9º Congreso Virtual Hispanoamericano de Anatomía Patológica

Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica

Nº 729. Comunicación libre

Direccion de contacto
lucia.glez@infomed.sld.cu

Efecto de gas ozono sobre la morfología de diferentes tejidos de ratas

Dra. Lucía González Núñez^[1], Dr. Hilario Gómez Barry^[2], Dr. Ernesto Barber Gutiérrez^[3], Dra. Saray del Rio Brito^[3], Dr. Carlos Ugarte^[4]
(1) Instituto de Nefrología "Dr. Abelardo Buch López", C. Habana, Cuba CUBA
(2) Instituto de Nefrologia “ Dr Abelardo Buch López”C. Habana, Cuba, CUBA
(3) Instituto de Ciencias Básicas y Preclínicas “Victoria de Girón”,C. Habana, Cuba, CUBA
(4) Hospital “Hermanos Ameijeiras”,C. Habana, Cuba CUBA

Resumen

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A principio de los años 90 el gas ozono se utilizó experimentalmente por investigadores de nuestra institución como medio de contraste sustituyendo al yodo en modelos experimentales en perro, obteniéndose resultados indistinguibles del método usado tradicionalmente para visualizar la aorta abdominal y sus ramas. Para la introducción del uso del ozono como medio de contraste es necesario demostrar su inocuidad mediante la administración del gas y el estudio morfológico y funcional de los tejidos . Para este estudio se utilizaron 18 ratas Wistar machos de 300 a 350 gramos de peso y de cuatro a ocho meses de edad que se dividieron en tres grupos: un grupo control negativo, un grupo control positivo y uno experimental. Se llegó a la aorta y vasos ilíacos mediante incisión abdominal previa anestesia, se cateterizaron las arterias ilíacas primitivas 1 cm por encima de las arterias renales y se insufló ozono u oxígeno en bolo lentamente durante 15 minutos, o nada (control negativo), se retiró el catéter y después de aclaración plasmática y toma de muestra para estudios funcionales se sacrificaron los animales y se tomó muestra de hígado , bazo y riñón los que se fijaron en glutaraldehido –paraformaldehido y se procesaron según técnicas convencionales para microscopia óptica y electrónica. En las observaciones por microscopía de luz no se encontraron alteraciones significativas en ninguno de los tres órganos, lo que ratifica en el caso del riñón observaciones de estudios anteriores. En microscopía electrónica se encontró ligera fibrosis periportal en un caso y aumento de imágenes de apoptosis en otro en las muestras de hígado. Las muestras de bazo y riñón presentaron estructura normal.

Es una tendencia actual utilizar métodos de curación basados en los procesos biológicos naturales del organismo y en su interacción con el medio, uno de estos métodos es la ozonoterapia, que está probando ser un método eficaz contra muchas enfermedades tanto agudas como crónicas. Una de las primeras formas en que se utilizó el ozono con fines terapéuticos fue a principios del siglo pasado durante la Primera Guerra Mundial en el tratamiento de heridas y fístulas de guerra por el médico alemán A. Wolf, posteriormente el dentista E.A. Fisch empezó a aplicar ozono como bactericida en la cirugía dental. En 1920, el médico alemán Henscen lo inyecta intramuscularmente mezclado con sangre extraída del propio paciente (autohemoterapia). Durante los años 30 y 40 del propio siglo la ozonoterapia empezó a ser conocida fuera de Alemania y en la actualidad se ha extendido a muchos países. En la literatura científica en estos momentos se exponen diversas propiedades terapéuticas del ozono aplicado al organismo humano. Primeramente debido a su gran capacidad oxidante posee un alto poder bactericida, virucida y fungicida (1), aplicado directamente a las heridas y úlceras infectadas y otras lesiones dermatológicas, el ozono destruye los gérmenes patógenos. En estos casos se emplea en baños gaseosos de ozono o agua ozonizada. Mucho mas extendido es el uso de la mezcla de ozono con aceites vagetales (2), la interacción de estos elementos brinda una mezcla de componentes químicos como ozónidos y peróxidos que poseen propiedades germicidas (3),cuando estos procesos tienen lugar dentro del organismo se plantea que ocurre una oxidación de la envoltura externa capsular de virus y bacterias, lo que permite que los peróxidos ataquen al ADN y ARN y provoque la muerte del germen. Otra propiedad del ozono es que actúa sobre los ácidos grasos no saturados de la membrana de los glóbulos rojos aumentando su elasticidad y los hematíes se vuelven mas flexibles, además altera la carga eléctrica de su membrana disminuyendo la agregabilidad de los glóbulos rojos por un fenómeno de repulsión eléctrica, todo ésto lleva a una mejoría de la microcirculación, por tanto hay un aumento de la oxigenación celular y finalmente como consecuencia de la anterior propiedad tiene efectos analgésicos y antiinflamatorios pues al aumentar el aporte de oxígeno a la sangre, mejora el metabolismo celular y también el sistema inmunitario (4).
Se han realizado estudios del efecto del gas ozono sobre diversos tejidos animales utilizando diferentes vías de aplicación en modelos experimentales en animales y los resultados son un tanto contradictorios ya que se reportan trabajos donde se han encontrado alteraciones de la estructura de las células endoteliales cuando es administrado por vía endovenosa, efecto genotóxico en cultivos celulares, así como alteraciones del tejido pulmonar al ser inhalado en un grupo de animales que se la administró por vía oral, mientras que los órganos del tubo digestivo no presentaron daño (5).
Por otra parte en una encuesta realizada en 1980 en la ex Alemania Federal por la Sociedad Médica para la Terapia de Ozono para conocer los efectos secundarios arrojó que de 5 579 238 aplicaciones, sólo 40 casos reportaron efectos secundarios negativos, o sea 7 casos por cada millón de aplicaciones aproximadamente, por lo que concluyeron que los efectos secundarios de la ozonoterapia son prácticamente inexistentes (6).
A principio de los años 90 del pasado siglo, el gas ozono se utilizó experimentalmente por investigadores de nuestra institución como medio de contraste negativo, utilizando un equipo de angiografía por sustracción digitálica, sustituyendo al yodo en modelos experimentales en perros, obteniéndose resultados indistinguibles del método usado tradicionalmente para visualizar la aorta abdominal y sus ramas. Demostrando que con este medio de contraste las imágenes que se obtienen son de la misma calidad que los medios convencionales utilizados. Dada la importancia de este proceder que brinda una alternativa para aquellos pacientes con reacción al yodo y la escasa literatura sobre el efecto del gas ozono sobre los tejidos animales se realiza este estudio morfológico para conocer si existe alguna reacción no deseada y poder utilizarlo como una vía segura.

Se utilizaron 18 ratas Wistar macho de aproximadamente 300 a 350 g de peso y entre 4 y 8 meses de edad y se dividieron en tres grupos de seis individuos cada uno: un grupo control negativo, donde se realizó el proceder quirúrgico solamente, un grupo control positivo que se trató con oxígeno a razón de 1ml/kg de peso y un grupo experimental que se trató con ozono a una concentración de 1ml/kg de peso en bolo. Se realizó incisión abdominal previa anestesia y se cateterizó la aorta,(se llegó a la aorta y vasos ilíacos mediante incisión abdominal previa anestesia), se cateterizaron las arterias ilíacas primitivas 1 cm por encima de las arterias renales y se insufló oxígeno u ozono en bolo lentamente durante 15 minutos, (se insuflaron los gases según el diseño experimental). Se retiró el catéter y después de aclaración plasmática se realizó toma de muestra para estudios. A la hora y media se realizó punción cardiaca y muerte por exsanguíneo y se tomaron muestras de tejido de riñón, bazo e hígado.
La fijación se realizó utilizando la mezcla paraformaldehido 2%, glutaraldehido 2.5% en buffer de cacodilato ph 7.4, 0.1M. Los fragmentos para observación por microscopía óptica se deshidrataron en alcohol y se incluyeron en parafina; los cortes de 2 a 3 μm de grosor se colorearon con hematoxilina y eosina, tricrómica de Masson, ácido periódico de Schiff (PAS) y AP plata metenamina, para ser observados en el microscopio óptico
Las muestras para ser estudiadas por microscopía electrónica de transmisión se postfijaron en OsO4 al 2% en buffer de cacodilato, se deshidrataron en acetona y se incluyeron en resina araldita según técnica general convencional para microscopía electrónica de transmisión. A los bloques obtenidos se les realizó cortes de 40 a 50 nm de grosor con cuchillas de vidrio, los que se contrastaron con acetato de uranilo e hidróxido de plomo y se observaron en un microscopio JEM 100S de la JEOL.

En la observación macroscópica se encontraron quistes en el hígado de un animal tratado con oxígeno, posiblemente existentes antes del experimento.

En microscopía óptica no se encontraron alteraciones morfológicas de importancia en ninguno de los órganos de los animales de las dos series tratadas con oxígeno y ozono respectivamente. En el estudio por microscopía electrónica se observó en un caso células apoptóticas con mayor frecuencia que lo habitual.

fig. 1 - Hepatocito de hígado de rata control. Se observa la estructura nuclear de aspecto normal, retículo endoplasmático rugoso con canales estrechos y mitocondrias bien conservadas 12 000 X

fig. 2 - Hepatocito de rata tratada con ozono. Se observa núcleo, retículo endoplasmáitco rugoso y mitocondrias con características similares a los controles 15 000X

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fig. 3 -

Riñón de rata control. Se observan capilares rodeados por membrana basal glomerular y podocitos con sus característicos pedicelos 9 000

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fig. 4 -

Riñón de rata tratada con ozono. Se observa la estructura normal de la membrana basal glomerular y las características estructurales de los pedicelos 22 000X

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fig. 5 -

Riñón de rata tratada con ozono. Se observa segmento de un podocito con características normales, en el citoplasma complejo de Golgi bien desarrollado, prolongaciones primarias y pedicelos de aspecto normal, membrana basal glomerular de aspecto normal 30 000X

fig. 6 - Bazo de rata tratada con ozono. Se observan las células esplénicas de aspecto normal 6 000X

La administración intraórtica lenta de ozono gaseoso no provocó alteraciones morfológicas en las observaciones realizadas en el microscopio óptico ni a nivel ultraestructural en tejidos de riñón, hígado y bazo de ratas en el estudio realizado.

1 -S. Rilling/ R. Viebahn. Prxis der Ozon. Sauerstoff-Therapie. Heidelberg 1985.

2 -Criegee R. Advances in chemistry series: Ozone chemistry and technology p 133, 1959.

3 -Viebahn R. The biochemical process underlying ozone therapy. Ozonachrichten, Heft 1/2, 18-32, 1985.

4 -Wolff H.H. Das medizinische Ozon, Heidelberg 1982

5 -Ancheta O., Rodríguez S., Molerio J., Menéndez T., Pérez N. Y Ramos M.E. Ozonized sunflower oil effects upon different rats tissues. Ultrastructure study. ICEM 14, Symposium RR, Volume IV, Electron Microscopy 1998.

6 -Jacobs M. Th. Untersuchung uber Zwischen falle und typische Komplikationen in der Ozon. Sauerstoff-Therpie. Ozo-Nachrichten 1, 5, 1982.

- Zurama Eloisa Castro Castro (26/12/2007 14:10:00)