Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica
ISBN: 978-84-692-76778

COMUNICACIONES

1797. Otras disciplinas

Método Inmunohistoquímico para detección de la proteína isoforma anormal del prion

Francisco Borja Gutierrez Corres[1], Begoña Atarés Pueyo[1], Maria Carmen Albaina Aberasturi[1], Mª Angeles Hernandez Perez[1], Mª Jesus Del Campo Murga[1], Begoña Vergara Celaya[1], Sorkunde Bergara Elorza[1], Inocencia Moran Morgado[1], Leire Cid Fernandez[1], Josefina Marañon Calleja[1]
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El agente patógeno de las encefalopatias espongiformes transmisibles (EET) es una partícula, denominada”Prion” por Prusiner, y está compuesta únicamente por la isoforma anormal (PrPsc) de una proteína celular normal o celular de la proteína del prion (PrPc), se expresa principalmente el sistema nervioso central, tejido linfático y uniones neuromusculares cono una proteína de membrana que se encuentra anclada mediante una cadena de glicolípidos. PrPsc deriva de PrpC  mediante un proceso post-traduccional que involucra un cambio conformacional, que se manifiesta en un aumento del contenido en estructuras en laminas beta. Este cambio convierte a la Prpsc en susceptible de autoasociación, formando agregados estables y resistentes a la digestión por proteasas, que se depositan en el cerebro afectado.
La denomimación de encefalopatías espongiformes transmisibles (EET) se basa en dos de sus principales características: la espongiosis  cerebral y la transmisibilidad.
Un concepto importante de la transmisión de las enfermedades prionicas lo constituye la barrera ínterespecie, que se manifiesta en una reducción de la infectividad y un aumento en tiempo de incubación cuándo la transmisión se da entre animales de distinta especie, esto depende esencialmente de las diferentes estructuras de PrP del inoculo y el huésped. Importante destacar rasgos genéticos de como el polimorfismo del codón 129 en la PRNP humana puede modificar la susceptibilidad a la infección prionica.

 

Introducción    

Encefalopatías espongiformes en humanos:
Kuru:
·  Tribu Fore Guinea-Papua. Relacionado con el canibalismo.
·  Clínica: Ataxia, demencia.
·  A.P: Placas tipo Kuru.
 
Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ):
·  Mas frecuente.
·  Tipos:
·  Esporádico (ECJe):
- Clínica: Demencia, piramidalismo, mioclonias y EEG peculiar.
- A.P: espongiosis en sustancias gris cortical y subcortical.
·  Iatrogénico o adquirido:
- Contagios en transplantes de cornea, procedimientos neuroquirurgicos, terapia hormonal (hipófisis de cadáveres infectados)
- Clínica: Demencia, piramidalismo, mioclonias y EEG peculiar.
- A.P.: espongiosis en sustancias gris cortical y   subcortical.
·  Familiar (ECJf):
- Herencia autonómica dominante.
- Clínica: demencias, ataxia, mioclonias.
- A.P.: espongiosis en sustancias gris cortical y subcortical.
·  Variante ( ECJv):
- Enfermedad nueva, manifestación humana de la encefalopatía espongiforme bovina.
- Clínica: Alteración conductual, demencia, parestesias.
- A.P.: espongiosis difusas, placas floridas.
 
Síndrome de Gerstmann-Sträussler-Scheinker (SGSS):
·  Mutación en la PRNP codón 112 y alteraciones en los codones 105, 145 y 117.
·  Clínica: Ataxia y demencia.
·  A.P.: Espongiosis y placas multicentricas.
 
Insomnio Familiar Letal (IFL):               
·  Mutación en la PRNP codón 178.
·  Clínica: Insomnio, ataxia y demencia.
·  A.P.: Gliosis talámica y en olivas inferiores.

 

Material y Métodos    

Material:
 
-Olla a presión.
-Hornillo.
-Ácido Clorhídrico al 32%.
-Proteasa k Dako 40x.
-Agua Destilada.
-Ácido fórmico 95-100%.
-Cubetas Coplín.
-Proteína Prión monoclonal mouse anti-prión protein clone 3f4 ref. M7216.
-Kit de inmunotinción Dako Envision flex.
 
Método:
 
-Después de que el encéfalo lleva fijado el formol 10% un mes, se procede al tallado.
-Tallado:Personal encargado de realizar el tallado. Modo:
-Colocar el encéfalo sobre empapadores.
-Cortes no tienen que tener un grosor superior a 5 mm.
-Introduce los casettes con el tejido en ácido fórmico concentrado (95-100%) durante 1 hora, bajo la campana extractora.
-Después en solución reciente 1:10 de formol tamponado 48 h.
-Procesamiento de los tejidos en el procesador automático de forma habitual.
-Corte en micrótomo Minot  4 m .
-Se introducen los cortes en una estufa 35ºc durante toda la noche.
-Desparafinar e hidratar.
-Desenmascaramiento antigénico por por calor con olla a presión. Utilizaremos como liquido de desenmascaramiento el ácido clorhídrico 2 mM. 2 litros de agua destilada + 388 ml de HCL al 32%.
 
Calentar en la olla a presión 2 L de la solución recuperadora hasta la ebullición. Cubrir, pero no sujetar la tapa. Colocar los portaobjetos en los bastidores metálicos de tinción e introducirlos en la olla a presión. Asegurarse de que los portaobjetos quedan completamente sumergidos en la solución recuperadora. Cerrar la tapa. Cuando la olla a presión alcanza la temperatura y presión de funcionamiento, cronometrar 3 minutos. Sacar la olla a presión de la fuente de calor y enfriarla. Abrir la tapa y dejar oreando durante 20 minutos.
 

-Lavar con  H2O destilada.

-Digestión con la enzima Proteasa k durante 5 min.

-Varios lavados con  H2O destilada.

-Sumergir los portas en Ácido fórmico 98-100% durante 5 min.

-Lavar con Buffer de lavado (Envision Flex Wash buffer 20X). 5 min.

-Inmuno-tinción con teñidor automático Autostainer PlusLink Dako.

-Buffer de lavado.

-Bloqueo de la peroxidasa endógena 5 min.

-Buffer de lavado.

-Incubación con anticuerpo primario Anti-Prion Proteína 1:30 durante 30 min.

-Buffer de lavado.

-Incubación con polímetro HRP ref. k8000, k 8002, k80023.

-Buffer de lavado.

-Buffer de lavado.

-Sustrato + cromógeno DAB 10 min.

-Buffer de lavado

-Contraste con hematoxilina de Mayer.

-Azuleamiento con buffer de lavado.

-H2O destilada.

-Deshidratar, aclarar y montar DPX.

 

Resultados    

 

 - Corte macroscopico de cerebro
- Corte macroscopico de cerebro


 - Hematoxilina/ eosina
- Hematoxilina/ eosina


 - Hematoxilina/ eosina
- Hematoxilina/ eosina


 - Inmunohistoquimica de la proteína isoforma anormal del prion
- Inmunohistoquimica de la proteína isoforma anormal del prion


 - Inmunohistoquimica de la proteína isoforma anormal del prion
- Inmunohistoquimica de la proteína isoforma anormal del prion




Conclusiones    

-Formol es el responsable del enmascaramiento antigénico ya que la formación de puentes cruzados transforma u oculta los antigeno/epitopos, en esta técnica dado a su elevada permanencia en formol realizamos  la recuperación antigénica por medio de calor con ácido clorhídrico al 2 mmol/L.

 

 

-Utilizaremos la proteasa K para eliminar la PrPc, mientras que PrPsc es resistente a la digestión. Si en tiempo de permanencia se excede puede digerí al antígeno y producir desprendimiento del tejido.

 

- La utilización del ácido fórmico 98-100% después de realizar la recuperación antigénica, es para evitar la patogenidad del prión.

 

-Se deben emplear cristales pretratados para evitar que se desprenda el tejido.

 

-Para obtener resultados en la tinción es importante tener en cuenta dos factores el PH y la molaridad

 

 

Agradecimientos    

Agadecemos la colaboración de Raquel Lopez Gutiérrez por el soporte informatico y administrativo.

 

Bibliografía    

 1 -Laboratorio de anatomía patológica. Raimundo García del Moral. Editorial Interamericana McGraw-Hill.

 

2 -Dorland diccionario enciclopédico ilustrado de medicina. 20 ediciones. Editorial Interamericana McGraw-Hill.

 

3 -Exámenes de laboratorio, técnicas microscópicas. C. Nezelof, P. Galle, N. Hinglais. Editorial Jims.

 

4 -Instituto de patología de las fuerzas armadas de los estados unidos de América (AFIP), Métodos Histotecniologicos.

Washington D.C. 1995.

 

Comentarios

- Carla Victoria Véjar Díaz - CHILE  (02/11/2009 1:03:55)

Hola me parece muy interesante el caso expuesto, y me llama mucho la atención la recuperación antigénica con calor y soluciones ácidas. Quisiera saber si esta utilización eso es extrapolable a cualquier otro antigeno a determinar ? desconozco la técnica aquí mostrada ya que yo utilizo recuperación con vaporera y soluciones buffer. Ojala me respondan la inquietud.

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (02/11/2009 22:18:16)

Solemos utilizara recupercion antigenica por calor a diferentes Ph y rara vez con enzimas.
En esta tecnica, dado a su elevada permanencia en formol realizamos la recuperación antigénica por medio de calor con ácido clorhídrico al 2 mmol/L.
Un saludo.

- BLANCA PALOMEQUE CASTRO - ESPAÑA  (04/11/2009 14:13:26)

Estupenda comunicación.
El ácido fórmico después del tallado ¿es realmente efectivo para anular la patogenicidad del prión? ¿Tomais alguna precaución adicional a la hora de realizar los cortes?

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (05/11/2009 10:52:52)

segun las normas de seguridad e higiene si. Cuando realizamos los cortes en el microtomo no nos colocamos guantes, puesto los cortes del cerebro en el tallado han estado en acido formico durante una hora.

- Mirta García Jardón - REPUBLICA SUDAFRICANA  (07/11/2009 19:01:19) Mirta García Jardon. Prof. titular en Anatomía Patológica. Especialista de primer y segundo grado. Máster en Enfermedades Infecciosas.

Buenísima la demostración y excelente las imágines. Me pregunto cuantos casos estaremos maldiagnosticando por carecer de la técnica. Felicidades, Francisco y su equipo, ustedes realizan un trabajo maravilloso.

- MARIA DOLORES BLANCO FLORES - ESPAÑA  (09/11/2009 16:47:00)

Creo que seria conveniente usar métodos de protección al cortar en microtomo aunque en principio el formol neutralice la actividad del prion. Usando guantes de nitrilo y gafas antivirales como en el momento de la autopsia. Preferible pecar de prudente aunque sea en exceso.Felicitaciones por el trabajo. Cada año ofreceis un tema interesante.

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (09/11/2009 17:39:10)

La descontaminación se realiaz en el tallado del cerebro con acido formico durante una hora. Desde ese momento la muestra puede ser manipulada como cualquier otra muestra. Maria Dolores Blanco Flores te envio una pagina web que te puede ser de interes www.eeb.es
un saludo

- MARIA DOLORES BLANCO FLORES - ESPAÑA  (09/11/2009 21:10:49)

Gracias francisco.

- Laura Gomez - ESPAÑA  (09/11/2009 21:22:49)

Veo importante que recalqueis que el Ac. formico que no el formol es el agente neutralizador, gracias por los detalles del desenmascaramiento con el acido, buen detalle.

- MªCRISTINA MOLINA - ESPAÑA  (10/11/2009 20:34:16)

Me ha gustado mucho el caso,porque no conocia como se realizaba la manipulacion de estas muestras. Me gustaria saber el pH al que realizais el desenmascaramiento.un saludo

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (10/11/2009 23:26:40)

El desenmascaramiento lo realizamos con acido clorhidrico 2mM a partir de clorhidrico concentrado al 32%.
Para preparar 2 Litros de clorhidrico 2mM tomaremos 388 microlitos de HCL al 32%.

Un saludo

- Nuria Nogales - ESPAÑA  (12/11/2009 17:51:54)

Muy interesante. Desonocía que el Ác. fórmico se usara para inactivar el prión. Gracias por el trabajo. Saludos.

- Mª Antonia Revuelta Montoya - ESPAÑA  (12/11/2009 18:48:41)

nosotros utilizamos el ácido fórmico tb, pero extremamos las medidas de higiene despues de cortar en el microtomo , guantes por supuesto, todo desechable y desinfección al finalizar con lejia diluida. no está demostrado que no esista contagio aún y con todo.un saludo y gracias

- Mª Antonia Revuelta Montoya - ESPAÑA  (12/11/2009 18:49:40)

ahí va la x para el verbo existir, jajaja

- montserrat fernandez alvarez - ESPAÑA  (12/11/2009 22:22:33)

Muy buen trabajo,claro y conciso, hablais de la importancia del PH de las soluciones pero no poneis cual es la adecuda o la que vosotros utilizais,por ejemplo en la recuperacion (con olla a presion) ya que este puede variar dependiendo del Ph que tenga el H2o destilada.

- Daniela Ancich - ARGENTINA  (13/11/2009 1:33:49)

Muy novedoso el trabajo.
Tengo una pregunta Uds no esterilizan en autoclave??
Como saben que no existen fromas incompletas infectivas con solo acido fromico??
He tenido un caso de CJ variedad Japonesa sin saberlo
El mismo caso lo he consultado enun centro de aca Privado y me pideron que pase por la autoclave y asi lo hicimos.
Entrare en link que postearon.
Saludos desde Argentina

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (13/11/2009 10:29:02)

Los bloques de tejidos tratados adecuadamente con acido formico deben ser considerados como no infecciosos. Asi, pueden ser incluidos en parafina en los procesadores de tejidos. Esto dice una guia de informacion y recomendaciones para personal sanitario editada por el ministerio de sanidad y consumo.
Enfermedad de Creutzfeld-Jakob y otras encefalopatias espongiformes transmisibles humanas
Guia de informacion y recomendaciones para el personal sanitario
nipo:351-03-018-5
deposito legal m-41.298-2003

Ancichi no entiendo lo de l esterilizacioin con autoclave.

un saludo.

- Susana Maria Rodriguez Gonzalez - ESPAÑA  (13/11/2009 12:15:56)

Muchas felicidades. Encuentro el trabajo muy interesante e instructivo ya que desconocia mucha de la información aportada.

- maría yolanda ochoa pedrón - ESPAÑA  (13/11/2009 21:22:16)

Un trabajo bien hecho, claro y conciso.

- AMELIA GONZALEZ RIVERO - ESPAÑA  (14/11/2009 10:37:16)

Muy interesante el trabajo y muy bien explicado

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (14/11/2009 11:07:36)

Montserrat Fernandez Alvarez Las recomendaciones para la recuperacion del epitopo para optener resultados optimos son con acido clorhidrico 2 mmol/L inducido por calorpar el anti-prion protein, no interfiere el pH. Para preparar dos litros de soluciòn recuperedora añadiremos 2 Litros de agua destilada tomaremos 388 microlitos de HCL al 32%.

La utilizacion de medidas prventivas en la microtomia es adecuada si se emplean guantes anticorte, para evitar los cortes.

Un saludo y muchas gracias por vuestro interes en tema.

- VICENTA GARCIA PEÑASCO - ESPAÑA  (14/11/2009 19:11:08)

Excelentes imágenes. Considerando que el encéfalo lleva un mes fijado en formol al 10 % y que este podría comprometer seriamente su recuperación anti génica habéis conseguido muy buen desenmascaramiento sin fondo alguno.
Aunque utilicéis Ac fórmico para inactivar el prión yo pondría todas las medidas preventivas mientras dure todo el proceso.

- Daniela Ancich - ARGENTINA  (15/11/2009 0:58:46)

Francisco Borja Gutierrez Corres:
Mi apellido es Ancich es eslavo.
La esterilizacion se hace en autoclave..
Esas normas que ud cita son de su pais??
Un saludo

- Daniela Ancich - ARGENTINA  (15/11/2009 1:13:05)

Estas son las normas de mi pais tomadas de la OMS,lo de la autoclave me lo pidieron ya que nadie sospechaba uN CJ y no s ehabian tomado recaudos.esterilizamos los tacos en autoclave segun las ordenes del centro derefrencia.
Pego las normas de la misma en mi pais.
e. Protocolo de Autopsia

A: completa La autopsia debe restringirse al Sistema Nervioso Central
1) Evitar heridas accidentales, protección con guantes de teflón o metálicos por debajo de los guantes de goma, camisolín descartable, y protección de ojos y boca.
2) Evitar la contaminación de la mesa de autopsia utilizando plástico no-permeable descartable rojo.
3)) Remoción del cerebro: Cabeza en posición habitual, con una gruesa capa de celulosa por debajo. El cráneo debe abrirse con sierra mecánica (no eléctrica, pues es más fácil de decontaminar). Antes de fijar el cerebro en formol al 10%, separar un polo frontal, colocar en doble bolsa de plástico, cerrar hermético y guardar a -70°C o -20°C por corto tiempo hasta enviar al Centro de Referencia. El resto en formol al 10% en recipiente plástico amplio. Enviar todo inmediatamente al Centro de Referencia o dejar fijar el cerebro dos semanas y luego enviar separado del material congelado. Tomar precauciones para que no se vierta formol. Si lo pueden enviar inmediatamente al Centro de Referencia, separar un hemisferio cerebral que incluya el hemisferio cerebeloso homolateral y la mitad del vermis, colocar en bolsa de plástico, cerrar herméticamente, para ser congelado a -70°C en el Centro de Referencia. Colocar el otro hemisferio cerebral y cerebeloso y el resto del tronco en formaldehído 10% en recipiente hermético y enviar al Centro de Referencia ambos hemisferios en un plazo corto después de extraídos.
4) Colocar material plástico protector de la mesa en recipiente para material infeccioso descartable para su incineración.
5) Todos los instrumentos utilizados así como las superficies contaminadas tienen que ser decontaminados.
6) Los tejidos remanentes, detritus producto del corte y la solución de formaldehido deben descartarse en un contenedor plástico e incinerarse.
B -Parcial Si no se puede obtener el cerebro, se sugiere obtener un fragmento similar a biopsia ampliada para formol al 10% y para congelar tomando los mismos recaudos y enviándolos por separado al Centro de Referencia. Este material puede ser obtenido por un neurocirujano/ residente.
Laboratorio de Neuropatología (en caso que deseen procesar localmente el material antes de consultarlo al Centro de Referencia.
1) El personal debe utilizar guantes de seguridad, evitar heridas penetrantes.
2) El cerebro fijado en formaldehído debe procesarse en una mesa cubierta por material plástico descartable, y cortarse sobre material de celulosa descartable (incinerado).
3) Fijar el material en formaldehído al 10%.
4) Luego de la fijación colocar los bloques para histología, no mayores de 5mm de espesor, en ácido fórmico concentrado (95-100%) durante una hora, y posteriormente formaldehído al 10% por 48 hs. Sin este paso, los bloques de parafina son aún infectantes.
5) Todos los instrumentos, guantes etc.,deben ser decontaminados. Los instrumentos contaminados por tejido fijado en formaldehído pero que no pasó por ácido fórmico deben sumergirse en NaOH 2N durante una hora.

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (15/11/2009 9:52:29)

Amelia Ancich, ya siento cambiarte de apellido, te describo las mediadas que se toman al relizar la autopsia. En el trabajo solo he expuesto las tomadas al realizar el tallado del encefalo. No sabia que se pudieran esterilizar los bloque, ¿tuvieron algun problema rara reliazar alguna manipulación del tejido, como el corte, tincion, inmunohistoquimica? muchas gracias y un saludo

MEDIDAS DE SEGURIDAD PARA PREVENIR EL CONTAGIO:

A) Preparación del personal para la realización de la autopsia:
-Equipo de autopsia desechable, cuyo contenido es:
i. bata, gorro, calzas.
ii. Gafas o viseras y mascarilla.
iii. Guantes (dos pares):
-guantes anticorte (evitar heridas penetrantes, realizados de fibras o metálicos.
-guantes convencional, debajo.
B) Preparación del instrumental:
-Sierra con sistema de aspiración (absorve el polvo que se crea cuando se corta la bóveda del cráneo).
-Bisturis desechables (deben de ser de punta roma para evitar cortes).
-Pinzas desechables.
-Grapadora de piel desechable.
-Separador, cincel y martillo de acero inoxidable.
-Contenedores.

C) Preparación de la mesa de autopsia:
-Cubrirlo con un plástico desechable (proteger la zona cefálica).
-Debajo de la cabeza colocar empapadores u hojas de filtro (absorve el L.C.R. y sangre que pueda derramarse).
-Líquidos utilizados no pueden ir al desagüe general (inutilizar los desagües, cubriendolos con papeles o trapos).

D) Preparación del cadáver y realización de la autopsia:
-Colocar el cadáver sin sacarlo del sudario.
-Colocar debajo de la cabeza papeles de filtro o empapadores de plástico.
-Extraer el ecéfalo de la forma habitual.
-Colocar el encéfalo en un recipiente (doble pesado) formol 10% (el recipiente esta lleno de formol al 10%, el cual se sabe ya su peso después de colocar el encéfalo en el recipiente y se vuelve a pesar y con una simple resta sabemos el peso del encéfalo), con pa....
-El cadáver de la bóveda del cráneo se realizara con una grapadora desechable y se cerrará el sudario.

E) Realización del tallado:
-Después de que el encéfalo lleva fijado el formol 10% un mes, se procede al tallado-
-Personal encargado de realizar el tallado:
-Modo:
-colocar el encéfalo sobre empapadores.
-cortes no tienen que tener un grosor superior a 5 mm.
-introduce los casettes con el tejido en ácido fórmico concentrado (95-100%) durante 1 hora, bajo la campana extractora.
-después en solución reciente 1:10 de formol tamponado 48 h.

DESINFECCIÓN DEL MATERIAL DE LA AUTOPSIA

-Siempre que sea posible de un sólo uso (este material se incinera en una bolsa cerrada y etiquetada con “riesgo biológico”.
-Si no es posible el material se someterá a una limpieza, inactivación (eliminación de los posibles elementos contaminantes), química, física.

1) limpieza.
i. Personal coloca bata, guantes, mascarilla y gafas.
ii. Colocar el material después del uso una hora en detergente desincrustante alcalino “Instrunet”.
iii. Esta solución deberá luego incinerarse.
Esta fase es importante pues ella sola puede reducir de forma notable la carga de inactividad, pero hay que saber que el material limpio puede estar contaminado. La fase de limpieza condiciona la eficacia de las etapas de inactivación.

2) inactivación:
i. Química
ii. Física


1) Química: por medio de productos químicos
-Hidróxido sódico 2N de una hora a dos.
-Hidróxido sódico 400 gr.
-H2O 5000 cc.
-Aclarado abundante.
-No usar con material de cobre o zinc pero sí de acero.
-No produce vapores.
-Es corrosivo, irritante y produce reacción extotérmica.
-Hipoclorito sódico a 20º C a concentración 22.000 PPM de cloro libre (2% de cloro libre se logra con lejía común recién diluida a la mitad).
-Aclarado abundante.
-Producto corrosivo para el acero.
-Incompatible con el alcohol, formaldehido y ácidos.
-Se recomienda prepararlo al momento por su inestabilidad.

2) Física: por medio de mecanismos físicos.
-Esterilización por calor húmedo en autoclave de prevacío (no gravitatorio).
-Temperatura de esterilización no inferior a 134ºC y tiempo de programación no inferior 18 minutos.
-Seis ciclos de 2 minutos a temperatura 134ºC.

DESTRUCCIÓN DEL MATERIAL, TEJIDOS Y LÍQUIDOS.

-Incinerar:
-Material de un sólo uso (agujas, guantes y bisturís, empapadores).
-Tejidos después de realizar el estudio junto con el líquido contaminado formol.
-Destrucción de líquidos (fijadores, solventes, etc), pequeños líquidos absorberlos con serrín y luego quemar.
-Todo el material para se incinerado se introducirá en contenedores de plástico duro con una pegatina de .......
-Las superficies (mesa de autopsia) se limpiará con detergente desiscrustante alcalino y después con hidróxido sódico al 2N.





- Daniela Ancich - ARGENTINA  (15/11/2009 18:14:01)

Francisco Borja Gutierrez Corres
Me cambiaste ahora el nombre es Daniela.
me causa gracias por que aca solo se usa el apellido paterno y tengo un solo nombre de pila-
no hay problema.
No tuvismos problemas con la autoclave no se desarmo nada el tejido como pensamos.estban en parafina ya asi que quedo el material solo y luego se volvio a entacar y se llevo la centro de referencia.y no hubo porblemas con la IHQ.
El cerebro luego lo incineramos y se limpio todo cuando se se supo el diagnostico.
hay un trabajo que lo busco donde habla de particulas incompletas infectivas eb tacos de bipsias guardadas ,lo mismo que paso con otros virus lentos.
lo busco.
La paciente tenia una quiste en higado y fue derivada al hospital por sintomas de demencia y temblor,con diag de enfermedad de Wilson-
Te busco el artuiculo y lo pego.
En el mismo tambien se decia que el agua y el formol y todo lo que se deseche de liquidos no pueden ir a la cañeria gral.
Cauntos casos tiene España de CJ??
Saludos
Daniela






























- Arantza Jareño San Joaquin - ESPAÑA  (16/11/2009 15:50:52)

buen trabajo y muy interesante un saludo

- Alfredo Puertas Cantería - ESPAÑA  (16/11/2009 22:03:13)

Muy sencillo, claro e interesante. El tema lo requiere. Buenas fotos y buen trabajo.

- maria teresa perez grande - ESPAÑA  (17/11/2009 18:47:00)

buen trabajo y muy bien explicado despues hasta las explicaciones y documentacion de los comentarios es excelente .zorionak.

- Josune Jubindo Lumbreras - ESPAÑA  (17/11/2009 18:57:36)

Excelente trabajo chicos!!!.Saludos.

- SONIA MOLINA RIAÑO - ESPAÑA  (18/11/2009 17:17:37)

Un trabajo interesante y muy bien explicado, incluso los comentarios. Felicidades compañeros

- Mª BELEN RUBIO PEREZ - ESPAÑA  (19/11/2009 17:15:25)

un trabajo muy interesante y claro. Felicidades

- Irina Hernández Melendi - CUBA  (20/11/2009 21:09:48)

Interesante trabajo, muy bien presentado, las imágenes están muy bonitas, aprendí algunas cosas que no conocía. Felicidades.

- ANA ISABEL GOITIA VIAÑA - ESPAÑA  (21/11/2009 20:44:19)

Un trabajo excelente,enhorabuena.

- JESUS LOMAS GARCIA - ESPAÑA  (23/11/2009 21:48:36)

Hola. Me gustaría saber cuánto cuesta (de forma aproximada) realizar esta técnica a un corte de cerebro.
Un saludo

- DORLETA LOPEZ DE URALDE AMESCUA - ESPAÑA  (23/11/2009 22:34:55)

Francisco, enhorabuena por el trabajo realizado. Muy interesante ya que desconocía la manipulación de estas muestras. Fotos muy representativas.

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (24/11/2009 10:39:42)

JESUS LOMAS GARCIA, me imagino que te refieres al precio, el acuerdo que tenemos con la casa comercial es a 11 euros por cada portaobjetos. un saludo.

- Daniela Ancich - ARGENTINA  (26/11/2009 0:24:19)

- Francisco Borja Gutierrez Corres
Te pregunte cuantos casos tiene España de EET
Saludos

- PILAR ISABEL GONZALEZ MARQUEZ - ESPAÑA  (26/11/2009 20:25:18)

Me ha fascinado su trabajo, desconocía muchas de las prácticas en el descritas. Sólo me da que pensar todo lo que aún me queda por aprender. Trabajos como este son los que dan la motivación. Enhorabuena.

- RAQUEL GONZALEZ MARTINEZ - ESPAÑA  (27/11/2009 14:02:55)


Enhorabuena por el trabajo. Breve pero completo, explicado con todo detalle el procedimiento a seguir, con las diluciones necesarias y los tiempos requeridos. Fantásticas las imágenes de inmunohistoquímica espuestas.

- ANDREA RODRIGUEZ FERNANDEZ - ESPAÑA  (27/11/2009 21:22:31)

Felicidades por el trabajo, es muy ilustrativo, claro y conciso. estoy totalmente deacuerdo con Mª Antonia Revuelta, aunque se haya inlcuido en formico espreferible guardar todas las normas de seguridad puestas a nuestro alcance, porque nunca se sabe..........
nuchas gracias y animo para seguir desarrollando vuestro trabajo. Un saludo

- AITZIBER GAYOSO ALBERRO - ESPAÑA  (29/11/2009 17:38:25)

Me parece un tema muy interesante ,ya que no es un estudio muy habitual. Creo que está muy bien enfocado de cara al tarabajo de laboratorio y puede resultar de gran utilidd disponer de dicha técnica. Enhorabuena.

- Joaquina Capellan Güemes - ESPAÑA  (29/11/2009 23:16:07)

Hola Borja soy Joaquina me parece muy interesante el trabajo que habeis realizado . ¿El microtomo que utilizais es siempre el mismo y la persona que corta es la misma o cambiais? .
Un saludo

- jose javier aguirre anda - ESPAÑA  (30/11/2009 17:00:12)

Casi se acaba el congreso y me quedo sin felicitaros por vuestro trabajo

Que suerte tenemos de contar con técnicos como vosotros, con los que aprendemos a diario

Un abrazo

Jota

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (30/11/2009 18:33:23)

Joaquina el microtomo no es el mismo ni la persona tampoco, lo importante, si hablais de la contaminacion es el acido formico en el tallado durante 1 hora, el empleo de guantes anticorte como en cualquier biopsia, pues los guantes normales no evitan la contaminación ante un corte. Un besazo y mucho animo.

- Francisco Borja Gutierrez Corres - ESPAÑA (Autor) (30/11/2009 18:38:41)

Muchas gracias a todos los que han seguido este tema y a sus comentarios, muchos de vosostros sois tecnicos y desearia que en proximas edicciones participarais con vuestras ponencias o comunicaciones.
Un saludo y muchas gracias

- Ángel Estébanez Gallo - ESPAÑA  (30/11/2009 19:21:48)

Enhorabuena por el trabajo. ¿Cual es es PH al que vosotros realizais la recuperación? Gracias.

- EDUARDO DE MIGUEL HERRAN - ESPAÑA  (30/11/2009 19:39:22)

Excelente trabajo.Enhorabuena.Un saludo.

 

 

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