertas de macrófagos no están totalmente desarrolladas en el hombre y las funciones de aclaramiento del bazo son también realizadas por los macrófagos de la zona marginal y de la pulpa roja. Los cordones de la pulpa roja también contienen células linfoides con predominio de células CD8+ y de Natural Killer.

Senos: Los senos están cubiertos por células endoteliales separadas por hendiduras y rodeadas por fibras en anillo características y fibras que se unen. Las células endoteliales contienen complejos de unión y yacen sobe una membrana basal fenestrada. Se tiñen para marcadores endoteliales así como para CD8.
 
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Tejido linfoide asociado a mucosas del tipo GALT:

 
El tejido linfoide asociado a la mucosa intestinal está constituido por los siguientes compartimentos:

1. Las placas de Peyer: 

    Son nódulos linfáticos organizados que se encuentran distribuidos por el intestino delgado, el apéndice , el colon y el recto. En el íleon terminal estos nódulos están concentrados y forman en conjunto las placas de Peyer (PPy). Las PPy son agregados no capsulados de células linfoides que tienen un parecido a los ganglios linfáticos.
    Cada Ppy tiene células B, T y células accesorias asociadas. En el área B se aprecia un centro folicular idéntico al presente en los GL reactivos, con una zona oscura en la base rica en centroblastos y una zona clara en el extremo mucoso que contiene centrocitos; los macrófagos con cuerpos tingibles son característicos. El centro folicular se rodea de un manto de linfocitos B pequeños que es más amplio en la porción mucosa del FL. Rodeando al manto se observa una zona marginal amplia con células mayoritariamente pequeñas-intermedias, con citoplasma abundante y núcleos que parecen de centrocitos. La zona marginal se extiende hacia la superficie mucosa y algunas de las células B de la zona marginal entran en la capa epitelial para formar acúmulos intraepiteliales de células B.
    El epitelio asociado al folículo o bóveda o cúpula epitelial (dome), es una estructura especializada que contiene células microplegadas (M) que se cree que muestrean los contenidos intestinales e interactuan con el tejido linfoide que se encuentra por abajo.

Inmunohistoquímica de las PPy:

    Los centros foliculares son idénticos a los de los GL.
    Las células dendríticas foliculares son portadoras de complejos inmunes que contienen inmunoglobulinas, sobre su superficie, de todos los isotipos excepto de IgD. Mientras que los centrocitos y centroblastos sintetizan todas las inmunoglobulinas excepto la IgD. Estas se expresan en la superficie y en menos cantidad en el citoplasma de algunas células. Las células del centro folicular son de fenotipo B maduro y también expresan CD10 (CALLA).
    El manto expresa IgM y IgD de superficie en contra de la zona marginal que expresa IgM pero no IgD. La zona marginal de las Ppy comparte el inmunofenotipode la zona marginal del Bazo. Ambas son IgM y IgA1 + pero IgA2 -, CD5 - y CD10 - .
    Existe también una zona T equivalente a la zona paracortical del ganglio linfático en la que se observan vénulas endoteliales altas. El inmunofenotipo de estas zonas T es el mismo que el de los linfocitos de la zona T paracortical del GL.

2. La lámina propia: 

    Está difusamente infiltrada por células plasmáticas, macrófagos y en menor cantidad por linfocitos B y T.
    Las células plasmáticas secretan predominantemente IgA, pero también IgM, IgG e IgE encontrándose en una proporción aproximada de 20:3:3:2 respectivamente. En el hombre hay dos clases de IgA, IgA1 e IgA2, en una proporción en sangre periférica de 4:1, siendo del 20 % de las células plasmáticas en tejidos linfoides no mucosos mientras que incrementa al 50% en las mucosas. La IgA secretada por las células plasmáticas es predominantemente dimérica (65%) en contraste con el tejido linfoide no mucoso donde sólo el 30% secreta la forma dimérica. Los dímeros de IgA están unidos por la cadena de unión (J) que también une las moléculas pentaméricas de la IgM. La cadena J de la IgA (y de la IgM) es una glicoproteína conocida como componente secretor (SC) que es sintetizada en los enterocitos. El complejo SC-Cadena J-IgA (IgM) es activamente trasportado por los enterocitos al interior de la luz del intestino.
    La proporción de CD4-CD8 en la lámina propia es de 4:1 y el 50% de las células expresan el Antígeno linfocitario mucoso humano (HML-1=CD103).

3. Linfocitos intraepiteliales (lie): 

    Se encuentran entre las células epiteliales en el intestino delgado y en el grueso. 20 lie / 100 células epiteliales en el yeyuno y disminuyendo hasta 13 lie /100 epiteliales en el íleon.
    Casi todos son CD3 +, CD4 -, CD8+, CD5+ y HML + ("human mucosal lymphocyte antigen"). Se deben diferenciar de los linfocitos B del epitelio de la cúpula de la Ppy. En el hombre estos linfocitos expresan el TCR alfa/beta en el 90% y sólo un 10% de los linfocitos expresan gamma/delta TCR.

4. Ganglios linfáticos mesentéricos:

    La estructura básica de los GL mesentéricos es la misma que la de los GL periféricos.
    En circunstancias normales se distinguen porque presentan unos folículos linfoides B reactivos pequeños que pueden estar rodeados de una zona marginal amplia y un paracortex pobremente desarrollado con senos prominentes y dilatados que contienen blastos B trasformados, la mayoría de los cuales sintetizan IgA.

PROPIEDADES FUNCIONALES DEL MALT:
 
    Las células plasmáticas de la lámina propia secretan IgA dimérica, IgM pentamérica y en menor cantidad IgG, la cual es siempre monomérica. El complejo IgA (o IgM) -J-SC es trasportado a través de las células epiteliales a la superficie del intestino donde forma la llamada manta mucosa IgM o IgA que actúa impidiendo que antígenos específicos cruzen la superficie mucosa y que entren en la circulación. Algunas de las inmunoglobulinas sintetizadas en la lámina propia entran a la circulación y son secretadas en otras mucosas donde puede no haya población de células plasmáticas
    De la inmunidad de las células T de la mucosa se conoce muy poco. Las células T de las placas de Peyer probablemente tienen la misma función que las del paracórtex del GL. Parece que comparte las mismas vías de circulación que las células B del MALT.
    Las células T intraepiteliales tienen una función desconocida y aumentan en número en el curso de infecciones parasitarias y en las enteropatías inducidas por alimentos (enfermedad celíaca).

INMUNOHISTOQUÍMICA DE LOS LINFOMAS DE TIPO MALT

    La distribución de las células centrocito-Like (CCL) en los linfomas MALT corresponde a la zona marginal en las PPy y hay similitudes citológicas entre las células CCL y las células B de la zona marginal. El inmunofenotipo de ambas es también muy similar. Es por ello posible que las CCL de los linfomas B de bajo grado MALT sean el equivalente neoplásico de las células B de la zona marginal.
 
Tabla comparativa entre las células de la zona marginal y las células centrocitoides tumorales de linfomas de tipo MALT

 
ZM = Zona marginal; CCL = Centrocito-like; *Ocasionalmente expresa IgG
 
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Tejido linfoide cutáneo normal y adquirido: 

 
    El elemento linforeticular cutáneo más llamativo en la piel es la célula de Langerhans (LC). En individuos normales existen 70.000 CL y 20 linfocitos por cc de piel. Las células de Langerhans son débilmente fagocíticas presentando antígenos de la línea monocito/macrófago. Tienen una morfología dendrítica y residen en el plano justo por encima de la capa basal. Son S-100 +, CD1a +, HLA-DR II + y tienen ultrasestructuralmente gránulos de Birbek que las identifica.
    De los linfocitos T que residen intraepitelialmente, el 90% son células T maduras que expresan los receptores para células T alfa/beta y el resto gamma/delta. Los alfa/beta son mayoritariamente CD8 + y se encuentran distribuidos mayoritariamente suprabasalmente y se encuentran en contacto con los procesos de las CL. Los gamma/delta residen tanto en las capas suprabasales como en las vainas externas de la raíz de los folículos pilosos y mayoritariamente están constituidos por CD8+. Una mayor proporción de células gamma/delta se encuentran en la dermis pero siguen siendo menores en número que los alfa/beta.
    Los linfocitos cutáneos T de todos los tipos expresan una glicoproteína de superficie de 200 Kda reconocida por el anticuerpo HECA-452. La función de este anticuerpo no está clara pero pertenece a la familia de las selectinas o adresinas, responsables del "homing" linfocitario.
    Las dermatosis inflamatorias están caracterizadas por células T y linfocitos B diferenciados. Cuando un infiltrado contiene una proporción significativa de células B, la formación de folículos ocurre frecuentemente. Inicialmente agregados pequeños de células dendríticas aparecen en el interior de los acúmulos de linfocitos B para producir los folículos primarios. Éstos posteriormente sufren transformación blástica con la aparición de centros germinales reconocibles. Los folículos linfoides se observan en los infiltrados mixtos que resultan de picaduras por artrópodos, acompañando a neoplasias vasculares y en el espectro hiperplasia linfoide-linfomas de células B.
 
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Elementos no linfoides del ganglio linfático (Histiocitos y células reticulares): 

    Las células del sistema histiocitario están constituídas por dos grupos: las presentadoras de antígenos (células dendríticas) y las procesadoras de antígenos (células fagocíticas). Ambas derivan de una misma célula precursora de la médula ósea que se diferencia y pasa a la sangre periférica en forma de monocito. Después de entrar en los tejidos el monocito pasa a denominarse histiocito o macrófago.
    Los histiocitos tisulares se encuentran en la mayor parte de los compartimientos del GL. Pueden ser divididos en tres grupos: histiocitos sinusales, macrófagos con cuerpos tingibles y histiocitos paracorticales. Los histiocitos sinusales son las células involucradas primariamente en la fagocitosis de partículas extrañas y están localizados predominantemente en los senos del GL. Los macrófagos con cuerpos tingibles son las células fagocíticas de los centros germinales; en presencia de hiperplasia de los centros germinales estas células se hacen más numerosas; frecuentemente contienen restos nucleares cariorrexicos que derivan presumiblemente de la necrosis espontánea de células del centro germinal. Los macrófagos con cuerpos tingibles son promientes en los linfomas de altro grado de malignidad, relacionados probablemente con la necrosis tumoral. Los histiocitos paracorticales se encuentran en las regiones de células T. Estas células pueden ser numerosas en la hiperplasia del área paracortical, en la que éstas se hacen prominentes, produciendo un patrón moteado o apolillado.

Inmunohistoquímica:

    Todos los macrófagos del GL comparten muchas características histoquímicas y inmunohistoquímicas. Estas células contienen abundante fosfatasa ácida y esterasas inespecíficas. También presentan lisozima y alfa-1-antiquimiotripsina, aunque de forma menos intensa. Los macrófagos del GL también expresan HLA-DR, receptores del complemento y receptores para IgG.
    Se han desarrollado anticuerpos monoclonales que reaccionan contra monocitos y macrófagos aunque estos no son específicos. Algunos de los más usados son el LeuM5 (CD11c), LeuM3 (CD14) y el My4 (CD14). Anticuerpos desarrollados para estirpe linfoide o mieloide pueden reaccionar cruzadamente con los histiocitos: por eejmplo, los anticuerpos mieloides anti-CD4 y los anticuerpos My7 (CD13) y My9 (CD33). Los últimos tipicamente tiñen monocitos pero no macrófagos.
    Las células dendríticas son generalmente no fagocíticas y tienen como su principal función la presentación de antígenos a los linfocitos B o T. Incluyen las células dendríticas, las interdigitantes y las de Langerhans. Las células reticulares dendrítcas se encuentran en los folículos linfoides y presentan antígenos a los linfocitos B. Las células reticulares interdigitantes se encuentran en el paracórtex del GL y se cree que presentan antígenos a los linfocitos T. Las células de Langerhans también presentan antígenos a los linfocitoss T y son frecuentes en la piel.
    Las célula dendríticas carecen de enzimas lisosomales que tipicamente se observan en las células fagocíticas, aunque ambas, las células interdigitantes y las de Langerhans tienen bajos niveles de fosfatasas ácidas y esterasas no específcas localizadas en la región de Golgi. Todos los tipos de células dendríticas expresan HLA-DR y receptores del Fc de IgG. Las células dendríticas poseen receptores del complemento, tales como el C3d (CD21) y son negativas para la proteína S-100. En contraste, las células interdigitantes y las células de Langerhans que carecen de receptores para el complemento y son S-100 positivas.
 
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info@conganat.org

CopyRight Dr. Tomás Álvaro Naranjo, Dr. Ramón Bosch Príncep, Dra. Salomé Martínez González, Dra. Mª Teresa Salvadó Usach , 1998.
Última actualización: 01 noviembre 1998 22:08