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DETECCIÓN DE HIPERMETILACIÓN DE GENES SUPRESORES TUMORALES EN ASTROCITOMAS Aiala Lorente*, Paula Lazcoz**, Jose Maria Rivera***, Jesus Garibi***, Javier S. Castresana* |
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INTRODUCCIÓN Los astrocitomas son el tipo de tumor intracraneal más frecuente, característico por invadir las regiones cerebrales próximas. Se clasifican en los siguientes tipos, de acuerdo con la OMS: Grado I, Astrocitoma pilocítico; Grado II, Astrocitoma difuso de bajo grado; Grado III, Astrocitoma anaplásico; Grado IV, Glioblastoma multiforme (GBM), que puede ser primario, formado de novo o secundario formados a partir de tumores de grado II y III por progresión tumoral. Se han estudiado los siguientes genes supresores tumorales: PTEN (10q23.3); MGMT (10q26.1); dos efectores de Ras: RASSF1A (3p21.3) y NORE1A (1q32.1); BLU (3p21.3); y CDKN2A (9p21) que codifica dos proteínas alternativas: p14ARF y p16INK4A. La hipermetilación de las islas CpG de promotores puede silenciar estos genes, de manera que disminuya su expresión, contribuyendo a la génesis de diversos tipos de tumores. MATERIAL Y MÉTODOS El trabajo se realizó sobre 53 muestras humanas procedentes del Hospital de Cruces de Barakaldo (España) de astrocitomas de diversos grados y 10 líneas celulares de astrocitoma. La detección de hipermetilación de promotores: se realizó mediante MSP (PCR específica de metilación) para tumores y líneas. El estudio de expresión: se realizó por RT-PCR en RNA obtenido de las líneas. RESULTADOS Detección de hipermetilación de promotores (porcentaje de muestras hipermetiladas halladas): Muestras tumorales: RASSF1A: 92% (49 de 53), BLU: 51% (27 de 53), NORE1A: 4% (2 de 52), PTEN: 0% (0 de 51), MGMT: 47% (25 de 53), p14: 0% (0 de 53), p16: 25% (13 de 53). Líneas celulares: RASSF1A: 100% (10 de 10), BLU: 33% (3 de 9), NORE1A: 40% (4 de 10), PTEN: 20% (2 de 10), MGMT: 80% (8 de 10), p14: 0% (0 de 5), p16: 29% (2 de 7). CONCLUSIONES El gen RASSF1A presentó un alto grado de hipermetilación, tanto en los tumores (92%) como en las líneas (100%), que se correspondió con una expresión baja o nula de dicho gen en la mayoría de las líneas celulares, indicando que podría ser un evento frecuente en la génesis de los astrocitomas. La hipermetilación de BLU, NORE1A, p16 y MGMT parece contribuir también, aunque en menor medida, mientras que la de p14 y PTEN parece no estar implicada, ya que no se observó en ningún caso.
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Los astrocitomas son el tipo de tumor intracraneal más frecuente,
característico por invadir las regiones cerebrales próximas. Se
clasifican en los siguientes tipos, de acuerdo con la OMS: Grado I,
Astrocitoma pilocítico; Grado II, Astrocitoma difuso de bajo grado;
Grado III, Astrocitoma anaplásico; Grado IV, Glioblastoma multiforme
(GBM), que puede ser primario, formado de novo o secundario formados a
partir de tumores de grado II y III por progresión tumoral. Se han estudiado los siguientes genes supresores tumorales: PTEN (10q23.3); MGMT (10q26.1); dos efectores de Ras: RASSF1A (3p21.3) y NORE1A (1q32.1); BLU (3p21.3); y CDKN2A (9p21) que codifica dos proteínas alternativas: p14ARF y p16INK4A. La hipermetilación de las islas CpG de promotores puede silenciar estos genes, de manera que disminuya su expresión, contribuyendo a la génesis de diversos tipos de tumores.
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El trabajo se realizó sobre 53 muestras humanas procedentes del
Hospital de Cruces de Barakaldo (España) de astrocitomas de diversos
grados y 10 líneas celulares de astrocitoma. La detección de hipermetilación de promotores: se realizó mediante MSP (PCR específica de metilación) para tumores y líneas. El estudio de expresión: se realizó por RT-PCR en RNA obtenido de las líneas.
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Detección de hipermetilación de promotores (porcentaje de muestras hipermetiladas halladas): Muestras tumorales: RASSF1A: 92% (49 de 53), BLU: 51% (27 de 53), NORE1A: 4% (2 de 52), PTEN: 0% (0 de 51), MGMT: 47% (25 de 53), p14: 0% (0 de 53), p16: 25% (13 de 53). Líneas celulares: RASSF1A: 100% (10 de 10), BLU: 33% (3 de 9), NORE1A: 40% (4 de 10), PTEN: 20% (2 de 10), MGMT: 80% (8 de 10), p14: 0% (0 de 5), p16: 29% (2 de 7).
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El gen RASSF1A presentó un alto grado de hipermetilación, tanto en los
tumores (92%) como en las líneas (100%), que se correspondió con
una expresión baja o nula de dicho gen en la mayoría de las líneas
celulares, indicando que podría ser un evento frecuente en la génesis
de los astrocitomas. La hipermetilación de BLU, NORE1A, p16 y MGMT parece contribuir también, aunque en menor medida, mientras que la de p14 y PTEN parece no estar implicada, ya que no se observó en ningún caso.
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- Cesáreo Corbacho Cuevas (11/10/2005 20:35:10)
- Javier Saez Castresana (17/10/2005 15:52:24)
- Juan Pablo Garcia de la Torre (02/11/2005 10:19:17)
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