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Material y Métodos
Se presentan 5 casos, de ellos 3 de lesiones mamarias, 1 de un branquioma y 1 de un carcinoma epidermoide fusocelular con aspecto seudo sarcomatoso. Las muestras tisulares fueron procesadas por el método de inclusión en parafina, cortadas a μm de grosor y teñidas con HE y AS. Los cortes fueron examinados bajo el microscopio óptico. Como control de la coloración se utilizó un corte de piel de un fragmento fijado y coloreado por los mismos métodos de procesamiento y tinción. Los resultados fueron analizados por el comité de Aseguramiento de la calidad de nuestro departamento, constituido por profesiones patólogos, tecnólogos de vasta experiencia.
Coloración de Ayaubs-Shkiar
Fijación: Formol al 10%, neutro
Cortes: Inclusión en parafina
Soluciones:
Solución (A) de Fascina ácida al 5%
Fascina ácida |
5gm. |
Agua destilada |
100cc |
Solución (B) de Azul de anilina y Orange G
Azul de anilina |
0,5gm |
Orange G |
2,0gm |
Ácido fosfotúngstico |
1,0gm |
Água destilada |
100,0cc |
Método
1-Xilol para desparafinar 3 pasos
2-Alcohol absoluto para deshidratar
3-Agua destilada
4-Solución A 3 minutos
5-Poner las láminas directamente en la solución B durante 45 minutos
6-Pasar las láminas por alcohol 95% x 3 cambios
7-Alcoholes
8-Xilol
9-Montar
Resultados
Queratina |
Rojo brillante |
Epitelio escamoso estratificado |
Gris |
Estrato espinoso, pre-queratina |
Naranja |
Tejido conectivo |
Azul oscuro |
Eritrocitos |
Rojo oscuro |
Caso 1. Paciente con lesión quística de la región lateral del cuello, cerca del ángulo de la mandíbula y el extremo superior del esternocleidomastoideo. Este paciente era portador de un carcinoma escamoso invasor queratinizante nacido en quiste branquial, la lesión cumplía los criterios de Chionh2, pero la presencia de queratina fue mejor evidenciada con la coloración de AS, como puede apreciarse en la composición, los resultados de la coloración fueron comparados con el control.
Caso 2. Paciente del sexo femenino, con nódulo del pezón, que no erosiona la piel, no presenta descarga por el pezón. Con la coloración de HE presentó una enfermedad proliferativa florida, con patrón acinar y micropapilar, es notable, el límite abrupto epitelio-estromal por el contraste entre el epitelio teñido de tonalidades del gris y el colágeno de azul, esto permitiría un estudio de la interfase epitelio-estromal con mayor información con la AS que con la HE, otra cosa que se puede apreciar en este caso es la densa colagenización del estroma, todo mejor evidenciado en la imagen 8
Caso 3. Paciente con adenopatía supraclavicular de consistencia pétrea, con sospecha de ser portador de una neoplasia maligna de pulmón, con la hematoxilina eosina se pudo apreciar el borramiento de la arquitectura normal del ganglio el cual presentaba una infiltración difusa por células de mediano a gran tamaño, con formación de seudo nódulos linfáticos y adopción de un patrón Castlemanoide, visible en la imagen 1, con la coloración de AS las células queratinizadas se distinguían de las no queratinizadas por contraste (imagen 2-4) en la imagen dos podemos apreciar con detalle el amoldamiento de las células y su queratinización. Un hallazgo adicional apreciado en la imagen 1 fue el hecho de el histiocito fagocítico que se apreciaba en el centro del campo, realmente lo que estaba fagocitando, predominantemente, eran hematíes que destacaban por su color rojo oscuro. La coloración AS permitió hacer el diagnóstico de metástasis en ganglio de carcinoma escamoso pobremente diferenciado con presencia de queratinización individual, de probable origen en pulmón.
Caso 4. Paciente del sexo masculino, con lesión con lesión de piel diagnosticada clínicamente como carcinoma epidermoide infiltrante, al microscopio y con coloración de hematoxilina y eosina se evidencia una lesión que tomaba el dermis superior e inferior, con ulceración de la epidermis suprayacente, no había “componente epitelial adyacente” en los bordes de la úlcera, por esta razón no se podía decir que la lesión tenía su origen en la epidermis; si así hubiera sido, la lesión primaria debió sufrir una ulceración total ya que los bordes no presentaban; ni aun, una lesión escamosa intraepitelial de ningún grado. En la imagen 1 se observa un corte de piel normal teñido con AS, para observar la queratina de la capa cornea y el color rojo brillante tomado por ella (menor aumento), en la 2 se observa el mismo corte a mayor aumento; la imagen 3 muestra el borde de la ulceración en la parte superior se aprecia una “masa de queratina”, de la epidermis normal; debajo de la epidermis, ya se puede ver la lesión constituida por células fusiformes; en la Imagen 4 se exhibe el centro de la úlcera, véase la combinación de hematíes en la superficie y células con queratinización individual, se tiñen diferentes; el fondo de la úlcera se aprecia en la 5, además de una reacción estromal fusocelular se observan células, también fusocelulares, con queratinización individual, a mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual
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Caso 1 Imagen 1 - fiogf49gjkf0d Panoramica de la lesión con AS
fiogf49gjkf0dPares del Quiste Branquial con un carcinoma escamoso.HEx100">
Caso 1 Imagen 2 - fiogf49gjkf0d Pares del Quiste Branquial con un carcinoma escamoso.HEx100
fiogf49gjkf0dPared del quiste branquial con carcinoma escamoso del revestimiento eptelial ASx100">
Caso 1 Imagen 3 - fiogf49gjkf0d Pared del quiste branquial con carcinoma escamoso del revestimiento eptelial ASx100
fiogf49gjkf0dA mayor aumento se puede apreciar la formación de queratina en los estratos más superficiales del epitelio tumoral.ASx200">
Caso 1 Imagen 4 - fiogf49gjkf0d A mayor aumento se puede apreciar la formación de queratina en los estratos más superficiales del epitelio tumoral.ASx200
fiogf49gjkf0dA mayoi aumento con la coloración de AS, la capa de queratina bellamente teñida ASx400">
Caso 1 Imagen 5 - fiogf49gjkf0d A mayoi aumento con la coloración de AS, la capa de queratina bellamente teñida ASx400
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Caso 1 Imagen 8 - fiogf49gjkf0d A mayoi aumento con la coloración de AS, la capa de queratina bellamente teñida ASx400
fiogf49gjkf0dEnfermedad ductal floriada no atípica del pezón. HEx100">
Caso 2 Imagen 1 - fiogf49gjkf0d Enfermedad ductal floriada no atípica del pezón. HEx100
fiogf49gjkf0dEnfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.HEx100">
Caso 2 Imagen 2 - fiogf49gjkf0d Enfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.HEx100
fiogf49gjkf0dEnfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.HEx100">
Caso 2 Imagen 3 - fiogf49gjkf0d Enfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.HEx100
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Caso 2 Imagen 4 - fiogf49gjkf0d Enfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.ASx100
fiogf49gjkf0dA mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx200">
Caso 2 Imagen 5 - fiogf49gjkf0d A mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx200
fiogf49gjkf0dA mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx200">
Caso 2 Imagen 6 - fiogf49gjkf0d A mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx200
fiogf49gjkf0dA mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx400">
Caso 2 Imagen 7 - fiogf49gjkf0d A mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx400
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Caso 3 Imagen 1 - fiogf49gjkf0d
fiogf49gjkf0dSe apreciaban grupos de células con amoldamiento nuclear que con la coloracion de AS se evidenciaba que se encontraban queratinizadas. ASx200">
Caso 3 Imagen 2 - fiogf49gjkf0d Se apreciaban grupos de células con amoldamiento nuclear que con la coloracion de AS se evidenciaba que se encontraban queratinizadas. ASx200
fiogf49gjkf0dUn campo donde puede apreciarse la diferencia entre los hematies y las cálulas epiteliales con queratinización individual.ASx200">
Caso 3 Imagen 3 - fiogf49gjkf0d Un campo donde puede apreciarse la diferencia entre los hematies y las cálulas epiteliales con queratinización individual.ASx200
fiogf49gjkf0dSe observaron histiocitos fagocíticos, con la coloración de AS se pudieron identificar exactamente los hematies fagocitados.x100">
Caso 3 Imagen 4 - fiogf49gjkf0d Se observaron histiocitos fagocíticos, con la coloración de AS se pudieron identificar exactamente los hematies fagocitados.x100
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Caso 4 Imagen 1 - fiogf49gjkf0d En la imagen 1 se observa un corte de piel normal teñido con AS, para observar la queratina de la capa cornea y el color rojo brillante tomado por ella
fiogf49gjkf0den la 2 se observa el mismo corte a mayor aumento;">
Caso 4 Imagen 2 - fiogf49gjkf0d en la 2 se observa el mismo corte a mayor aumento;
fiogf49gjkf0da imagen 3 muestra el borde de la ulceración en la parte superior se aprecia una “masa de queratina”, de la epidermis normal; debajo de la epidermis, ya se puede ver la lesión constituida por células fusiformes;">
Caso 4 Imagen 3 - fiogf49gjkf0d a imagen 3 muestra el borde de la ulceración en la parte superior se aprecia una “masa de queratina”, de la epidermis normal; debajo de la epidermis, ya se puede ver la lesión constituida por células fusiformes;
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Caso 4 Imagen 4 - fiogf49gjkf0d en la Imagen 4 se exhibe el centro de la úlcera, véase la combinación de hematíes en la superficie y células con queratinización individual, se tiñen diferentes;
fiogf49gjkf0del fondo de la úlcera se aprecia en la 5, además de una reacción estromal fusocelular se observan células, también fusocelulares, con queratinización individual">
Caso 4 Imagen 5 - fiogf49gjkf0d el fondo de la úlcera se aprecia en la 5, además de una reacción estromal fusocelular se observan células, también fusocelulares, con queratinización individual
fiogf49gjkf0da mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual">
Caso 4 Imagen 6 - fiogf49gjkf0d a mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual
fiogf49gjkf0da mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual">
Caso 4 Imagen 7 - fiogf49gjkf0d a mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual
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Discusión
Es innegable que los resultados pudieron sospecharse con la HE pero la AS permitió confirmar el diagnóstico en los casos 1-2, y hacer el diagnóstico en el caso 3. Estamos de acuerdo en que las técnicas modernas hacen innecesario “la vuelta atrás”, como pensaran los investigadores de amplios recursos pero los países del Tercer Mundo, llamados eufemísticamente en vías de desarrollo, que por lo general no cuentan con un prepuesto “generoso”, encontrarán una “esperanza”, en esta solución, y la posibilidad de contar con una evidencia más con la cual estar más cerca de la verdad (que de todas formas va seguir siendo relativa, sin caer en nihilismos). Con estas técnicas “viejas” no se trata, “Contrariamente a lo que alguno pudiera pensar, de dirigir la mirada al pasado, buscando soluciones adoptadas en la patología de años pasados, sino que miran al futuro”, como bien dice García Rojo, en el prologo del Manual de Procedimientos en tiempos Difíciles (Manual), de Martínez et al1; y sigue opinando García Rojo en el manual referido “Muchos patólogos de los llamados países desarrollados encontrarán especialmente útil este texto…”; “Estoy convencido que muchos laboratorios privados de nuestra especialidad, que no es precisamente la más rentable económicamente, encontrarán en este manual una solución práctica para problemas de naturaleza muy similar a la que se plantean en estos pequeños laboratorios”. Estamos claros que García Rojo se refería a las soluciones dadas en el manual pero es que la nueva solución presentada es de la misma naturaleza que las presentadas en el manual e irá, en el futuro, a engrosar el manual. En pocas palabras le sirve a aquellos que tienen escasos recursos económicos pero también a los que tienen muchos recursos pero quieren reducir los costes. Claro está que la reducción de los costes no debe ir aparejado de un menoscabo de la calidad diagnóstica y es por esta razón que la utilidad de la coloración, por parte nuestra, está siendo objeto de investigación. No se nos escapa que es necesario comparar nuestros resultados con “estándares de oro”, es decir mediante el inmunomarcaje de la queratina y las células mioepiteliales, por ej, con vistas a obtener los siguientes indicadores: sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo y eficacia; sin embargo, el diagnóstico anatomopatológico de las pacientes con diferentes lesiones fue confirmado clínicamente. El comité de calidad de nuestro departamento confirmó el valor diagnóstico de la coloración por la inspección al microscopio óptico.
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