CICATRIZAÇÃO DE ÚLCERAS CUTÂNEAS A PARTIR DA APLICAÇÃO DE LASER HeNe.

Roberta Toffete ORTIZ^[1], Luciana MOTTA ZAIA^[1], Franacis OLIVEIRA^[1], Adriana VALADARES^[1], Jose Alexandre BACHUR^[1], Marília SAKAMOTO PEIXOTO^[2], Lacy Cardoso BRITO JUNIOR^[2]
(1) Laboratório de Fisioterapia Experimental da Universidade de Franca (UNIFRAN) – SP BRASIL
(2) Laboratório de Patologia Geral –Imunopatologia e Citologia do Departamento de Patologia, do Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal do Pará (UFPA) BRASIL

Resumo

Introdução    

                      As úlceras de decúbito, também conhecidas como escaras do leito, escaras de pressão ou úlceras de pressão, são lesões teciduais derivadas de complicações clínicas associadas a persistência de pacientes em leito hospitalar, por longos períodos em posições deitadas ou sentadas, a partir de mobilidades restritas. Estas lesões são ocasionadas por quadros de isquemias prolongadas de determinadas áreas teciduais associadas a compressão e do entrelaçamento arterial de tecidos comprimidos entre dois planos duros, como a superfície óssea e o plano do leito, gerando condições para a destruição da epiderme, com o surgimento de áreas de eritema e até ulcerações profundas com exposição das estruturas ósseas [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 19].

                   Os processos de cicatrização e reparo tecidual destas lesões traumáticas, por sua vez, são dependentes de uma série de fatores intrínsecos e extrínsecos ao pacientes, como a presença de doenças de base como o diabetes, que gera perda da sensibilidade dolorosa da área lesada, e impede que o paciente sinta necessidade de mudança de posição quando a pressão sobre um ponto de lesão torna-se superior a 30 mmHg; e também associadas a presença de infecções bacterianas no local da lesão, propiciado pela presença do tecido necrótico que se torna o substrato para o crescimento bacteriano, aumentando ainda mais a necrose tecidual e o comprometimento de outras partes do tecido (2, 3, 4, 5, 6, 12, 19).

                  O reparo e a reestruturação destas lesões, assim, constituem-se em processos complexos que, de um modo geral, caracteriza-se basicamente por três fases: uma fase aguda inflamatória, com vasodilatação e intenso infiltrado inflamatório próximo às margens da lesão; uma fase de cronificação, com a formação do tecido de granulação, proliferação de fibroblastos e formação de matriz extracelular; e outra fase de reepitelização e remodelação da área lesada [1,4, 5, 6, 7].

                   Quando, porém, estes processos reparo e regeneração tecidual são maus sucedidos, estas lesões acabam por gerar a necessitar de intervenção terapêutica, para auxiliar nos processos de cicatrização de úlceras de decúbito. Neste sentido a laser terapia apresenta dentre outras vantagens o auxilio (1) na resolução do processo inflamatório, estimulando a liberação de substâncias pré-formadas como a histamina e serotonina, e inibindo a formação de bradicinina; (2) na reepitelização da área lesada, melhorando o tropismo tissular; e (3) proporcionando o estímulo da microcirculação através de mediadores químicos [2, 8, 9, 10, 12, 13, 15, 16, 18]. Porém, a interação do laser com a pele são complexas e dependentes de diversos fatores como o equipamento utilizado, o tipo de radiação e as características da pele da área lesada [8, 9, 3, 11, 13, 16, 17, 18, 20, 23, 32, 34].

                   Estas questões nos motivaram a desenvolver um estudo experimental objetivando a análise dos fenômenos histopatológicos envolvidos nos processos de cicatrização tecidual de úlceras experimentais assépticas, da região dorsal de ratos Wistar, submetidas à terapia com laser Hélio-Neônio. Visando esclarecer os diferentes aspectos do tecido de granulação, da epitelização e da neoformação tecidual, bem como os possíveis efeitos da laser terapia Hélio-Neônica nos processos de reparo tecidual.

Material e Métodos    

ANIMAIS

Foram utilizados 36 ratos Wistar (Rattus norvegicus), machos, com peso variando entre 200 a 250 g, alocados isoladamente ao acaso em gaiolas de polipropileno e mantidos em condições apropriadas de temperatura e luminosidade (controle de claro e escuro de 12 horas), com livre acesso à água e dieta padrão, no Biotério da Universidade de Franca.

PROCEDIMENTO CIRÚRGICO.

Todos os animais foram anestesiados com quetamine 100ml/Kg, via intraperitoneal (i.p.), imobilizados em decúbito ventral, realizada a tricotomia da região dorsal (1,5 cm abaixo do pavilhão auricular na região cervical), anti-sepsia da mesma com álcool a 70%, e posterior procedimento cirúrgico com bisturi, para a retirada de uma seção quadrada de pele de aproximadamente 1,5 cm X 1,5 cm, do dorso dos animais, no sentido crânio-caudal, com exposição da fáscia muscular. Cessados os efeitos da anestesia os animais foram colocados em gaiolas individuais, com alimentação e água ad libidum.

EQUIPAMENTO DE LASER E PROTOCOLO DE USO.

Foi utilizado aparelho emissor de laser HeNe da marca KW eletrônica LTDA, modelo Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation – HeNeplus, com os seguintes parâmetros: Saída de 3mW, comprimento de onda 632,8 nm, feixe de luz único de cor vermelho, emissão continua e direta.

O protocolo de uso do laser foi diferenciado conforme a definição dos grupos, em: (1) Grupo Tratado com Laser HeNe: pontual (4 pontos 1 J/cm²/ponto), dose/diária total 4 J/cm²/minuto, por 14 dias a partir das primeiras 24 horas após o procedimento cirúrgico; e (2) grupo controle sem tratamento. Aonde a área, ao redor da lesão nos dois grupos deste estudo, que iriam, ou não, receber o tratamento com laser era limpa, com álcool 70% (em volta da lesão), e tricotomia sempre que necessário.

PROTOCOLO DE SACRIFÍCIO DOS ANIMAIS

                        Foram utilizados 36 ratos Wistar (Rattus norvegicus), machos, com peso variando entre 200 a 250 g, alocados isoladamente ao acaso em gaiolas de polipropileno e mantidos em condições apropriadas de temperatura e luminosidade (controle de claro e escuro de 12 horas), com livre acesso à água e dieta padrão, no Biotério da Universidade de Franca.

PROCEDIMENTO E ANÁLISE HISTOLÓGICA

                     Todos os animais foram anestesiados com quetamine 100ml/Kg, via intraperitoneal (i.p.), imobilizados em decúbito ventral, realizada a tricotomia da região dorsal (1,5 cm abaixo do pavilhão auricular na região cervical), anti-sepsia da mesma com álcool a 70%, e posterior procedimento cirúrgico com bisturi, para a retirada de uma seção quadrada de pele de aproximadamente 1,5 cm X 1,5 cm, do dorso dos animais, no sentido crânio-caudal, com exposição da fáscia muscular. Cessados os efeitos da anestesia os animais foram colocados em gaiolas individuais, com alimentação e água ad libidum.

Resultados    

Os aspectos macroscópicos da cicatrização das ulcerações teciduais observados neste estudo, nos grupos controle e tratados com laser HeNe, obedeceram à mesma seqüência de eventos dependentes do tempo, isto é, formação da crosta hemato-fibrinosa, aumento da espessura da mesma e fechamento das ulcerações. Entretanto, os animais do grupo tratados com laser HeNe, apresentaram formação de crosta hemato-fibrinosa mais precoce, com 5 dias de tratamento, espessura visível e firme, seguido de pouco edema lateral, quando comparados com os animais do grupo controle, que apresentavam crosta hemato-fibrinosa fina, e edema lateral, para o mesmo período. Mantendo-se estas diferenças macroscópicas, e este padrão, ate o 7^o dia pós-cirúrgico.

Estas diferenças macroscópicas, entre os grupos de animais tratados com laser HeNe e não-tratados (controle), entretanto, não se confirmaram microscopicamente com 5 (Figuras 1A e 1B). Com 7 dias pós-cirurgia, os processos de cicatrização das lesões dos animais tratados com laser HeNe mostraram a presença de tecido de granulação com a ocupação da derme por tecido conjuntivo frouxo composto principalmente por fibroblastos, matriz colágeno e neovascularização intensos; presença de células gigantes multinucleadas de corpo estranho e células de Langhans (dados não mostrados); presença de contração lateral das bordas da lesão (Figura 1C); além da proliferação de células da camada germinativa da epiderme (não mostrado). Os processos de cicatrização das lesões dos animais não-tratados (grupo controle), por sua vez, mostraram infiltrado inflamatório intenso, tecido de granulação composto por fibroblastos e matriz colágeno; neovascularização moderada, ausência de células gigantes multinucleadas, porém, com proliferação precoce de células da epiderme nas bordas da lesão, que ainda encontrava-se friável e sensível a trações, gerando sangramentos e formação de crosta hemato-fibrinosa (Figura 1D).

Com 14 dias pós-cirurgia, os animais tratados com laser HeNe mostraram a substituição do tecido de granulação por tecido conjuntivo denso; derme composta principalmente por matriz colágeno exuberante e poucos fibroblastos; diminuição e amadurecimento dos vasos neoformados; e epiderme totalmente reconstituída em suas camadas (Figura 1E). Enquanto que no grupo controle foi observada a persistência do infiltrado inflamatório, tecido de granulação exuberante, com a derme composta principalmente por matriz colágeno desorganizada e fibroblastos, e maturação dos vasos neoformados; além de reconstituição das camadas da epiderme em sua totalidade (Figura 1E). 

fiogf49gjkf0dFIGURA 1. Fotomicrografias dos aspectos histológicos de lesões ulceraticas experimentais tratados com laser HeNe, ou não-tratadas, com 5, 7 e 14 dias pós-cirurgia. A e B. Observação das lesões com 5 dias de tratamento com laser HeNe (Figura A em objetiva de 4x), ou não-tratadas (Figura B em objetiva de 10x), mostrando a presença de crosta hemato-fibrinosa (setas) recobrindo a área lesada. C. Observação (10x) das lesões com 7 dias de tratamento com laser HeNe, com a presença de tecido de granulação composto por fibroblastos, matriz colágeno e neovascularização; e presença de contração lateral das bordas da lesão (seta). D. Observação (10x) das lesões dos animais não-tratados (Controle) com 7 dias, mostrando a presença de intenso infiltrado inflamatório (seta), tecido de granulação moderado, e proliferação precoce de células da epiderme nas bordas da lesão (seta), e crosta hemato-fibrinosa. E. Observação (10x) das lesões com 14 dias de tratamento com laser HeNe, mostrando a presença de tecido conjuntivo denso formado por matriz colágeno exuberante (seta) e epiderme totalmente reconstituída em suas camadas (seta). F. Observação (10x) das lesões dos animais não-tratados (Controle) com 14 dias, mostrando a presença de infiltrado inflamatório persistente (seta), tecido de granulação exuberante, além de reconstituição das camadas da epiderme em sua totalidade (seta).">
Figura 1 -

Discussão    

O processo de cicatrização tecidual, como referido anteriormente, constitui-se em um fenômeno complexo que envolve múltiplas variáveis, mas que tem com o único resultado esperado a substituição do tecido necrosado, e a eliminação do agente agressor, quando presente, por tecido vivo regenerativo ou reparativo [4, 5, 6, 7].

Neste modelo experimental utilizando terapia com laser HeNe foi possível observarmos o processo de cicatrização tecidual seguiu uma seqüência semelhante a encontrada por outros autores [9, 12, 18, 19, 21, 22, 23, 28, 34], principalmente associadas a fase inicial do processo de cicatrização, onde as lesões apresentaram a formação da crosta hemato-fibrinosa de espessura variável, com deposito de fibrina; e reação inflamatória aguda típica,com influxo de leucócitos para área lesada e presença de diferenciação celular de macrófagos residente em células gigantes multinucleadas. Uma fase proliferativa caracterizada pela redução do diâmetro das lesões, seguido aumento da espessura da crosta hemato-fibrinosa e contração do rebordo lateral das ulcerações, com subseqüente fechamento das mesmas de forma homogênea obedecendo a um sentido centrípeto; maturação dos vasos neoformados (formação do tecido de granulação); e uma fase de maturação com a organização estrutural da derme, e reconstituição das várias camadas da epiderme. Corroborando também com dados da literatura para modelos experimentais que utilizaram laser terapia [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 15, 18, 19, 21, 22, 23, 34].

SOARES et al. (23) e ROCHA JÚNIOR et al (28) em seus estudos, mostraram que no início do processo de cicatrização a utilização da laserterapia é importante por auxiliar nos processos de cicatrização tanto para a formação e espessura da crosta hemato-fibrinosa, como para o desenvolvimento do tecido de granulação. Provavelmente em função dos efeito biológicos associados a esta terapêutica, que promove o aumento do metabolismo, neovascularização e proliferação de fibroblastos, levando também ao aumento da formação e acumulo de colágeno no local da lesão. Fatores decisivos no processo de reparação de ulceras.

MESTER et al. (22) também em seus estudos com modelos experimentais observaram que a laserterapia teve, dentre outras características, a capacidade de estimular a proliferação de fibroblastos, aumentar a produção de fibras colágeno, estimular a liberação de substâncias vasoativas como a histamina e a bradicinina, além de estimular a microcirculação e o tropismo celular, com aumento da atividade mitótica das células da epiderme. Sendo estes dados corroborados também por outros autores na literatura [8, 9, 10, 12, 15, 16, 18, 20, 21, 24, 26, 28, 33, 34].

ALENDORF et al (27), porém, em seus estudos clínicos com cicatrização tecidual e laserterapia observaram pouco ou mesmo nenhum efeito benéfico na utilização deste tipo de terapia com laser HeNe em lesões do tipo escaras. Os dados conflitantes da literatura sobre o uso da terapia de escaras com laser HeNe, porém, resultam de dúvidas plausíveis quanto a variações nos fatores de tratamento e limitações em projetos experimentais, incluindo comparação entre a clínica heterogênea das feridas, necessidade de grupos controle e as limitações encontradas com as investigações desses resultados contraditórios. Assim, a laserterapia ainda é um método controverso e dependente de mais estudos sobre o seu mecanismo de ação sobre lesões ulcerativas.

           Para VEÇOSO (25) e outros autores [10, 12, 3, 15, 17, 18, 20, 22, 29, 30, 31, 32], porém, alguns dos principais efeitos da laserterapia envolvidas nos processos cicatriciais de úlceras teciduais são os seus efeitos: (1) antiinflamatórios durante as fases aguda, subaguda e crônica; (2) analgésicos; (3) antiedematosos; e (4) regenerativos. Sendo estes efeitos dependentes da intensidade, do tempo de aplicação e do número de aplicações.

           Contrário a esta hipótese HONMURA et al [11], em seus estudos com laser Ga-Al, consideram que a laserterapia tem efeitos inibitórios sobre o processo inflamatório a partir dos seguintes mecanismos: (1) inibição de fatores quimiotáticos nas primeiras etapas da lesão, e (2) interferência direta no processo inflamatório através da potencialização dos efeitos dos mediadores químicos indutores de edema, através de alterações induzidas pelo laser na permeabilidade vascular à água e as proteínas plasmáticas, com a retenção destes mediadores no sítio inflamatório. Corroborando com os nossos resultados em relação à redução do processo inflamatório durante todo o processo de cicatrização. Possivelmente pela inibição de fatores quimiotáticos nas primeiras etapas da lesão (dados não avaliados por em nossos estudos). Entretanto, ainda hoje se admite que mais estudos clínicos e experimentais, sobre o efeito do laser de baixa intensidade, devem ser realizados para esclarecer se os efeitos do laser sobre os processos inflamatórios são pró ou antiinflamatórias [11, 18, 21, 22, 31, 32, 34].

           Em síntese, ainda assim, nossos resultados revelam que, assim como nos relatos da literatura, o processo de cicatrização de ulcerações teciduais tratadas com laser de baixa intensidade (HeNe), resulta em modulação das atividades celulares a partir da estimulação da proliferação de fibroblastos, células endoteliais (para formação de novos vasos - neovascularização) e células epiteliais, e modulação da inflamação durante as fases iniciais do processo de cicatrização tecidual.

Conclusões    

A análise histológica das lesões experimentais tratadas com laser HeNe mostra que os principais efeitos benéficos desta laserterapia com laser HeNe pontual foram observas no início do processo de cicatrização, modulando o influxo de células para o foco da lesão, acelerando a formação e o amadurecimento do tecido de granulação, e auxiliando nos processos de reepitelização do tecido lesado de forma precoce.

Agradecimentos    

Este trabalho teve a colaboração de vários discentes do curso de fisioterapia da UNIFRAN e dos técnicos em patologia da Faculdade de Odontologia da UNIFRAN, José Luiz de Souza e Marcos Alexandre de Souza, que com grande qualidade realizaram as lâminas histológicas.

Bibliografía    

1.    CLARK. R. A. F. Biology of dermal wound repair dermatological clinics. Invest. Dermatol, 1993. v. 11, p. 647- 661.

2.    GONÇALVES, G. e PARIZOTTO, N.A. Fisiopatologia da Reparação Cutânea: Atuação da Fisioterapia. Rev. Bras. Fisiot., 1998. Vol. 3, N^o 1.

3.    HALL J, CLARKE AK, ELVINS DM, RING FJ. Low level laser therapy is ineffective in the management of rheumatoid arthritic finger joints. British Journal of Rheumatology. 1994;33:142-147.

4.    MARTINEZ – HERNANDES, A. – Reparação, Regeneração e fibrose. In: RUBIN, E. & FARBER, J.L. – Patologia. Rio de Janeiro, Interlivros, 1999 – Cap.2, 32-59.

5.    CONTRAN, R S.; KUMAR, V.; COLLINS, T. Robbins: Patologia estrutural e funcional. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001. p. 44-100..

6.    CARRICO, T.J.; MEHRHOF JUNIOR, A.I.; COHEN, I.K. Biologia da cicatrização dos feridos. Clín.Cir.Am.Norte, Rio de Janeiro, 1984, v.4, p. 763-77.

7.    BALBINO, C.A.; PEREIRA, L.M. E CURI, R. Mecanismos envolvidos na cicatrização: uma revisão. Revista Brasileira de Ciências Farmacêuticas, jan./mar. 2005, vol. 41, n. 1, p. 27-51.

8.    BALBONI, G.C.; BRANDI, M.L.; ZONEFRATI, L. and REPICE, F. Effects de L’irradiation Laser sur la production de la collagene par les fibroblasts in vitro. Bull Assoc Anat., 1983, 69: 15-8.

9.    CARVALHO, P.T.C.; MAZZER, N.; CORAZZA, A.V. e RADUAM, R.M. Os efeitos do laser de baixa intensidade em feridas cutâneas induzidas em ratas com diabetes mellitus experimental. Rev. Bras. Fisiot., 2001, Vol. 2, N^o 4.

10.    ENWEMEKA C, RODRIGUEZ 0, GALL N, WALSH N. Morphometrics of collagen fibril populations in He:Ne laser photostimulated tendons. Journal of Clinical Laser Medicine & Surgery 1990;47-52.

11.    HONMURA A, YANASE M, OBATA J, HARUKI E. Therapeutic effect of Ga-Al-As diode laser irradiation on experimentally induced inflammation in rats. Lasers in Surgery and Medicine 1992;12:441-449.

12.    CARVALHO, P.T.C.; SILVA, R.R. e SILVA, R.J. Estudo microbiológico in vitro do crescimento bacteriano após aplicação do laser HeNe em úlceras de decúbito com infecção bacteriana. Rev. Bras. Fisiot. , 2001, Vol. 2, N^o 3.

13.    KARU T. The Science of Low-Power Laser Therapy. Australia: Gordon and Breach Science Publishers; 1998.

14.    KARU T. Photobiological fundamentals of low-power laser therapy. IEEE Journal of Quantum electronics.QE-23. 1987;10:1703–1717.

15.    KLOTH L. Wound Healing: alternatives in management. USA: Churchill Livingstone; 1997. p.347–364.

16.    KOVACS, I.B.; MESTER, E and GOROC, P. Laser – induced stimulation of the vascularization of the healing wound. An ear chamber experiment. Experientia, 30: 341-3, 1974 apud Dent. Abstr. , 1989 (a), v.4, n.8, p.56-60.

17.    KOVACS, I.B.; MESTER, E and GOROC, P. Stimulation of wound healing with Laser beam in the rat. Experientia, 30: 1275-6, 1974 apud Dent. Abstr. 1989 (b), v.4, n.8, p.56-60,.

18.    ORTIZ, M.C.S.; CARRINHO, P.M.; STUART DOS SANTOS, A.A.; GONÇALVES, R.C. & PARIZOTTO, N.A. Laser de baixa intensidade: princípios e generalidades - Parte 1. Fisioterapia Brasil, Julho / Agosto 2001, p. 221-237, v. (2), N. (4).

19.    SHAL WJ, CLEVER H. Cutaneous Scars: Part I. Int J Dermatol. 1994;33:681-91.

20.    KESAVA R, GUM S, STEHNO-BITTEL L, ENWEMEKA CH. Biochemistry and biomechanics of healing tendon: part II. Effects of combined laser therapy and electrical stimulation. Medicine & Science in sports & exercise 1998;794–800.

21.    LOEVSCHALL H, ARENHOLT-BINDSLEV A Effect of low level diode laser irradiation of human oral mucosa fibroblasts in vitro. Lasers in Surgery and Medicine 1994;14:347– 354.

22.    MESTER, E.; MESTER, A.F.; MESTER, A. – The biomedical effects of Laser aplication. Lasers Surg. Med., 1985, 5: 31-9.

23.    SOARES, J.H.; TARDIVO, J.P.; GOLDENBERG, S.; KATZ, S. and MOURA, L.A.R. Aspectos morfológicos e histometricos da reparação tecidual das feridas cutâneas de ratos após irradiação com Laser de Helio-Neonico. Acta Cir. Brás., 1989, 4(2): 56-60.

24.    SURINCHAK, J.S.; ALAGO, M.L.; BELLAMY, R.F.; STUCK, B. and BELKIN, M. Effects of low-level energy lasers on the healing of full skin defects. Lasers In Surg. and Med., 1983 2: 267-274.

25.    VEÇOSO, M.C. Laser em Fisioterapia. Ed. Lovise LTDA. 1993.

26.    GOMEZ-VILLAMANDOS RJ, VALENZUELA JMS, CALATRAVA IR. He-Ne laser therapy by fibroendoscopy in the mucosa of the equine upper airway. Lasers Surg Med. 1995;16:184-8.

27.    ALLENDORF JD, BESSLER M, HUANG J, KAYTON ML, LAIRD D, NOWYGROD R, et al. Helium-neon laser irradiation at fluences of 1, 2, and 4J/cm2 failed to accelerate wound healing as assessed by wound contrature rate and tensile strength. Lasers Surg Med. 1997;20:340-5.

28.    ROCHA JÚNIOR AM, OLIVEIRA RG, FARIAS RE, ANDRADE LCR, AARESTRUP FM. Modulação da proliferação fibroblástica e da resposta inflamatória pela terapia a laser de baixa intensidade no processo de reparo tecidual. An Bras Dermatol. 2006;81(2):150-6.

29.    POURREAU-SCHNEIDER N, AHMED A, SOUDRY M, JACQUEMIER J, KOPP F, FRANQUIN JC, et al. Helium-neon laser treatment transforms fibroblasts into myofibroblasts. Am J Pathol. 1990;137:171-8.

30.    LUNDEBERG T, MALM M. Low-power He-Ne laser treatment of venous leg ulcers. Ann Plast Surg. 1991;27:537-9.

31.    VINCK EM, CAGNIE BJ, CORNELISSEN MJ, DECLEREQ HA, CAMBIER DC. Increased fibroblast proliferation induced by light emitting diode and low power laser irradiation. Lasers Med Sci. 2003;18:95-9.

32.    LUCAS C, STANBOROUGH RW, FREEMAN CL, HAAN DE RJ. Efficacy of low level laser therapy on wound healing in human subjects: a systematic review. Lasers Med Sci. 2000;15:81-93.

33.    LUCAS C, GEMERT MJC, HAAN RJ. Efficacy of low-level laser therapy in the management of stage III decubitus ulcers: a prospective, observer-blinded multicentre randomized clinical trial. Lasers Med Sci. 2003;18:72-7.

34.    SCHINDL A, SCHINDL M, PERNERSTORFER-SCHON H, SCHINDL L. Low-intensity laser therapy: a review. J Med Invest. 2000; 48:312-26.

Comentarios

- Dania Ledesma (23/05/2007 7:43:21)

Muy interesante su trabajo.
Felicitaciones.

- Emilio Mayayo Artal (25/06/2007 18:31:53)

Yo trabajé por un tiempo en experimentación de los efectos LASER y estoy de acuerdo con vuestros resultados. Me parece un buen planteamiento y una línea a seguir.
Saludos. Emilio

- Zurama Eloisa Castro Castro (26/12/2007 14:05:50)

Estoy trabajando en la Cicatrizacion de la Ulcera Venosa en general me parecen muy interesantes sus resultados ,
Felicitaciones,
Zurama