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Detección inmunohistoquímica de citoqueratina en tumores mamarios de perras (Canis familiaris) de distinto tipo histológico

Oscar Lopez Sandoval[1]
(1) Director Laboratorio de Histopatologia Facultad de Medicina Veterinaria Universidad Santo Tomas CHILE

Resumen

-align: justify;">Para el presente trabajo se seleccionaron y clasificaron 32 tumores mamarios de perras (Canis familiaris) de distinto tipo histológico y criterio biológico. Mediante técnicas de inmunohistoquímica se les hizo reaccionar con el anticuerpo monoclonal CK34βE12. Los objetivos de esta investigación fueron determinar la expresión de citoqueratina en los tumores seleccionados, describir el patrón de distribución y evaluar la utilidad diagnóstica de esta técnica.

Del total de tumores diagnosticados, el 37,5% expresó citoqueratina. Considerando los tumores agrupados por tejido de origen, 2/3 de los tumores epiteliales expresaron inmunotinción. Los tumores mixtos positivos a la reacción fueron del tipo benigno y por el contrario, los tumores mixtos malignos y los de tipo mesenquimático no expresaron citoqueratina.

Los tumores mamarios de tipo epitelial benigno que expresan citoqueratina lo hacen en zonas intraductales escamosas, los epiteliales malignos en zonas lobulares escamosas o con diferenciación escamosa. Entre los tumores mixtos benignos algunos expresan citoqueratina siguiendo patrón tubular en zonas epiteliales escamosas mientras que otros lo hacen en áreas mesenquimáticas lo que indicaría que en algunos tumores mamarios benignos de ésta especie, se describe una transición epitelio-mesenquimática.

El uso de el anticuerpo monoclonal CK34βE12 en pruebas inmunohistoquímicas aplicadas a tumores mamarios en perras permite identificar componentes epiteliales con diferenciación escamosa y podría ser de utilidad en el diagnóstico de lesiones pre-cancerígenas o de malignización de algunos tumores benignos.



Mammary tumors are the second of importance in female dogs. For this reason necessary a correct and early diagnosis.

In this study 32 mammary tumors of female dogs (Canis familiaris) were selected showing different histological types and biological behavior. They were tested by immnunohistochemistry for reaction with CK34βE12 monoclonal antibody (MoAb).

The objectives were to detecte the cytokeratin expression in selected tumors, and to describe the distribution patterns and to evaluate the diagnostic utility of this tool.
Of the total of diagnosed tumors 37,5% expressed cytokeratin. Considering the epithelial tumors 2/3 express immunohistostain. The mixed tumors positive to the reaction, were all benign type. The malignant mixed tumors and the mesenchymal types did not express cytokeratin.          
 
The mammary epithelial benign tumors expressed cytokeratin in intraductal squamous zones and the epithelial malignant tumors reacted positivity in zones showing squamous differentiation.  Among the mixed benign tumors some of them expressed cytokeratin in ephitelial squamous zones whereas others did so in areas that showed ephitelial-mesenchymal transition process (EMT). This alteration is also described in mammary tumors of female dogs.
 The use of immunohistochemistry with CK34βE12 is a useful diagnostic tool because it allows a better differential diagnosis of mammary tumors in female dogs.





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Introduccion    


La inmunohistoquímica (IHQ) es un método de diagnóstico complementario a la histopatología que se basa en reacciones antígeno-anticuerpo y que permite el estudio (identificación, diferenciación y pronóstico) de las neoplasias y otras enfermedades.

Previo desenmascaramiento antigénico, esta técnica permite visualizar estructuras presentes en un tipo celular en particular, por lo que variaciones en su expresión, o reacciones en áreas de tejido de otro origen (epitelial o mesenquimático) pueden tener gran importancia en el diagnóstico diferencial.

Para la presente investigación se utilizó un anticuerpo que reacciona con sub-unidades proteicas de citoqueratina presentes en los filamentos intermedios (FI) del citoesqueleto de células de origen epitelial.

 

Citoesqueleto Celular - <div style=fiogf49gjkf0dOrganización celular donde se observan los microtubulos y microfilamentos que junto a los filamentos intermedios constituyen el citoesqueleto.">
Citoesqueleto Celular -

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Organización celular donde se observan los microtubulos y microfilamentos que junto a los filamentos intermedios constituyen el citoesqueleto.




Material y Métodos    


Este trabajo se realizó en el Laboratorio de Histopatología de la Universidad Santo Tomás en Santiago de Chile. Se seleccionaron 32 biopsias de tumores mamarios las que fueron procesadas e incluidas en parafina. Posteriormente se realizaron cortes histológicos seriados de 5 micras (μ) obteniendo 2 series de igual número de muestras.


En la primera serie se realizó el diagnóstico histopatológico (tinción Hematoxilina–Eosina) mientras que la otra se montó en portaobjetos silanizados para realizar IHQ utilizando el kit de detección Ultravision Detection System RTU (LabVisionâ). El clon o hibridoma fue el HMW Ab-3 (clon 34βE12), este anticuerpo es un isotipo de IgG1-kappa que reacciona con las proteínas de citoqueratina p1, p5, p10 y p14 con un peso molecular de 68, 58, 56.5 y 50 kD, respectivamente.


La inmunolocalización se visualiza añadiendo al final de la incubación el cromógeno diaminobencidina (DAB) que da lugar a un precipitado insoluble y color marrón.


 

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Resultados    

Del total de tumores mamarios diagnosticados, el 37,5% expresó inmunotinción (15,6% tumores epiteliales benignos, 9,4% epiteliales malignos y un 12,5% tumores mixtos benignos).

Al considerar los tumores según origen, el 66,6% de los epiteliales y el 33% de los mixtos expresaron citoqueratina mientras que ningún tumor mesenquimático presentó inmunoreacción.

Estadísticamente, al considerar los tumores de origen epitelial la Sensibilidad (Se) de la prueba fue de un 80% y la Especificidad (Ep) de 100%. El Análisis de Concordancia (Kappa de Cohen) entre la histopatología y la inmunohistoquímica fue de 82,4% (muy buena).





 

Carcinoma Espinocelular - <div style=fiogf49gjkf0dObserve la notable inmunoreacción en áreas escamosas">
Carcinoma Espinocelular -

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Observe la notable inmunoreacción en áreas escamosas


Carcinoma Espinocelular 2 - <div style=fiogf49gjkf0dSe observan áreas de "avance" o invasividad de las células cancerígenas">
Carcinoma Espinocelular 2 -

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Se observan áreas de "avance" o invasividad de las células cancerígenas


Carcinoma Espinocelular 3 - <div style=fiogf49gjkf0dDetalle celular con intensa inmunoreacción citoplasmática">
Carcinoma Espinocelular 3 -

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Detalle celular con intensa inmunoreacción citoplasmática


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Adenocarcinoma Tubular -

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Tinción H/E para diagnóstico histopatológico


Adenocarcinoma Tubular 2 - <div style=fiogf49gjkf0dSe observa inmunoreacción en áreas tubulares correspondientes a células epiteliales con componente escamoso">
Adenocarcinoma Tubular 2 -

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Se observa inmunoreacción en áreas tubulares correspondientes a células epiteliales con componente escamoso


Adenocarcinoma Tubular 3 - <div style=fiogf49gjkf0dDetalle celular de la inmunotinción">
Adenocarcinoma Tubular 3 -

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Detalle celular de la inmunotinción


Tumor Mamario Mixto Benigno - <div style=fiogf49gjkf0dTinción H/E de rutina para diagnóstico histopatológico">
Tumor Mamario Mixto Benigno -

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Tinción H/E de rutina para diagnóstico histopatológico


Tumor Mamario Mixto Benigno 2 - <div style=fiogf49gjkf0dReacción IHQ a Citoqueratina en áreas de tejido mesenquimático">
Tumor Mamario Mixto Benigno 2 -

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Reacción IHQ a Citoqueratina en áreas de tejido mesenquimático


Tumor Mamario Mixto Benigno 3 - <div style=fiogf49gjkf0dDetalle celular de la inmunoreacción en áreas mesenquimáticas, lo que indicaría una probable EMT en la zona.">
Tumor Mamario Mixto Benigno 3 -

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Detalle celular de la inmunoreacción en áreas mesenquimáticas, lo que indicaría una probable EMT en la zona.




Discusión    

La expresión IHQ en tumores epiteliales evidencia que el anticuerpo monoclonal (MoAb) CK34βE12 reacciona con la citoqueratina presente en estas células lo que concuerda con lo planteado por Han “et al” (2004) en células humanas al demostrar que este MoAb solo reacciona con filamentos intermedios (FI) de citoqueratina (CK) presente en células epiteliales del tipo escamoso. Los tumores epiteliales positivos a citoqueratina (adenomas papilar y tubular y adenocarcinoma) lo son en zonas ductales escamosas.

La no expresión de citoqueratina en tumores mamarios de perras de tipo mesenquimático concuerda con lo expresado por Bratthauer “et al” (2003), quienes señalan que este anticuerpo no reacciona, entre otras, en células humanas de tipo mesenquimática, nerviosa y glial.

La expresión de citoqueratina en tumores mixtos se explicaría por que estos tumores están compuestos por tejido de ambos orígenes, siendo positivos sólo en áreas epiteliales, no obstante, en algunos tumores mixtos benignos se observó que en zonas mesenquimáticas existió inmunotinción. Esto sería indicador de que en perras se presenta un proceso similar al descrito por Thiery (2003) y Zoltan-Jones “et al” (2003), ellos señalan que en la “transición epitelio-mesenquimática” (EMT) observada en tumores mamarios de mujeres, células epiteliales sufren cambios similares a los descritos en la EMT embrionaria, lo que unido a otros mecanismos induce la aparición de cáncer de mamas.

Por lo tanto, identificar este cambio celular en tumores de perras, también contribuiría a la detección precoz de algunos carcinomas mamarios.

 

Conclusiones    

Ø      Existe expresión de citoqueratina en tumores mamarios de perras (Canis familiaris) benignos y malignos de tipo histológico epitelial y mixto.
 
Ø      Los tumores mamarios de tipo epitelial benigno que expresan citoqueratina lo hacen en zonas de proliferación intraductal escamosa.
 
Ø      Los tumores mamarios de tipo epitelial maligno que expresan citoqueratina lo hacen en zonas lobulares escamosas o con diferenciación escamosa.
 
Ø         Los tumores mamarios de tipo mesenquimático benignos o malignos no expresan citoqueratina.
 
Ø       Algunos tumores mamarios mixtos benignos expresan citoqueratina siguiendo patrón tubular en zonas de tejido epitelial escamoso mientras que otros lo hacen en áreas que estarían desarrollando un proceso de transición epitelio-mesenquimática (EMT), por lo que esta alteración también se describiría en tumores mamarios de hembras caninas.
 
Ø      La alta sensibilidad y especificidad calculadas junto a la muy alta concordancia entre los métodos en estudio permiten señalar que, el anticuerpo monoclonal CK34βE12 en pruebas inmunohistoquímicas tiene utilidad diagnóstica pues, al identificar componentes epiteliales con diferenciación escamosa, permite realizar un diagnóstico diferencial en tumores mamarios de perras.

 

Agradecimientos    

A los doctores González, Ríos y Rojas por su apoyo en el desarrollo de esta investigación.

 

Bibliografía    

  • BRATTHAUER, G.; MIETTINEN, M. and TAVASSOLI, F. 2003. Cytokeratin immunoractivity in lobular intraepithelial neoplasia. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 51(11):1527-1531.
  • MOINFAR, F.; MAN, YG.; LININGER, RA.; BODIAB, C. and TAVASSOLI, FA. 1999. Use of keratin 34betaE12 as an adjunct in the diagnosis of mammary intraepithelial neoplasia-ductal type-benign and malignant intraductal proliferations. The American Journal of Surgical Pathology. 23(9):1048-1058, September.
  • HAN, J.; KIM, M.; NAM, S. and YANG, J. 2004. E-cadherin and cytokeratin subtype profiling in effusion cytology. Journal of Korean Medical Science. 19(6):826-833, July.
  • THIERY, JP. 2003. Epithelial-mesenchymal transitions in development and pathologies. Cell Biology. 15:740-746
  • ZOLTAN-JONES, A; HUANG, L; GHATAK, S. and TOOLE, B. 2003. Elevated hyaluronan production induces mesenchymal and transformed properties in epithelial cells. The Journal of Biological Chemistry. 278(46):45801-45810, November.

 

Comentarios

- Aleida Herrera Batista (10/05/2007 23:39:03)

Dr. Oscar Lopez Sandoval muy interesante su trabajo. Muchas felicidades

- Dania Ledesma (23/05/2007 8:03:09)

Gracias por compartir su trabajo.
Felicitaciones.

- JULIO CESAR LESCANO SORIANO (29/05/2007 22:19:21)

FELICITACIONESPOREL TRABAJO DR. OSCARLOPEZ,HASIDO INTERESANTE LA UTILIZACION DEEL ANTICUERPO MONOCLONAL ,PARALAIDENTIFICACION DE LACITOQUERATINA EN LAS NEOPLASIAS DE LA MAMA DE LAS PERRAS, EL APORTEESQUE HAAYUDADO ASU DIFERENCIACION

- JULIO CESAR LESCANO SORIANO (29/05/2007 22:19:23)

FELICITACIONESPOREL TRABAJO DR. OSCARLOPEZ,HASIDO INTERESANTE LA UTILIZACION DEEL ANTICUERPO MONOCLONAL ,PARALAIDENTIFICACION DE LACITOQUERATINA EN LAS NEOPLASIAS DE LA MAMA DE LAS PERRAS, EL APORTEESQUE HAAYUDADO ASU DIFERENCIACION

- JULIO CESAR LESCANO SORIANO (29/05/2007 22:19:25)

FELICITACIONESPOREL TRABAJO DR. OSCARLOPEZ,HASIDO INTERESANTE LA UTILIZACION DEEL ANTICUERPO MONOCLONAL ,PARALAIDENTIFICACION DE LACITOQUERATINA EN LAS NEOPLASIAS DE LA MAMA DE LAS PERRAS, EL APORTEESQUE HAAYUDADO ASU DIFERENCIACION

- OSCAR LOPEZ SANDOVAL (01/06/2007 0:06:23)

Gracias a todos por los comentarios.


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