Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica

Nº 978. Foro técnico

Procesamiento y tinción del lavado broncoalveolar

Francisco Borja Gutierrez Corres (TEAP)[1], Consuelo Del Campo Clemente (TEAP)[1], Elisa Cuero Ruiz (TEAP)[1], Maria Gloria Diaz Foncea[2], Maria Gloria Diaz Foncea[3]
(1) Hospital de Galdakao. ESPAÑA
(2) Hospital Galdakao Usansolo ESPAÑA
(3) Hospital Galdakao-Usansolo ESPAÑA

Resumen

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El lavado brocoalveolar, es una técnica de elección para el estudio citológico de las enfermedades intersticiales pulmonares y ha demostrado se muy útil en el diagnostico de las infecciones por gérmenes oportunistas en el pulmón.
 
Este tipo de muestra es mucho menos espesa que el material obtenido por aspiración, lo que permite su procesado mediante sistemas de centrifuga y centrífuga en incluso de filtros.
 
Los autores presentan algunas medidas que pueden ayudar en el trasporte y procesamiento citológico de los lavados brocoalveolares.
 

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Introduccion    

La citología o las extensiones citológicas son un conjunto de células independientes, procedentes de un tejido.
 
Las extensiones citológicas nos permiten el examen de células sueltas y no estructuradas de un tejido al microscopio.
 
Hoy en día es importante en el laboratorio de anatomía patológica, por ser un método de extracción barato, sin complicaciones y un procesado rápido.
 
La citología tiene la capacidad de detectar enfermedades neoplásicas en estadios iniciales, identificar numerosas infecciones, permite estimar pronóstico y respuesta al tratamiento en muchas enfermedades.
 
Nos vamos a centrar en el lavado broco alveolar, pues es una técnica de elección para el estudio citológico de las enfermedades intersticiales pulmonares y ha demostrado se muy útil en el diagnostico de las infecciones por gérmenes oportunistas en el pulmón.
 
El lavado broco alveolar esta agrupada dentro de la citología exfoliativa, que investiga las células atípicas, después de un escobillado o un raspado con instrumentos (cepillos, espátulas).
 
El técnico no es solo el encargado del procesamiento. Si no que también ayuda al patólogo a la extracción de muestras (PAAF) y al diagnóstico.
 
HISTORIA DE LA CITOLOGÍA
 
-VIRCHOW:
      “Teoría celular sobre el origen de la vida
-GEORGE PAPANICOLAU:
Observación de las células escamadas del epitelio vaginal de la rata, correlacionando sus hallazgos morfológicos con el estado hormonal del animal.
 
Paso de la investigación a la practica clínica en la patología ginecológica (neoplasia cervical y sus lesiones precursoras)
 
-MANNHEIM:
En 1931, primeros escritos en Europa, sobre la utilización de la técnica de la punción aspiración con aguja fina (PAAF).
 
-ACTUALIDAD:
Utiliza la técnica de la punción aspiración con aguja fina, con medios radiológicos, posibilitando el estudio de zonas mas profundas del organismo.

 

Material y Métodos    

EXTRACCION DE LA MUESTRA Y ENVIO AL LABORATORIO

 

El lavado broncoalveolar (BAL), es una técnica que consiste en la introducción, en un determinado segmento pulmonar, de suero salino fisiológico y posterior aspiración del mismo.

 

A través del fibroscopio se introduce entre 100 y 200 ml de líquido, recogiéndose mediante aspiración entre 30 y 70% de la cantidad introducida, la cual se depositara en un recipiente de plástico tipo anaclín.

 

 

REGISTRO Y DESCRIPCIÓN MACROSCOPICA

 

Registra la llegada al laboratorio de la muestra con la petición colocado un número, este número será el distintivo de la muestra durante todo el proceso.

Es de gran utilidad la descripción macroscópica, anotando la cantidad y el aspecto de la muestra (color y consistencia).

 

PROCESADO DEL MATERIAL CITOPATOLÓGICO

 

 

 

PROCESADO DE LA MUESTRA

 

Después de haber realizado la descripción de la muestra se emperezara el procesado de esta.

Primero una cantitidad de al menos 20 ml. se centrifugara a 1500 R.P.M. durante 10 minutos. Después se retirara el sobrenádate y con el sedimento resultante, realizaremos y citocentrifugado con el Citospin a 1500 R.P.M durante 5 minutos.

 

FIJACIÓN DE LAS MUESTRAS

 

Después de realizar las maniobras de procesado, las preparaciones citopatológicas deben sé fijadas, para interrumpir los procesos de degradación que aparecen tras la muerte celular:

 

Alcohol etílico 96º

Utilizado en nuestro laboratorio.

 

Metanol 100º, Propanol 80º, Isopropanol 80º.

 

                  Las muestras que realizamos la COLORACIÓN DE MAY-GRUMWALD-GIEMSA se    secaran al aire, no en alcohol.

 

TINCIÓN DE LAS MUESTRAS

 

Consisten aplicar diversas combinaciones de sustancias, colorantes a las extensiones previamente fijadas. El método mas recomendado es el Papanicolau.

Las coloraciones de rutina son de carácter policromo, permiten distinguir distintos matices (basofilia, anfofilia y eosinofilia) en las estructuras celulares a teñir.

 

 

                 COLORACIÓN PAPANICOLAOU

 

Utiliza tres colorantes:

 

-Hematoxilina de Harris (Colorea núcleos)

 

Filtrar a diario.

 

-Eosina alcohólica (E.A.)

 

Contiene verde luz, eosina y, marrón Bismark.

 

Naranja G (O.G.  ,Colorante citoplasmático)

Tiñe de naranja los citoplasmas celulares que contienen queratina.

 

Procedimiento:

 

-Agua………………………….. 30 seg.

-Hematoxilina de Harris……….. 1 min.

-Agua…………………………... 1 min.

-Alcohol clorhídrico 1%............. 10 seg.

-Agua…………………………... 1 min.

-Alcohol 96º…………………… 10 seg.

-Alcohol 96º………………..…. 10 seg.

-Orange G……………………… 1 mim.

-Alcohol 96º……………….…... 10 seg.

-Alcohol 96º…………………….10 seg.

-EA 50  …...................................... 4 min.

-Alcohol 96º……………….…... 10 seg.

-Alcohol 96º…………………….10 seg.

-Alcohol absoluto………….…... 10 seg.

-Alcohol absoluto……………….10 seg.

-Xileno…………….……….…... 10 seg.

- Xileno………………………….10 seg.

 -Montar

 

 

 

 

 

Resultados

 

-Núcleo: azul

-Citoplasmas: de verde a rojizo dependiendo de:

-Células secretoras o epitelio de revestimiento monoestratificado (verde suave).

-Células del epitelio de revestimiento poliestratificado (verde suave a rosa).

Células queratinizadas (rojo anaranjado)

 

 

     COLORACIÓN DE MAY-GRUMWALD-GIEMSA

 

Denominada panóptica de Pappenhein, se realiza sobre material secado al aire

Proporciona una percepción de los finos detalles citológicos, sobre los que se sustenta él diagnostico de malignidad, con detalles citológicos (vacuolas, granos de mucina), componente de fondo (matriz mixoide, colágeno).

 

Utiliza:

-Eosina-azul de metileno en solución según May-Grunwald modificado. (Merk)

-Azul-eosina-azul metileno según Giemsa en solución. (Merk)

-Tampón Sorensen (fosfato monosódico monohidrato y fosfato disódico dihidrato).

 

Procedimiento:

 

- Eosina-azul de metileno en solución según May-Grunwald modificado. (Merk)………………………….………..  3 min.

- Eosina-azul de metileno en solución según May-Grunwald modificado. (Merk) al 50% en tampón Sorensen……...3 min.

- Azul-eosina-azul metileno según Giemsa en solución. (Merk) al 10% en tampón Sorensen……………………….…15 min.

-Lavar en agua corriente.

- Tampón Sorensen (fosfato monosódico monohidrato y fosfato disódico dihidrato)………………………………………2 min.

-Alcohol 96º………………….… 10 seg.

-Alcohol 96º……………………. 10 seg.

-Alcohol absoluto………….….... 10 seg.

-Alcohol absoluto………………. 10 seg.

-Xileno…………….……….…... 10 seg.

-Xileno……………………….….10 seg.

 -Montar

 

 

 

 

Resultados

 

-Gránulos neutofilos: rosa

-Gránulos eosinofilos: marrón rojizo.

-Nucleolo: rosa.

-Eritrocitos maduros: naranja rosados.

-Núcleos celulares: azul violáceo.

-Citoplasma: azul claro a rosa.

 

 

OTRAS TÉCNICAS:

 

TÉCNICAS DE INMUNOCITOQUIMICA

Fijadas en acetona o teñidas.

 

TÉCNICAS ESPECIALES

 

Tuberculosis

Zielh-Neelsen

Auramina- rodamina.

Asbestosis

Digestión con hipoclorito sodico.

Hongos

PAS

Plata metemamina.

Hemosiderofagos

Azul de Perls

 

 

 

 

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Centrifuga -

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Material de la citocentrifuga -

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Citocentrifuga -

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Teñidor Automatico Papanicolaou -

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Bateria de tinción de Giemsa -

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Resultados    

 

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Papanicolaou 40x -

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Giemsa 40x -

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P.A.S 40X -

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Plata Metenamina 40x -

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Conclusiones    

-Este tipo de muestra es mucho menos espesa que el material obtenido por aspiración, lo que permite su procesado mediante sistemas de centrifuga y citocentrífuga en incluso de filtros.
-Para mejora la muestra se puede le puede añadir un ampolla de de Flumil 10% (acetilcisteina 300 mg) así deshará el moco y facilitara el procesado.
 
-En el envío de la muestras no se debe utilizar envases de cristal pues los macrófagos se adhieren al vidrio.

 
- Establecer procedimientos de trabajo adecuados, utilizando medidas técnicas apropiadas para evitar o minimizar la liberación de agentes biológicos en el lugar del trabajo.
 
 -Adopción de medidas seguras para la recepción, manipulación y transporte.
 
-En caso que después de haber realizado la citocentrifugación, el botón que obtenemos es muy grueso hacer una extensión de ese botón.
 

 

Bibliografía    

1 -Histología funcional texto y altas en color. Segunda edición. P.R. Wheater, H.G. Burkitt. Editorial Jims.

 

2 -Laboratorio de anatomía patológica. Raimundo García del Moral. Editorial Interamericana McGraw-Hill.

 

3 -Enfermería profesional, técnicas en enfermería. Dossier-Erb-Blais-Johnson-Tempel. Editorial Interamericana McGraw-Hill. Editorial Interamericana McGraw-Hill.

 

 

4 -Dorland diccionario enciclopédico ilustrado de medicina. 20 ediciones. Editorial Interamericana McGraw-Hill.

 

 

5 -Exámenes de laboratorio, técnicas microscópicas. C. Nezelof, P. Galle, N. Hinglais. Editorial Jims.

 

6 -Instituto de patología de las fuerzas armadas de los estados unidos de América (AFIP), Métodos Histotecniologicos.

Washington D.C. 1995.

 

7 -Laboratorio y altas de citología. José Maria Viguer, Raimundo García del Moral. Interamericana McGraw-Hill.

 

8 -Citología de secreciones y líquidos, Rafael Martínez Girón. Paraninfo- Thomson learninig.

 

 

Comentarios

- Maria Haydee Aunchayna Mary (07/05/2007 15:12:55)

Nosotros carecemos de citocentrifuga, lo que hace que ante resultados pobres,nos planteamos que con su auxilio los resultados serían mejores.Han realizado ustedes un estudio comparativo de los métodos.Por lo demas trabajamos en forma similar.
Nos hubiera gustado ver fotos, pensamos que los trabajos de la especialidad deben ir siempre acompañados de las misma pues es nuestro documento.
Saludos desde Uruguay, Montevideos Hospital Maciel MSP
Claudia, Maria Haydee

- FRANCISCO BORJA GUTIERREZ CORRES (07/05/2007 20:29:35)

Las fotos de la tecnica seran enviadas, Si no teieis citocentrifugadoras podes realizar por medio de la tecnica de filtros millipore o neucleopore.

- Alfredo Basilio Quiñones Ceballos (15/05/2007 15:56:07)

Gracias, me ha resultado útil su trabajo sobre todo por lo aplicable del mismo en la vida diaria de un laboratorio.

- ISABEL MARIA BROWN DURRUTHY (16/05/2007 5:56:01)

LIC. ISABEL BROWN
INSTITUTO NACIONAL DE ONCOLOGIA Y RADIO BIOLOGIA
C, HABANA . CUBA

ES UNA TECNICA BIEN DEFINIDA, ME GUSTO YA QUE LA HEMOS APLICADO, Y AHORA LA SEGUIREMOS APLICANDO, PARA UN MEJOR DIAGNOSTICO.

FELICITACIONES.
SALUDOS

- Irina hernandez Melendi (17/05/2007 16:56:42)

Muy interesante el trabajo, no utilizamos la citocentrífuga pero si hemos realizado esas tinciones en nuestro laboratorio.

- Noemi Isabel Gercek (20/05/2007 22:02:24)

Excelente y muy didáctico el resumen del trabajo, útil para la práctica de rutina. Me gustaría saber si han realizado algún estudio comparativo con los resultados obtenidos del procesamiento de muestras de esputo en fresco usando las mismas coloraciones.
Gracias.

- FRANCISCO BORJA GUTIERREZ CORRES (21/05/2007 11:38:50)

Las coloraciones que empleamos en los esputos y en los aspirados broncoalveolares, son las mismas, lo que cambia es el procesado de este tipo de muestras.
En el esputo, seleccionamos la zona y realizamos un extendido directo porta contra porta y en el aspirado broncoalveolar, primero centrifugamos y con el sedimento realizamos una extension porta contra porta.

muchas gracias por leer nuestra comunicación.
Un saludo

- Victor Leonel Argueta Sandoval (22/05/2007 5:25:25)

Es importante realizar estas técnicas en los líquidos o material aspirado, asi como en los lavados broncoalveolares. Nosotros también realizamos el bloque celular y realizamos las tinciones especiales en los extendidos y los bloques celulares. Hemos logrado varios bloques celulares de los lavados broncoalveolares.

- Ileana Franco Zunda (22/05/2007 14:48:38)

Es algo que necesitamos para mejorar el trabajo en esta línea. Gracias

- ANNY PEREZ RODRIGUEZ (03/06/2007 4:20:31)


Muy interesante su trabajo sobre todo la utilizacion de flumil al 10% que deshace el moco y por supuesto esto facilitara el procesado de la muestra.queria preguntarle si existe otro tipo de sustancia que pueda diluir el moco y asi obtener una muestra de mayor calidad.

- Mirta Garcia Jardon (04/06/2007 9:23:26)

Felicidades, muy demostrativa la técnica y preciosas las fotos. Gracias por compartir sus expeciencias con nosotros.

- Mirta Garcia Jardon (04/06/2007 9:25:53)

¿Pudieran ustedes enviarme la técnica que usan de plata metenamina? Las que hacemos aquí no quedan con la calidad requerida y tenemos bastantes casos de hongos como el que muestran en su foto. Gracias.
mirta@tiscali.co.za

- ELIXABETE FUENTES GUTIÉRREZ (30/06/2007 11:49:01)

muy interesante el trabajo, además me han gustado las imágenes.Está explicado de forma muy práctica. saludos

- ELIXABETE FUENTES GUTIÉRREZ (30/06/2007 11:50:08)

muy interesante el trabajo, además me han gustado las imágenes.Está explicado de forma muy práctica. saludos

- Maria Castellanos (04/02/2009 4:07:08)

Gracias por la información, muy interesante. Trabajo en un laboratorio de TB y tengo plata que quiero invertir en compra una citocentrifuga. Me podrian por favor orientar en el nombre de los accesorios extras que debo comprar ademas del equipo? Tambien agradeceria saber que marca es distribuida en Latinoamerica. Gracias!!

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