Efectos de la radiofrecuencia sobre la piel. Estudio experimental

Lidia Ortiz Ortiz^[1], Nuria Álvarez Sánchez^[1], Francisco José Gómez García^[1], Vicente Vicente Ortega^[1]
(1) Cátedra de Anatomía Patológica, Dep. Otorrinolaringología, Oftalmología y Anatomía Patológica, Facultad de Medicina, Universidad de Murcia, Campus de Espinardo, Murcia, España. ESPAÑA

Resumen

RESUMEN

Introducción: La radiofrecuencia es uno de los tratamientos actuales más utilizados para el rejuvenecimiento cutáneo. Es un método selectivo mediante disparos de radiofrecuencia a la dermis y planos subdérmicos (Sadick, 2003) que provocan la contracción de las fibras de colágeno seguida de la síntesis de colágeno (Zelickson, 2004).

Material y métodos: Hemos aplicado 6 sesiones (1 sesión/semana) de radiofrecuencia a cobayas y realizamos biopsias cutáneas tras cada sesión y a los dos meses después del último tratamiento. Las muestras fueron incluidas en parafina por el método habitual, seccionadas a 5 μm y teñidas con hematoxilina-eosina y la tinción de van Gieson.

Resultados: Los cambios más relevantes los encontramos a nivel de la dermis papilar que sufrió una expansión debida a edema y congestión vascular (primera mitad del experimento) y posteriormente al aumento de celularidad y colágeno.

Conclusión: El equipo Thermafine Lift no provoca alteraciones macroscópicas ni microscópicas relevantes en la piel del cobaya.

Bibliografía:

• Sadick NS. Update on non-ablative light therapy for rejuvenation: a review. Laser Surg Med. 2003;32(2):120-8.
• Zelickson BD, Kist D, Bernstein E, Brown DB, Ksenzenko S, Burns J, Kilmer S, Mehregan D, Pope K. Histological and ultrastructural evaluation of the effects of a radiofrequency-based nonablative dermal remodeling device: a pilot study. Arch Dermatol. 2004;140(2):204-9.

Introduccion    

Todos los órganos sufren el envejecimiento cronológico. Sin embargo, la piel puede sufrir además un tipo de envejecimiento precoz y patológico conocido como fotoenvejecimiento o dermatoheliosis ¹. El fotoenvejecimiento es provocado principalmente por las radiaciones ultravioleta solares, y depende de diversas circunstancias, como el tipo y tiempo de exposición al sol, el fototipo cutáneo, tabaco, etc. ^{2, 3, 4}. El fotoenvejecimiento representa más que un problema estético, pues tiene enormes connotaciones sanitarias e incluso económicas. El interés del mundo occidental por presentar una apariencia agradable ha llevado a que los EEUU gasten unos 20 billones de dólares al año en productos cosméticos y alrededor de 4 en tratar los daños del fotoenvejecimiento cutáneo ^{5, 6, 7, 8}. El cambio más característico del envejecimiento es la aparición de arrugas por la pérdida de elasticidad de la piel. La piel se adelgaza y pierde grasa, dando una apariencia menos turgente ⁹. Con el envejecimiento, los fibroblastos se hacen más pequeños y su tasa metabólica y de división se reduce ⁹; los daños producidos por el sol a menudo hacen que crezcan de forma errática y produzcan colágeno defectuoso ¹⁰. Además, la cantidad de colágeno y de elastina disminuye y las fibras aparecen más desorganizadas ¹¹.

La radiofrecuencia es la innovación terapéutica más avanzada de los últimos años, desde la aparición del láser, en el campo de la dermatología y de la cirugía estética utilizada en el rejuvenecimiento de la piel. La radiofrecuencia se ha utilizado en medicina desde la década de los 40, recientes descubrimientos han posibilitado disponer de un método selectivo mediante disparos de radiofrecuencia a la dermis profunda y a las capas subdérmicas ¹². El método no es invasivo, ya que reduce la flaccidez, las arrugas características del envejecimiento de la piel sin necesidad de inyectar ni de técnicas de cirugía y logra resultados equivalentes al lifting quirúrgico ¹³.

La radiofrecuencia consiste en radiaciones de alta frecuencia con generación de ondas entrelazadas dentro del rango utilizado para la radioemisión y en equipos utilizados habitualmente en el campo de la estética profesional, o sea hasta 12 MHz. La interacción de este tipo de ondas con los tejidos sólo genera efectos térmicos ¹⁴. Los planos orgánicos de mayor resistividad ofrecen mayor calentamiento. De mayor a menor resistividad se sitúan: piel, grasa, huesos, tejido nervioso, tejido muscular, líquidos orgánicos, etc. ¹⁵. La impedancia del tejido diana es la que determinará el efecto de la radiofrecuencia sobre ella ¹⁶.

En nuestro estudio hemos utilizado un equipo emisor de ondas entrelazadas de radiofrecuencia de 4 a 8 Mhz que actúa hasta alrededor de 2 mm bajo la piel, en función de las características de la piel y de las sustancias polares, así que las moléculas que se encuentran en medio acuoso (piel hidratada), se mueven mejor ¹². El paso de las ondas de radiofrecuencia en el cuerpo desprende calor que es transportado con el riego sanguíneo, así que las ondas de radiofrecuencia alteran las cargas eléctricas  positivas y negativas de las moléculas, provocando su enfrentamiento y rozamiento. El calor obtenido se mantiene por encima de 37º durante unas 2 horas, y superior a 42º durante 15-20 minutos aproximadamente. Debido al calor generado a nivel dérmico, ocasiona enrojecimiento de la piel, que provoca una vasodilatación (es un efecto trófico que permite llevar más nutrientes a la zona), y origina efectos anti-inflamatorio y anti-bactericida. Este calor es comunicado al tejido conjuntivo de la dermis produciendo una regeneración de la misma al causar hipertermia instantánea con lo que se produce de este modo un efecto sinérgico entre la contracción inmediata de las fibras de colágeno, que permite reducir la flacidez sin crear “pliegues” en la piel; la activación de los fibroblastos, encargados de la producción del colágeno para iniciar un proceso de reparación y remodelación la piel, y por tanto, obtener un efecto lifting (reducción de arrugas). También origina reducción del acné, mediante la inhibición de la glándula sebácea y la reducción de las cicatrices del acné ¹⁷. En una persona de edad avanzada la capacidad de respuesta es menor que la de una más joven, pero lo que sí se consigue es una buena regularización de la actividad celular, y volver a provocar reacciones que ya no ocurren por la ralentización molecular ¹⁸.

Material y Métodos    

Animales:

            Hemos utilizado 18 cobayas tricolor adultos, 9 machos y 9 hembras, con un peso medio de 722.875 g y una media de edad de 7 meses procedentes del Servicio de Animales de Laboratorio (SACE) de la Universidad de Murcia (REGAES300305440012).

Equipo:

Hemos utilizado el equipo emisor de radiofrecuencia Thermafine Lift, del Grupo Soliláser, S.L. (España), que emite ondas entrelazadas de radiofrecuencia a 4 y 8 Mhz. En el experimento hemos utilizado la potencia de 80 Julios/cm² y un sistema de refrigeración de aire. Es un complejo sistema electrónico que transmite calor directamente al tejido conjuntivo de la dermis y a la capa entre subdermis y dermis (zona de síntesis de colágeno), sin afectar a la epidermis ya que actúa en profundidad, es decir, el calentamiento es homogéneo en cada zona, producido de dentro hacia fuera, e ira ascendiendo hacia las capas superficiales de la piel, con unos resultados duraderos entre 4 y 6 sesiones, sin precisar cirugía ni  anestesia.

Procedimiento experimental:

Los animales se han mantenido en cajas individuales, en una habitación sin ventanas con un fotoperíodo luz-oscuridad 12/12 horas, temperatura entre 20º-24º y un nivel de humedad relativa del 55% ± 10%. Se les suministró comida y bebida “ad libitum”, siguiendo la guía establecida por la Unión Europea sobre la protección de los animales utilizados en experimentación (86/609/CEE). Los animales fueron separados en dos grupos: grupo I (6 animales control); grupo II (12 animales tratados). Los animales fueron rasurados previamente al tratamiento, comprobando la temperatura superficial de la piel con un termómetro láser RS Mini IR Thermometer (Raytek, Alemania). A continuación aplicamos el cabezal emisor del aparato para subir la temperatura de la zona entre 3 y 5ºC. Aplicamos la radiofrecuencia a los animales del grupo II durante 6 minutos en 6 sesiones (una por semana). A las 48-72 horas de cada sesión realizamos biopsias punch de 8 mm a un animal control (grupo I) y dos tratados (grupo II) y una séptima biopsia pasados 2 meses de la última sesión.

Estudio anatomopatológico:

Al final del estudio los animales fueron sacrificados mediante inyección de pentobarbital sódico (200 mg/kg) y se extirpó la piel del lomo para su estudio, junto con las 126 muestras cutáneas de todas las zonas tratadas y controles que fueron procesadas por el método habitual para su inclusión en parafina, cortadas en secciones histológicas de 5 μm. Utilizamos las siguientes tinciones: Hematoxilina-Eosina y la técnica de van Gieson (tinción específica para fibras colágenas). Los resultados de la técnica especiale de tinción fueron valorados por dos observadores según el grado de intensidad: + (leve), ++ (moderada), +++ (intensa). Además, se midió el espesor medio de la dermis utilizando un oculómetro Leitz.

Estudio estadistico:

            Para el análisis estadístico hemos utilizado el análisis de varianza simple y doble con interacción (en las tinciones especiales asignamos valores a los resultados (+ = 1, ++ = 2, +++ = 3) y normalizamos los datos calculando la raíz cuadrada del dato más 0.5), complementándolos con la comparación de medias dos a dos con la t-Student con la corrección de Bonferroni. Consideramos significativos valores de p≤0.05.

Resultados    

Características clínicas. La única alteración macroscópica relevante observada en los animales tratados correspondió a la presentación de eritema leve tras cada sesión de la aplicación del equipo que desaparecía de forma espontánea a las 2 ó 3 horas. Asimismo, tras el tratamiento se producía un aumento de 3 a 5ºC de la temperatura en las zonas tratadas respecto de los controles.

Características microscópicas generales. El estudio con la tinción habitual de Hematoxilina-Eosina demostró cambios en la epidermis, aunque los más importantes se produjeron a nivel dérmico. En las muestras tomadas tras la primera sesión se observaba homogenización leve del estrato córneo, que en esas zonas presentaba una estructura compacta, homogénea e intensamente eosinófila. Tras la segunda sesión este fenómeno se intensificó, afectando también a la epidermis de los espacios interporo; en estas muestras observamos además dilatación folicular y la disposición del pigmento melánico en acúmulos irregulares.  Las muestras cutáneas tras la tercera sesión, además de la homogenización leve del estrato córneo, mostraban despegamiento parcial del estrato córneo en algunas zonas. Tras la cuarta sesión observamos escasas áreas de homogenización en las zonas de los poros foliculares y en ocasiones en las zonas interporo, así como áreas irregulares de hiperplasia epidérmica. Tras la sexta sesión, la epidermis no mostraba alteraciones relevantes respecto a los controles, al igual que en las muestras de la séptima biopsia (tras dos meses sin tratamiento).

            Los cambios dérmicos se caracterizaron por la expansión de la dermis papilar que era consecuencia, en la primera fase del estudio (de la primera a la cuarta sesión), de la congestión de los vasos sanguíneos dérmicos y la presencia de edema, mientras que en la segunda mitad del experimento (sesiones quinta y sexta) se debían al aumento de la sustancia intercelular y de la celularidad. Las muestras tras la primera sesión presentaban expansión de la dermis papilar por congestión vascular y edema. Tras la segunda sesión mostraban una expansión mayor de la dermis papilar causada por el edema. Tras la tercera sesión, además del edema, observamos la dilatación de los capilares sanguíneos, aunque no infiltrados inflamatorios. Las muestras correspondientes a la cuarta sesión mostraban características de transición: pues aunque se mantenían el edema y la congestión vascular descritos en la primera mitad del estudio, también se observaba un aumento de la sustancia intercelular amorfa.

A partir de la quinta sesión destacaban, además de la congestión vascular y el edema, el aspecto más compacto de la dermis papilar por el depósito de sustancia intercelular y el aumento de las poblaciones de células residentes (fibroblastos e histiocitos). Las muestras de la sexta sesión mantenían la congestión vascular así como el depósito de sustancia intercelular e incremento de las poblaciones de células residentes. En las biopsias realizadas a los dos meses de la última sesión no observamos congestión vascular, edema, ni infiltrados inflamatorios, aunque se mantenía el depósito de sustancia intercelular y el aumento de células residentes.

Espesor dérmico. El espesor medio de la dermis papilar fue aumentando de forma estadísticamente significativa (p<0.0001) a lo largo del estudio respecto a los controles. En las secciones histológicas realizadas tras la primera sesión el espesor mostraba un aumento de 0.045 mm (p<0.0001) respecto al control. Tras la siguiente sesión aumentó significativamente respecto a la primera sesión (p<0.0001), siendo 0.075 mm mayor que en el control. Tras la tercera sesión se mantuvo sin cambios significativos, aunque a partir de la cuarta sesión experimentó un aumento significativo (p<0.004), siendo 0.1017 mm mayor que el control. El espesor sufrió un nuevo incremento significativo tras la quinta sesión (p<0.002), llegando a doblar los valores de los controles (aumento de 0.1267 mm respecto a los controles), así como en tras sexta sesión (p<0.001) (aumento de 0.155 mm respecto a los controles). El espesor medio se estabilizó en las muestras de la séptima biopsia, sin cambios significativos respecto a la anterior (Tabla 1, Figura 4).

 

	sesión	1	2	3	4	5	6	7
Control	media	0,1067	0,1133	0,12	0,1233	0,1233	0,1233	0,11
	desviación	0,01155	0,00577	0,01	0,01155	0,01528	0,00577	0,01
Tratado	media	0,1517	0,1883	0,2017	0,225	0,25	0,2783	0,28
	desviación	0,00753	0,00753	0,00753	0,01517	0,02098	0,01169	0,01414
aumento		0,045	0,075	0,0817	0,1017	0,1267	0,155	0,17
% respecto al control		142,174321	166,19594	168,083333	182,481752	202,757502	225,709651	254,545455
aumento respecto a sesión anterior			0,0366	0,0134	0,0233	0,025	0,0283	0,0017

            No observamos variaciones estadísticamente significativas entre sesiones en el espesor medio de la dermis las secciones histológicas correspondientes a las zonas controles.

Estudio del colágeno dérmico mediante una técnica de tinción específica. Encontramos estadísticamente significativas (p<0.0001) entre las zonas tratadas y las controles de secciones teñidas con la tinción de van Gieson.

            Las fibras colágenas estaban aumentadas respecto a los controles (p<0.0001) en la primera sesión. Se mantuvieron estables durante la segunda y tercera sesiones, sufriendo un brusco aumento en la cuarta (p<0.033) y quedaron de nuevo sin cambios estadísticamente significativos hasta el final del experimento (Tabla 2, Figuras 5, 6, 7)

fiogf49gjkf0dEfectos del tratamiento con radiofrecuencia en la dermis. Biopsia control.">
Figura 1 -

fiogf49gjkf0dEfectos del tratamiento con radiofrecuencia en la dermis. Tercera biopsia: edema y dilatación de los capilares sanguíneos en la dermis (H.E., 500x).">
Figura 2 -

fiogf49gjkf0dEfectos del tratamiento con radiofrecuencia en la dermis. Séptima biopsia: mantenimiento del depósito de sustancia intercelular y del aumento de células residentes (H.E., 200x).">
Figura 3 -

fiogf49gjkf0dMedida del espesor medio de la dermis papilar en secciones histológicas de biopsias tomadas a animales tratados y control a lo largo del experimento. Barra de error: desviación estándar.">
Figura 4 -

fiogf49gjkf0dEfectos del tratamiento con radiofrecuencia en las fibras colágenas dérmicas. Control (van Gieson, 312,5x).">
Figura 5 -

fiogf49gjkf0dEfectos del tratamiento con radiofrecuencia en las fibras colágenas dérmicas. Aumento de las fibras de colágeno tras el tratamiento (van Gienson, 312,5x).">
Figura 6 -

fiogf49gjkf0dAnálisis semicuantitativo del contenido de fibras colágenas de la dermis en secciones histológicas de biopsias tomadas a animales tratados y control a lo largo del experimento. Barra de error: desviación estándar.">
Figura 7 -

Discusión    

Entre las diversas técnicas utilizadas para el rejuvenecimiento de la piel, la más reciente es la radiofrecuencia ²⁰, que es empleada fundamentalmente para el tratamiento de arrugas faciales ^{20, 13}, de los pliegues nasolabiales  ^{15, 17, 21}, para mejorar la laxitud de cuello ^{15, 22} y para la elevación de párpados ^{23, 12} en el campo de la medicina cosmética.

Según su aplicación existen distintos tipos de radiofrecuencia: de baja frecuencia (1 Hz a 25.000 Hz); de frecuencia media (25 KHz a 500 KH); y de alta frecuencia (500 KHz a ¥) con capacidad de mover moléculas más grandes y profundas.

Para nuestro estudio experimental hemos aplicado radiofrecuencia de alta frecuencia con el equipo Thermafine Lift sobre la piel de cobayas. Hemos elegido este animal debido a que su piel, junto a la del cerdo, es la más parecida a la humana ²⁴. Hemos utilizado una emisión de radiofrecuencia de 4 y 8 Mhz, que no parece provocar alteraciones biológicas, según ha descrito Jauchem ¹⁴. Estas ondas calientan el nivel más profundo de la piel sea cual sea el tipo de piel (fina o gruesa), al generar calor por la resistencia en la dermis y el tejido subcutáneo, pudiendo hacerlo de forma selectiva ¹². La potencia del equipo que aplicamos fue de 80 Julios/cm², que en nuestro estudio no provocó quemaduras locales, como también ha descrito Shumaker ²⁵.

            Desde el punto de vista macroscópico, los únicos cambios observados correspondieron a la presencia de eritema difuso en las zonas cutáneas a las que aplicamos la radiofrecuencia y que era de carácter pasajero, pues desparecía a las dos ó tres horas de la aplicación; este fenómeno fue descrito también por Sarradet y cols. ²⁰ y Rabe y cols ²⁶.  Dicho eritema es consecuencia de la vasodilatación de los vasos sanguíneos arteriales de la dermis o hiperemia activa, debida a la energía liberada por el equipo y que explica el aumento de la temperatura local entre 3º y 5º C respecto de las zonas no tratadas, como también ha sido señalado recientemente por Jauchem¹⁴.

Microscópicamente a partir de las primeras sesiones destacaba a nivel epidérmico la homogenización en algunas áreas del estrato córneo, que se caracterizaba por la pérdida del aspecto típico en hojaldre presentándose el estrato córneo como una estructura compacta, homogénea e intensamente eosinófila, y que era consecuencia del efecto térmico de la aplicación local del equipo. Este fenómeno es similar al descrito tras la aplicación del láser en diversos estudios ^27-29; mientras que durante las últimas sesiones predominaban los fenómenos de hiperplasia de grado leve de la epidermis.

A nivel dérmico, los cambios más relevantes afectaban a la dermis papilar permaneciendo la dermis reticular y las restantes estructuras subyacentes sin alteraciones apreciables. Dichos cambios consistían fundamentalmente en la expansión o aumento del espesor de la dermis papilar a expensas de la congestión vascular, edema y aumento de la sustancia intercelular fundamentalmente en la primera mitad del experimento; fenómenos similares a los también descritos en biopsias de pacientes por Sarradet y cols ²⁰ sometidos a tratamiento similar; mientras que en la segunda mitad, seguíamos observando dicha expansión dérmica aunque a expensas del aumento de la sustancia intercelular y de las células residentes (fibroblastos e histiocitos). Otros autores han descrito también la activación de la proliferación de los fibroblastos ^{30, 31}. No hemos observado en ningún caso respuesta inflamatoria, al contrario que Zelickson y cols ³² y Shumaker y cols ²⁵ que la han descrito en la piel del cerdo.

Las fibras colágenas sufrieron un aumento en la cuarta sesión, manteniéndose estables en las siguientes sesiones, fenómeno ya observado en otros estudios. Se ha propuesto como mecanismo de acción de la radiofrecuencia la contracción de las fibras de colágeno inmediatamente posterior al tratamiento, que causaría la contracción del tejido, seguida de la síntesis de colágeno ³². En este sentido varios estudios han demostrado el proceso de neoformación de colágeno de tipo I y III ^{33, 34, 20}.

La aplicación de radiofrecuencia mediante el equipo Thermafine Lift sobre la piel de cobayas originó la expansión de la dermis papilar, en una primera fase por congestión vascular, edema y depósito de sustancia intercelular, mientras que en la segunda mitad del experimento dicha expansión se debió al aumento de las fibras colágenas y de las células residentes (fibroblastos e histiocitos) sin originar alteraciones macro- ni microscópicas relevantes.

Conclusiones    

Agradecimientos    

Bibliografía    

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Comentarios

- Emilio Mayayo Artal (01/05/2007 20:12:07)

Interesante trabajo. Lo tendré en cuenta.
Saludos. Emilio