Nº 835. Foro técnico
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Miopatía Mitocondrial. Valor de la Tricrómica de Gomori para su diagnóstico histopatológico. Lic. Irina Hernández Melendi.[1], Tecn. Eduardo Boix Valdés[1], Tecn. Suset Suárez Argüelles[1], Tecn. Anamays Govín Chavez[1], Dra. Alma Torres Gómez de Cadiz Silva.[1], Dr. Rene Millares López[2] |
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Las Miopatías Mitocondriales se caracterizan por aumento del número, alteraciones de la forma, tamaño e inclusiones en el interior de las mitocondrias que se observan en los estudios de Microcopía Electrónica, pero uno de los hallazgos mas importantes observados con la Microscopía Óptica es la presencia de Fibras Rojas Rasgadas las cuales se pueden demostrar con técnicas histológicas especiales.
A propósito de un caso que le planteaban esta patología, nos motivamos a demostrar la utilidad de la Tecnica Tricromica de Gomori para la demostracion de estas fibras musculares en el diagnóstico de esta entidad.
Se recibió una muestra de tejido muscular estriado esquelético sin fijar en el Dpto. de Anatomía Patológica del Hospital Pediátrico Docente Juan Manuel Márquez, se tomaron fragmentos para Microscopía Electrónica y óptica a los cuales se le realizó coloraciones de Hematoxilina y Eosina y la Técnica Tricrómica de Gomori.
Se presentan fotos microscópicas demostrativas de los resultados.
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Las Miopatias Mitocondriales se caracterizan por alteraciones de las mitocondrias que se observan en el examen de Microscopía Electrónica pero uno de los hallazgos histopatológicos más importantes observados con la Microscopia óptica es la presencia de Fibras Rojas Rasgadas (FRR), las cuales se ponen de manifiesto con técnicas especiales.
Estas son enfermedades hereditarias con defectos de la función mitocondrial cuya presentación clínica y evolución están dominadas por la afección muscular. La mayoría de estas enfermedades presentan alteraciones de la cadena respiratoria y el diagnostico se establece por el cuadro clínico, la demostración de aumento del ácido láctico en sangre y LCR, y la biopsia de músculo estriado esquelético.
A medida que evoluciona la enfermedad se pone en evidencia la afección multisistémica con manifestaciones cardiacas, renales, endocrinas, en la retina y del sistema nervioso central y periférico.
El marcador morfológico que caracteriza a estos padecimientos es la presencia de fibras musculares aisladas que se tiñen de rojo en la tinción de Tricrómica Modificada de Gomori en tejido congelado. Dichas fibras están retraídas, de contornos irregulares que le dan un aspecto rasgado y con las Técnicas histoquímicas se demuestra un aumento de la actividad de enzimas oxidativas (Deshidrogenesa Succínica y NADH).
Con el microscopio electrónico se demuestra acumulos de mitocondrias en el subsarcolema y entre las miofibrillas. Las mitocondrias pueden ser de morfología normal o presentar alteraciones variadas con aumento de tamaño, irregularidad en las crestas y en ocasiones la presencia de inclusiones anormales tales como estructuras cristalinas y lípidos. Las inclusiones paracristalinas de naturaleza proteica son muy características con formas geométricas rectangulares y están situada entre las membranas externa e interna o en el interior de la cresta.
No todas las Miopatias Mitocondriales presentan FRR y su presencia, no es especifica de una entidad dada, sin embargo, su presencia permite apoyar el diagnostico de la Enfermedad de Luft y el Síndrome de Kearns-Sayre.
A propósito de un caso estudiado en nuestro centro que se le planteaba esta patología, nos motivamos a realizar una revisión sobre las técnicas histológicas a realizar en dicho estudio y específicamente el valor de la Técnica Tricrómica de Gomori.
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Para este trabajo se utilizaron muestras de tejido muscular estriado, las cuales llegaron sin fijar al Dpto. de Anatomía Patológica del Hospital Pediátrico docente Juan Manuel Márquez. Se tomaron fragmentos para el estudio de Microscopia Electrónica los cuales fueron fijados en glutaraldehido y el resto se envuelve en talco, se coloca en una cápsula de biopsia y se conserva en Nitrógeno líquido. Posteriormente se realizaron los cortes en un criostato y las secciones de tejido fueron coloreadas con Hematoxilina y Eosina y Tricrómica de Gomori. Para realizar la técnica Tricrómica de Gomori se utilizaron las siguientes soluciones de trabajo: 1.- Solución Colorante de Tricrómica de Gomori
Cromotropo 2R--------------0,6 grs. Verde rapido FCF-----------0,3 grs. Acido Fosfotungstico-------0,6 grs. Ácido Acético Glacial------1,0 mls Agua destilada--------------100 mls. Ajustar ph a 3,4 . 2.- Ácido Acético al 0,2 %. Agua destilada------------1000 mls Ácido Acético Glacial--------2 mls. 3.- Hematoxilina de Harris.
Procedimiento.
Luego se realizó el diagnostico con un microscopio óptico y se digitalizaron las imágenes demostrativas de los resultados.
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Mediante la coloración de Hematoxilina y Eosina se pusieron de manifiesto los núcleos de color azul y el citoplasma rosado. El citoplasma de las fibras dañadas se observa en forma de grumos con una coloración azul oscura alrededor de las fibras que indica acumulo de mitocondrias. Con la Tricrómica de Gomori se observan los núcleos de color rojo, el citoplasma en verde, los acumulos de mitocondrias y las fibras rasgadas de color rojo.
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La coloración de Hematoxilina y Eosina es una coloración de información general que orienta al patólogo sobre las posibles alteraciones morfológicas presentes en los tejidos, las cuales se confirman posteriormente con las coloraciones especiales. Con la coloración Tricrómica de Gomori los agregados Mitocondriales anormales aparecen bajo el sarcolema en las fases iniciales, pero en los cuadros de afectación grave pueden extenderse a todas las fibras. Con esta técnica se evidencia el aspecto de manchas rojas que las mitocondrias anormales le confieren a las fibras musculares, así como la irregularidad del contorno de las fibras, lo cual se observa claramente en el corte transversal, demostrándose las fibras rojas rotas o rasgadas. Es importante resaltar los cuidados desde el punto de vista técnico, principalmente relacionado con la temperatura ambiente del laboratorio para obtener los cortes por congelación, así como la precisión al pesar los reactivos y en el ajuste del pH adecuado en la solución de trabajo para evitar errores en el diagnostico posterior.
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Con este trabajo se demuestra que la Técnica Tricrómica de Gomori es útil para observar los acumulos de mitocondrias y la presencia de Fibras Rojas Rasgadas lo cual es de gran valor para emitir el diagnostico histopatológico de Miopatia Mitocondrial.
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1 - Cotrans Ramzi MD., Kumar Vinai MD., Collins Tucker MD. Patología Estructural y Funcional de Robbins. Sexta Edición Edit Mc Graw-hill-Interamericana. España.2000. 2 - 3 - Thompson Samuel W. Selected histochemical and histopathological metods, Charles C. Thomas, Springfield, IL, 1966. 4 - Sheehan , D.C. and Hrapchak B.B. Theory and practice of histotechnology, Battelle Memorial Institute, Columbus, OH, 1987. 5 - Ridaura Sanz Dra. Cecilia. Patologia. Vol 33, No. 1, pp 49-61, 1995. 6 - Hernández Melendi Irina y col. Aplicación de la Histopatología y la Microscopía Electrónica en las Enfermedades Musculares. 6to. Congreso Virtual Hispanoamericano de Patologia.Cuba. 2005. http://conganat.sld.cu/6CVHAP/
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- Gustavo Leonardo Ayala Álvarez (04/05/2007 14:30:47)
- Ernesto Barrios Grillo (05/05/2007 3:18:09)
- Juan Luis Perez Berenguer (30/05/2007 23:10:30)
- Isidro Machado (09/06/2007 23:41:53)
- Carmen Toledo Valdés (26/06/2007 1:54:16)
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fiogf49gjkf0dColoracion de Hematoxilina y Eosina a mayor aumento para observar la coloracion de nucleos y citoplasma de las fibras musculares.">
fiogf49gjkf0dMicrofotografia a mayor aumento con la coloración de Hematoxilina y Eosina donde se aprecia en el centro una miofibrilla con el citoplasma algo mas rojizo e irregular con respecto al resto.">
fiogf49gjkf0dMicrofotografia a mayor aumento con la coloración Tricrómica de Gomori demostrando la Fibra Roja Rasgada de la foto 1.">
fiogf49gjkf0dMicrofotografia que muestra una fibra irregular con grupos de mitocondrias en la perisferia de la celula que se tiñen de rojo con la coloración de Tricrómica de Gomori.">
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