Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica

803. Foro técnico

Valor Diagnóstico de la Coloración de “Ayaubs-Shkiar”, en las lesiones mamarias. Una alternativa para tiempos difíciles.

Omaira Greck Valdés[1], Walter Marcial Martínez Rodríguez[2], Magalis Rodríguez Concepción[2]
(1) Hospial Docente Dr. León Cuervo Rubio, Pinar del Río CUBA
(2) Hospital Universitario Dr León Cuervo Rubio, Pinar del Río CUBA

Resumen

lay:none">fiogf49gjkf0dLa coloración de  “Ayaubs-Shkiar” (AS) se empleaba en el diagnóstico de la prequeratina y la queratina.

Objetivo

  • Presentar el valor diagnóstico de la coloración de AS, en el diagnóstico de las lesiones mamarias
  • Presentar el valor diagnóstico de la coloración de AS, en el diagnóstico de las lesiones de otros sitios anatómicos

Se presentan 5 casos, de ellos 3 de lesiones mamarias, 1 de un branquioma y 1 de un carcinoma epidermoide fusocelular con aspecto seudo sarcomatoso. Las muestras tisulares fueron procesadas por el método de inclusión en parafina, cortadas a μm de grosor y teñidas con HE y AS. Los cortes fueron examinados bajo el microscopio óptico. Como control de la coloración se utilizó un corte de piel de un fragmento fijado y coloreado por los mismos métodos de procesamiento y tinción. Los resultados fueron analizados por el comité de Aseguramiento de la calidad de nuestro departamento, constituido por profesiones patólogos, tecnólogos de vasta experiencia.

Conclusiones La coloración de AS, resulta una solución alternativa para el estudio de lesiones mamarias tanto benignas como malignas; pero además, para confirmar el diagnostico de queratina en el caso de carcinomas escamosos pobremente diferenciados, pero también puede ser usada en la identificación dehematies, siempre pensando en la reducción e los costes pero sin descuidar la calidad, es complementaria a la coloración de rutina

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Introduccion    

La coloración de  “Ayaubs-Shkiar” (AS) se empleaba en el diagnóstico de la prequeratina y la queratina. Después del advenimiento de técnicas más modernas de identificación se ha dejado de emplear, al menos hasta donde conocemos; sin embargo, el “período especial”1, nos llevó a tener que adoptar medidas de restricción del consumo y definición muy precisa de las prioridades para resistir, desarrollarnos y vencer; al verse afectadas la tercera parte de nuestras relaciones internacionales; la carencia de recursos por limitaciones serias en la exportación e importación y afectaciones a los planes de desarrollo económico-social y el nivel de vida de la población. Lo anterior aguzó el ingenio de todos nuestros investigadores lo que trajo como resultado la búsqueda de una serie de soluciones alternativas los problemas surgidos en el calor de nuestro trabajo diario1contenidas en un manual confeccionado con el objetivo de compartir estas soluciones, ya ofrecidas por los investigadores de nuestro departamento al resto de los histotecnólogos y citotecnólogos de dentro y fuera de nuestro país. La alternativa que brindamos en nuestro trabajo es el resultado de la explotación del ingenio de nuestros innovadores y racionalizadores. Las limitaciones expresadas nos llevaron a buscar en los manuales clásicos de técnicas de tinción, conjuntamente las limitaciones en el diagnóstico de las lesiones mamarias impulsaron nuestra interés en encontrar una técnica de tinción que nos diera detalles adicionales a los ofrecidos por la coloración de Hematoxilina y Eosina, es así que de manera experimental hemos comenzado a estudiar las lesiones mamarias con EA y AS de manera rutinaria, en este trabajo presentamos nuestros resultados preliminares.

 

Material y Métodos    

Se presentan 5 casos, de ellos 3 de lesiones mamarias, 1 de un branquioma y 1 de un carcinoma epidermoide fusocelular con aspecto seudo sarcomatoso. Las muestras tisulares fueron procesadas por el método de inclusión en parafina, cortadas a μm de grosor y teñidas con HE y AS. Los cortes fueron examinados bajo el microscopio óptico. Como control de la coloración se utilizó un corte de piel de un fragmento fijado y coloreado por los mismos métodos de procesamiento y tinción. Los resultados fueron analizados por el comité de Aseguramiento de la calidad de nuestro departamento, constituido por profesiones patólogos, tecnólogos de vasta experiencia.

 

Coloración de  Ayaubs-Shkiar

Fijación: Formol al 10%, neutro

Cortes: Inclusión en parafina

Soluciones:

Solución (A) de Fascina ácida al 5%

 

Fascina ácida

5gm.

Agua destilada

100cc

 

Solución (B) de Azul de anilina y Orange G

 

Azul de anilina

0,5gm

Orange G

2,0gm

Ácido fosfotúngstico

1,0gm

Água destilada

100,0cc

 

 

Método

 

1-Xilol para desparafinar 3 pasos

2-Alcohol absoluto para deshidratar

3-Agua destilada

4-Solución A 3 minutos

5-Poner las láminas directamente en la solución B durante 45 minutos

6-Pasar las láminas por alcohol 95% x 3 cambios

7-Alcoholes

8-Xilol

9-Montar

Resultados

Queratina

Rojo brillante

Epitelio escamoso estratificado

Gris

Estrato espinoso, pre-queratina

Naranja

Tejido conectivo

Azul oscuro

Eritrocitos

Rojo oscuro

 

Caso 1. Paciente con lesión quística de la región lateral del cuello, cerca del ángulo de la mandíbula y el extremo superior del esternocleidomastoideo. Este paciente era portador de un carcinoma escamoso invasor queratinizante nacido en quiste branquial, la lesión cumplía los criterios de Chionh2, pero la presencia de queratina fue mejor evidenciada con la coloración de AS, como puede apreciarse en la composición, los resultados de la coloración fueron comparados con el control.

Caso 2. Paciente del sexo femenino, con nódulo del pezón, que no erosiona la piel, no presenta descarga por el pezón. Con la coloración de HE presentó una enfermedad proliferativa florida, con patrón acinar y micropapilar, es notable, el límite abrupto epitelio-estromal por el contraste entre el epitelio teñido de tonalidades del gris y el colágeno de azul, esto permitiría un estudio de la interfase epitelio-estromal con mayor información con la AS que con la HE, otra cosa que se puede apreciar en este caso es la densa colagenización del estroma, todo mejor evidenciado en la imagen 8  

Caso 3. Paciente con adenopatía supraclavicular de consistencia pétrea, con sospecha de ser portador de una neoplasia maligna de pulmón, con la hematoxilina eosina se pudo apreciar el borramiento de la  arquitectura normal del ganglio el cual presentaba una infiltración difusa por células de mediano a gran tamaño, con formación de seudo nódulos linfáticos y adopción de un patrón Castlemanoide, visible en la imagen 1, con la coloración de AS las células queratinizadas se distinguían de las no queratinizadas por contraste (imagen 2-4) en la imagen dos podemos apreciar con detalle el amoldamiento de las células y su queratinización. Un hallazgo adicional apreciado en la imagen 1 fue el hecho de el histiocito fagocítico que se apreciaba en el centro del campo, realmente lo que estaba fagocitando, predominantemente, eran hematíes que destacaban por su color rojo oscuro. La coloración AS permitió hacer el diagnóstico de metástasis en ganglio de carcinoma escamoso pobremente diferenciado con presencia de queratinización individual, de probable origen en pulmón.

Caso 4. Paciente del sexo masculino, con lesión con lesión de piel diagnosticada clínicamente como carcinoma epidermoide infiltrante, al microscopio y con coloración de hematoxilina y eosina se evidencia una lesión que tomaba el dermis superior e inferior, con ulceración de la epidermis suprayacente, no había “componente epitelial adyacente” en los bordes de la úlcera, por esta razón no se podía decir que la lesión tenía su origen en la epidermis; si así hubiera sido, la lesión primaria debió sufrir una ulceración total ya que los bordes no presentaban; ni aun, una lesión escamosa intraepitelial de ningún grado. En la imagen 1 se observa un corte de piel normal teñido con AS, para observar la queratina de la capa cornea y el color rojo brillante tomado por ella (menor aumento), en la 2 se observa el mismo corte a mayor aumento; la imagen 3 muestra el borde de la ulceración en la parte superior se aprecia una “masa de queratina”, de la epidermis normal; debajo de la epidermis, ya se puede ver la lesión constituida por células fusiformes; en la Imagen 4 se exhibe el centro de la úlcera, véase la combinación de hematíes en la superficie y células con queratinización individual, se tiñen diferentes; el fondo de la úlcera se aprecia en la 5, además de una reacción estromal fusocelular se observan células, también fusocelulares, con queratinización individual, a mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual

 

Caso 1 Imagen 1 - <div style=fiogf49gjkf0dPanoramica de la lesión con AS">
Caso 1 Imagen 1 -

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Panoramica de la lesión con AS


Caso 1 Imagen 2 - <div style=fiogf49gjkf0dPares del Quiste Branquial con un carcinoma escamoso.HEx100">
Caso 1 Imagen 2 -

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Pares del Quiste Branquial con un carcinoma escamoso.HEx100


Caso 1 Imagen 3 - <div style=fiogf49gjkf0dPared del quiste branquial con carcinoma escamoso del revestimiento eptelial ASx100">
Caso 1 Imagen 3 -

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Pared del quiste branquial con carcinoma escamoso del revestimiento eptelial ASx100


Caso 1 Imagen 4 - <div style=fiogf49gjkf0dA mayor aumento se puede apreciar la formación de queratina en los estratos más superficiales del epitelio tumoral.ASx200">
Caso 1 Imagen 4 -

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A mayor aumento se puede apreciar la formación de queratina en los estratos más superficiales del epitelio tumoral.ASx200


Caso 1 Imagen 5 - <div style=fiogf49gjkf0dA mayoi aumento con la coloración de AS, la capa de queratina bellamente teñida ASx400">
Caso 1 Imagen 5 -

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A mayoi aumento con la coloración de AS, la capa de queratina bellamente teñida ASx400


Caso 1 Imagen 8 - <div style=fiogf49gjkf0dA mayoi aumento con la coloración de AS, la capa de queratina bellamente teñida ASx400">
Caso 1 Imagen 8 -

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A mayoi aumento con la coloración de AS, la capa de queratina bellamente teñida ASx400


Caso 2 Imagen 1 - <div style=fiogf49gjkf0dEnfermedad ductal floriada no atípica del pezón. HEx100">
Caso 2 Imagen 1 -

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Enfermedad ductal floriada no atípica del pezón. HEx100


Caso 2 Imagen 2 - <div style=fiogf49gjkf0dEnfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.HEx100">
Caso 2 Imagen 2 -

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Enfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.HEx100


Caso 2 Imagen 3 - <div style=fiogf49gjkf0dEnfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.HEx100">
Caso 2 Imagen 3 -

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Enfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.HEx100


Caso 2 Imagen 4 - <div style=fiogf49gjkf0dEnfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.ASx100">
Caso 2 Imagen 4 -

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Enfermedad proliferativa ductal florida no atípica del pezón.ASx100


Caso 2 Imagen 5 - <div style=fiogf49gjkf0dA mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx200">
Caso 2 Imagen 5 -

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A mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx200


Caso 2 Imagen 6 - <div style=fiogf49gjkf0dA mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx200">
Caso 2 Imagen 6 -

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A mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx200


Caso 2 Imagen 7 - <div style=fiogf49gjkf0dA mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx400">
Caso 2 Imagen 7 -

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A mayor aumento se observa la el contraste abrupto entre entre el componente epitelial y estroma intralobular de la interfase epitelio estromal gracias a la tinción azul del colágeno en comparación con el componente epitelial que se tiñe de tonalidades del gris.ASx400


Caso 3 Imagen 1 - <div style=fiogf49gjkf0d">
Caso 3 Imagen 1 -

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Caso 3 Imagen 2 - <div style=fiogf49gjkf0dSe apreciaban grupos de células con amoldamiento nuclear que con la coloracion de AS se evidenciaba que se encontraban queratinizadas. ASx200">
Caso 3 Imagen 2 -

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Se apreciaban grupos de células con amoldamiento nuclear que con la coloracion de AS se evidenciaba que se encontraban queratinizadas. ASx200


Caso 3 Imagen 3 - <div style=fiogf49gjkf0dUn campo donde puede apreciarse la diferencia entre los hematies y las cálulas epiteliales con queratinización individual.ASx200">
Caso 3 Imagen 3 -

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Un campo donde puede apreciarse la diferencia entre los hematies y las cálulas epiteliales con queratinización individual.ASx200


Caso 3 Imagen 4 - <div style=fiogf49gjkf0dSe observaron histiocitos fagocíticos, con la coloración de AS se pudieron identificar exactamente los hematies fagocitados.x100">
Caso 3 Imagen 4 -

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Se observaron histiocitos fagocíticos, con la coloración de AS se pudieron identificar exactamente los hematies fagocitados.x100


Caso 4 Imagen 1 - <div style=fiogf49gjkf0dEn la imagen 1 se observa un corte de piel normal teñido con AS, para observar la queratina de la capa cornea y el color rojo brillante tomado por ella">
Caso 4 Imagen 1 -

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En la imagen 1 se observa un corte de piel normal teñido con AS, para observar la queratina de la capa cornea y el color rojo brillante tomado por ella


Caso 4 Imagen 2 - <div style=fiogf49gjkf0den la 2 se observa el mismo corte a mayor aumento;">
Caso 4 Imagen 2 -

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en la 2 se observa el mismo corte a mayor aumento;


Caso 4 Imagen 3 - <div style=fiogf49gjkf0da imagen 3 muestra el borde de la ulceración en la parte superior se aprecia una “masa de queratina”, de la epidermis normal; debajo de la epidermis, ya se puede ver la lesión constituida por células fusiformes;">
Caso 4 Imagen 3 -

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a imagen 3 muestra el borde de la ulceración en la parte superior se aprecia una “masa de queratina”, de la epidermis normal; debajo de la epidermis, ya se puede ver la lesión constituida por células fusiformes;


Caso 4 Imagen 4 - <div style=fiogf49gjkf0den la Imagen 4 se exhibe el centro de la úlcera, véase la combinación de hematíes en la superficie y células con queratinización individual, se tiñen diferentes;">
Caso 4 Imagen 4 -

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en la Imagen 4 se exhibe el centro de la úlcera, véase la combinación de hematíes en la superficie y células con queratinización individual, se tiñen diferentes;


Caso 4 Imagen 5 - <div style=fiogf49gjkf0del fondo de la úlcera se aprecia en la 5, además de una reacción estromal fusocelular se observan células, también fusocelulares, con queratinización individual">
Caso 4 Imagen 5 -

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el fondo de la úlcera se aprecia en la 5, además de una reacción estromal fusocelular se observan células, también fusocelulares, con queratinización individual


Caso 4 Imagen 6 - <div style=fiogf49gjkf0da mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual">
Caso 4 Imagen 6 -

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a mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual


Caso 4 Imagen 7 - <div style=fiogf49gjkf0da mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual">
Caso 4 Imagen 7 -

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a mayor aumento (imagen 6 y 7) se observan con mayor detalle. La lesión del paciente fue diagnosticada como: Carcinoma epidermoide pobremente diferenciado, fusocelular, con reacción seudosarcomatosa del estroma y presencia en el tumor, de células con queratinización individual




Resultados    

Tabla I. Diagnóstico Clínico y Resultados del Estudio Histopatológico de Rutina y con la Tinción de AS, de los casos presentados.

Clase

Objeto de Estudio

Tejido

H&E

AS

Diag Clínico

Caso 1

Formación de Queratina

Quiste branquial

±

+

I

Caso 2

Interfase Epitelio estromal

Mama

±

Permite visualizar con mayor nitidez CME y frontera epitelio estromal

II

Caso 3

Formación de queratina y presencia de hematíes

Ganglio

-

+

III

Caso 4

Formación de queratina por el tumor

Piel

-

+

IV

Fuente. Archivos Del Servico de Patología del Hospital “León Cuero Rubio”

Leyenda: I-Branquioma; II-Papilomatosis Florida del Pezón; III-Metástasis de Carcinoma escamoso de pulmón, en ganglio; IV-Carcinoma  epidermoide ulcerado; CME-Células Mio-Epiteliales. 

 

Discusión    

Es innegable que los resultados pudieron sospecharse con la HE pero la AS permitió confirmar el diagnóstico en los casos 1-2, y hacer el diagnóstico en el caso 3. Estamos de acuerdo en que las técnicas modernas hacen innecesario “la vuelta atrás”, como pensaran los investigadores de amplios recursos pero los países del Tercer Mundo, llamados eufemísticamente en vías de desarrollo, que por lo general no cuentan con un prepuesto “generoso”, encontrarán una “esperanza”, en esta solución, y la posibilidad de contar con una evidencia más con la cual estar más cerca de la verdad (que de todas formas va seguir siendo relativa, sin caer en nihilismos). Con estas técnicas “viejas” no se trata, Contrariamente a lo que alguno pudiera pensar, de dirigir la mirada al pasado, buscando soluciones adoptadas en la patología de años pasados, sino que miran al futuro”, como bien dice García Rojo, en el prologo del Manual de Procedimientos en tiempos Difíciles (Manual), de Martínez et al1; y sigue opinando García Rojo en el manual referido “Muchos patólogos de los llamados países desarrollados encontrarán especialmente útil este texto…”; “Estoy convencido que muchos laboratorios privados de nuestra especialidad, que no es precisamente la más rentable económicamente, encontrarán en este manual una solución práctica para problemas de naturaleza muy similar a la que se plantean en estos pequeños laboratorios”. Estamos claros que García Rojo se refería a las soluciones dadas en el manual pero es que la nueva solución presentada es de la misma naturaleza que las presentadas en el manual e irá, en el futuro, a engrosar el manual. En pocas palabras le sirve a aquellos que tienen escasos recursos económicos pero también a los que tienen muchos recursos pero quieren reducir los costes. Claro está que la reducción de los costes no debe ir aparejado de un menoscabo de la  calidad diagnóstica y es por esta razón que la utilidad de la coloración, por parte nuestra, está siendo objeto de investigación. No se nos escapa que es necesario comparar nuestros resultados con “estándares de oro”, es decir mediante el inmunomarcaje de la queratina y las células mioepiteliales, por ej, con vistas a obtener los siguientes indicadores: sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo y eficacia; sin embargo, el diagnóstico anatomopatológico de las pacientes con diferentes lesiones fue confirmado clínicamente. El comité de calidad de nuestro departamento confirmó el valor diagnóstico de la coloración por la inspección al microscopio óptico.        

 

Conclusiones    

La tinción de AS es una valiosa herramienta que complementa el diagnóstico anatomopatológico, en aquellos países que no pueden disponer de la Inmunohistoquímica. Las numerosas imágenes dan fe de su utilidad en el estudio de la interfase epitelio estromal de la mama, en la identificación de la queratina en diferentes lesiones: carcinoma pobremente diferenciado, metástasis de carcinoma en ganglio, en el branquioma.       

 

 

Bibliografía    

1-Martínez WM, Pérez Reyes AG. Manual de procedimientos en tiempos difíciles. Http://conganat.org/7cvhap

2- Chionh EH, Pham VH, Cooke RA, Gough IR. Aetiology of Branchial Cysts. Aust NZJ Surg 1949, 19:109-121.

 

Comentarios

- Maria Laura Haramboure (08/05/2007 19:20:16)

Muy útil y con hermosas fotos. Gracias

- Mirta Garcia Jardon (02/06/2007 14:50:17)

Walter, mis saludos y disculpa mi ignorancia, ¿ustedes quieren decir que usaron fuchina (fucsina) ácida? Es evidente que el azul de anilina la hace parecer mucho una tricrómica de Mallory o Masson y de ser así (de usar la dichosa fuchina) sería muy buena en lugares de pocos recursos como sustitutos de las citokeratinas y decididamente más barata si la encontraste de valor.

- LILIA MARGARITA BERNAL MONRAGÓN (23/06/2007 0:28:42)

Felicidades!!! no cabe duda de que la necesidad puede ser propicia para que se desarrolle el ingenio; me gustó el contraste logrado en las imágenes; en su mayoría excelentes tomas, nítidas. Definitivamente, cuando se tiene disposición, es factible realizar investigación, y aportaciones prácticas como en éste caso.


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