Tinción para amiloide mediante Rojo Congo en solución alcohólica

Jorge Tolivia Fernández^*, Ana Navarro Incio^*
* Dpto. Morfología y Biología Celular Universidad de Oviedo ESPAÑA

Resumen

Describimos aquí una técnica de tinción del amiloide rápida, simple y compatible con los métodos inmunocitoquímicos que puede ser aplicada a secciones procesadas rutinariamente para microscopia óptica.  El material utilizado ha sido fijado en formaldehido, cortado en secciones de entre 5-10 micras, desparafinado y parcialmente hidratado (hasta el alcohol de 70%). Después de la hidratación parcial, las secciones fueron teñidas en una solución del 0.2% de Congo red en alcohol isopropilico (isopropanol) al 70%.   Los depositos de amiloide aparecen en tonos del rosa al rojo y mostraban el dicroismo verde característico bajo luz polarizada.Así mismo no se ha observado ningún tipo de tinción inespecifica de otros componentes histológicos.  La diferenciación es innecesaria ya que no hay sobrecoloración de la muestra. Esta técnica permite una posterior contratinción de la muestra sin pérdida de calidad en la misma y  también ha demostrado ser compatible con los métodos inmunocitoqímicos rutinarios.

Material y Métodos    

Resultados    

fiogf49gjkf0dVasos en páncreas con amiloidosis. Congo red sin contratinción. Microscopia de campo claro 40x">
Figura 1 -

fiogf49gjkf0dVasos de la figura 1. Congo red sin contratinción. Microscopia de campo claro con luz polarizada. Obsérvese la característica coloración verde manzana. 40x">
Figura 2 -

fiogf49gjkf0dAmiloidosis en cápsula adrenal. Contratinción con colorantes tiacinicos. 10x.">
Figura 3 -

fiogf49gjkf0dCorteza cerebral, amiloide en la pared de un vaso. Contratinción con colorantes tiacinicos. 40x.">
Figura 4 -

fiogf49gjkf0dPáncreas con amiloidosis. Tras la tinción se realizó una IHQ para somatostatina (células azul oscuro). 10x.">
Figura 5 -

fiogf49gjkf0dPlaca senil en corteza de un individuo con Alzheimer. Se realizó el Rojo Congo y una IHQ para apolipoproteina D. 100x.">
Figura 6 -

Agradecimientos    

La puesta a punto de esta técnica ha sido financiada en parte por el FIS (99/1316)

Bibliografía    

Comentarios

- Maria Haydee Aunchayna Mary (01/10/2005 13:46:15)

Se simplifica la tecnica, que conterste sugiren puede ser verde luz?.Que pena que no enviaron fotos, voy a ensayar la variante y les comento. Dra. MH Aunchayna Uruguay

- Juan Pablo Garcia de la Torre (04/10/2005 7:57:18)

No se si es posible añadir ilustraciones de la técnica modificada. Si es posible seria interesante verlas

- David Cubero Rego (05/10/2005 2:59:48)

En la seccion de COMUNICACIONES del congreso en HISTOQUÏMICA hay un trabajo bellamente ilustrado con la técnica antes descrita.

- David Cubero Rego (05/10/2005 3:00:01)

En la seccion de COMUNICACIONES del congreso en HISTOQUÏMICA hay un trabajo bellamente ilustrado con la técnica antes descrita.
Tinción fluorescente extrasensible para los depósitos amiloideos cerebrales utilizando el Rojo Congo en solución alcoholica

Jorge Tolivia Fernández*, Ana Navarro Incio*, Cristina Ordoñez Camblor*, Cristina Pérez Carbajales*, Eva Martínez Pinilla*

- David Cubero Rego (05/10/2005 3:03:12)

No tengo acceso a la revista donde se publicó la técnica en cuestion, si los autores me envian una separata electrónica se los agradecería, magnifico trabajo.
davidcubero@infomed.sld.cu

- Jorge Tolivia Fernández (05/10/2005 11:35:32)

Jorge Tolivia (5/10/2005) No se que ha pasado, pero las imágenes que incluimos para el foro, sobre el trabajo ya publicado, salen en una teorica comunicación al congreso ( la que aparece como segunda). Quien las quiera ver debe de acceder a esa "comunicación". La primera comunicación pone de manifiesto la visualización en fluorescencia con una serie de mejoras enfocadas a inhibir el fondo en los cortes del SNC

- Jorge Tolivia Fernández (06/10/2005 14:15:08)

Acabo de descubrir que dando a "Versión imprimir" aparecen las fotos que hemos incluido en este foro. Supongo que hay algún problema con los enlaces. Un saludo a todos

- Maria Haydee Aunchayna Mary (08/10/2005 11:44:24)

Brillantes imagenes.Felicitaciones Dra.M.H.Aunchayna Uruguay

- BLANCA PALOMEQUE CASTRO (09/10/2005 12:06:46)

Magnífico trabajo.
Además de resultar mucho más sencilla la técnica, se observan secciones mucho más limpias y selectivas.
Pero me gustaría realizar una consulta:
Como ya sabrá, en la técnica clásica de Rojo Congo se puede distinguir entre amiloidosis primaria y secundaria realizando oxidación previa con permanganato , perdiendo la capacidad de tinción con Rojo Congo en el caso de la amiloidosis secundaria (cadena tipo AA).
¿Eso sigue siendo válido para esta técnica?
Gracias de antemano
Blanca Palomeque Castro, Alfredo Ramos Pastor, Gima Varona Esquivel

- Irina hernandez Melendi (11/10/2005 20:05:01)

Nos gusto mucho su trabajo, las imagenes estan muy bonitas y se ve que la tecnica es util para la doble tincion con las tecnicas de inmunohistoquimica, quisiera de ser posible nos enviara el procedimiento completo si nos permite escribirle a su direccion de contacto.

- ELSIE BEATRIZ PICOTT RANGEL (13/10/2005 22:19:44)

Excelente, me gustó la calidad del resultado

- Cesáreo Corbacho Cuevas (18/10/2005 19:11:55)

Yo también estaría interesado en obtener el procedimiento completo. ¿Puedo escribirles a la dirección de contacto? Muchas gracias y un saludo muy cordial a los autores.

- Jorge Tolivia Fernández (18/10/2005 21:00:26)

Hola, tengo que hacer un fichero con la separata del trabajo y la enviaré a todos los interesados. Pueden pedirmela por e-mail sin ningún problema.
Una aplicación del método, en combinación con inmunocitoquímica, aparece en el siguiente trabajo de nuestro grupo:
Immunohistochemical study of distribution of apolipoproteins E and D in human cerebral beta amyloid deposits.
Exp Neurol. 2003 Dec;184(2):697-704.

- CARMELA GANOZA ARENAS (24/10/2005 16:02:58)

Un trabajo muy interesante, quisiera poder implementarla donde trabajo ya que la técnica convencional es engorrosa y requiere varios puntos de control para que la coloración sea precisa.

- Emilio Mayayo Artal (30/10/2005 18:58:37)

Excelentes fotos. Un resultado a tener en cuenta. Felicidades.

- isabel maria brown durruthy (31/10/2005 23:31:01)

este trabajo es muy importante y bien desarrollado.
felicidades

- MAGDA TORRES CARRILLO (01/11/2005 17:27:44)

BONITO TRABAJO QUISIERA SABER EL PROCESO COMPLETO PARA PODER IMPLEMENTARLO YA QUE ES MUY SENCILLO SU METOOD

- MIGUEL ANGEL CARRASCO GARCIA (02/11/2005 23:25:30)

Interesante trabajo. Siempre es bueno investigar nuevas posibilidades en nuestras viejas tinciones histoquímicas.

- Jorge Tolivia Fernández (03/11/2005 16:36:33)

Gracias por el interés demostrado. Las personas interesadas en la técnica que me envien un e-mail solicitandola y le enviaré un archivo del mismo.
Un saludo