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CURSO CORTO DE BANCO DE TEJIDOS Recomendaciones para la puesta en marcha de bancos de criopreservación de tejidos neurológicos destinados a investigación. T.Tuñón (*), F.Gª Bragado-Acín (**), J. Casanova, I. Amat (*), D. Guerrero(***), JM Manubens(**). (*) Servicio de Anatomía Patológica del Hospital de Navarra
y (**) Hospital Virgen del Camino. Introducción Las enfermedades neurodegenerativas como la demencia de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson junto con los accidentes cerebrovasculares y algunas enfermedades psiquiátricas como la esquizofrenia y la depresión mayor son las causas más frecuentes de incapacidad física y mental en las personas mayores. Actualmente, el diagnóstico de certeza, en algunas de estas enfermedades, únicamente es posible mediante el estudio neuropatológico del cerebro a través de una biopsia cerebral o en la autopsia. Los criterios para el diagnóstico clínico, tienen una concordancia relativamente elevada con el diagnóstico neuropatológico, pero en un porcentaje considerable de los casos autopsiados el diagnóstico final difiere del diagnóstico clínico. La biología molecular y la neuropatología ayudan a identificar los eventos que conducen a la producción de proteínas procesadas de forma anómala. No obstante, los mecanismos que facilitan su acumulación patológica son en gran parte un enigma. En los últimos años la aportación de la genética ha sido fundamental y se han descubierto un buen número de mutaciones en los genes que regulan la síntesis de estas proteínas anómalas (APP, presenilinas I y II en la enfermedad de Alzheimer, a -sinucleína -Park1 y Park 2 - en las formas familiares de la enfermedad de Parkinson y demencias con cuerpos de Lewy, proteína tau en la enfermedad de Pick, demencia frontotemporal y parálisis supranuclear progresiva, SOD1 en la Esclerosis lateral amiotrófica, Huntingtina en enfermedad de Huntington, Ataxina I,II y III en las Ataxias espinocerebelosas y proteína priónica - PrPsc – en las enfermedades priónicas).Se hace necesario por tanto, obtener tejido cerebral en las mejores condiciones para la investigación, con el objetivo final de alcanzar dianas terapéuticas efectivas en estas enfermedades. Es imprescindible la colaboración de neuropatólogos especialmente formados en este área.
Estado de la cuestión El número de autopsias que se realizan en Europa ha disminuido en la mayoría de los países durante los últimos años y parece ser ésta una tendencia creciente. Es urgente garantizar una mayor calidad en los métodos de investigación clínico-patológica para poder recabar donaciones de tejido neurológico postmortem, ofertando a los afectados garantías suficientes de su adecuada utilización. Mejorando el rendimiento científico, ganarán credibilidad los argumentos en favor de la donación de cerebros para la investigación. Los bancos de tejidos neurológicos deberán coordinarse para trabajar conjuntamente en grupos o redes temáticas. El objetivo final de esta coordinación será ofrecer a los investigadores de diferentes campos de las neurociencias tejido nervioso en condiciones óptimas. Por este motivo, no sólo el diagnóstico debe seguir un protocolo común entre los distintos centros, sino que se deberá garantizar la homogeneidad en el proceso de obtención de muestras y métodos de almacenamiento. En algunos países se considera que salvo cuando se ha expresado específicamente lo contrario, las muestras procedentes de autopsias clínicas pueden emplearse para investigación. En otros, como ocurre en España, es necesario que se haya realizado la donación expresa del tejido para este fin. Un banco de cerebros sólidamente diseñado es el mejor complemento científico para los estudios con base poblacional o investigaciones con seguimiento clínico protocolizado de series de casos y controles.
Metodología Campaña de información Cuando todo el sistema esté preparado, se deberá informar al personal sanitario de la puesta en marcha del banco y también se dará a conocer a la opinión pública. Los profesionales que participan en el seguimiento clínico de pacientes neurológicos, solicitarán la donación en todos los casos que consideren oportunos, empleando los materiales confeccionados para divulgar los objetivos y facilitar el proceso de donación por parte del paciente o sus representantes legales. Obtención y procesamiento del tejido Cuando el donante muere, deben estar perfectamente definidos todos los pasos para que la familia pueda notificar al banco la defunción a través de un teléfono de contacto permanente. Desde este momento, el proceso de extracción del tejido nervioso – financiado por el propio banco- se inserta - siguiendo un protocolo preestablecido - en el trayecto desde el lugar del fallecimiento (domicilio, residencia o centro hospitalario) hasta el tanatorio o domicilio (siguiendo las indicaciones expresas de la familia). La extracción del tejido nervioso se realiza en la sala de autopsias y se traslada inmediatamente al banco, donde se lleva a cabo el procesamiento y preparación del tejido. Uno de los hemisferios cerebrales (generalmente el derecho) se congela mediante hielo seco en cortes coronales de un centímetro de grosor. El otro hemisferio se fija entero durante tres semanas en formol tamponado antes de obtener las muestras necesarias para realizar el diagnóstico. Cuando se sospecha patología predominante en el hemisferio derecho, se recomienda obtener también muestras de este hemisferio para congelar, antes de fijarlo en formol. Las variables relacionadas con los efectos de la causa de la muerte, tiempo postmortem y temperatura ambiente, puede estimarse midiendo el pH del líquido cefalorraquídeo o del propio tejido cerebral. A pesar de que se considera óptimo el tejido cerebral congelado a –80 ºC, no se conoce todavía bien en qué medida puede deteriorarse con el paso del tiempo. Datos de la muestra El conjunto mínimo de datos necesarios acerca de la muestra, debe contemplar edad, sexo, datos de la historia clínica, causa del fallecimiento, tipo de muestra, pH, tiempo postmortem y método de congelación y procesamiento. La información clínica debe registrarse de forma anónima, empleando códigos de identificación que permitan en todo momento garantizar el anonimato y manejo del material de investigación de forma despersonalizada. Diagnóstico neuropatológico El protocolo de estudio debe incluir las técnicas adecuadas a cada caso, siguiendo los criterios de diagnóstico neuropatológico establecidos. En un reciente trabajo de revisión realizado por Tuñón y cols se recogen en forma de algoritmo los diferentes pasos en este proceso diagnóstico. Puede verse en la dirección de internet: http://conganat.uninet.edu/conferencias/C004/index.htmlControles de calidad Además de evaluar cuidadosamente cada una de las técnicas empleadas en la tinción e inmuno-tinción de las preparaciones utilizadas en el diagnóstico, debe garantizarse la seguridad de las muestras . Es preciso disponer de congeladores de repuesto en funcionamiento para poder mantener adecuadamente el material congelado en caso de avería. El local del banco de criopreservación debe disponer de un generador de electricidad propio y de sistemas sofisticados de alarma para casos de emergencia de tipo mecánico o eléctrico. Debe considerarse además, un método de almacenamiento transitorio con nivel máximo de bioseguridad y de identificación de priones antes de proceder a la incorporación del material en el congelador definitivo. El banco debe disponer de recursos informáticos propios y gestionar por completo todo el proceso de diagnóstico, almacenamiento y conservación del tejido. Solicitud y cesión de muestras para investigación Desde el punto de vista ético y legal es muy importante que los bancos sean entidades sin ánimo de lucro. Las tasas de gestión y transporte de los cerebros de los donantes correrán a cargo de los usuarios que soliciten las muestras. Los criterios de solicitud y cesión de muestras quedarán recogidos en un documento propio de cada banco. Se realizará con criterios similares a los que utilizan otros grupos siempre teniendo en cuenta que hay una obligación ética de ponerlo a disposición de la comunidad científica acreditada ya que el tejido almacenado ha sido donado para tal fin.
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| © SEAP. Sociedad Española de Anatomía Patológica | Actualizado: 09/07/2003 |
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