Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica

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Unidad de Biologia de Tumores Cerebrales, Universidad de Navarra, Irunlarrea 1, 31008 Pamplona, España, e-mail: jscastresana@unav.es

DETECCIÓN DE HIPERMETILACIÓN DE GENES SUPRESORES TUMORALES EN ASTROCITOMAS

Aiala Lorente*, Paula Lazcoz**, Jose Maria Rivera***, Jesus Garibi***, Javier S. Castresana*
* Universidad de Navarra ESPAÑA
** Universidad Publica de Navarra ESPAÑA
*** Hospital de Cruces ESPAÑA

Resumen

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INTRODUCCIÓN

Los astrocitomas son el tipo de tumor intracraneal más frecuente, característico por invadir las regiones cerebrales próximas. Se clasifican en los siguientes tipos, de acuerdo con la OMS: Grado I, Astrocitoma pilocítico; Grado II, Astrocitoma difuso de bajo grado; Grado III, Astrocitoma anaplásico; Grado IV, Glioblastoma multiforme (GBM), que puede ser primario, formado de novo o secundario formados a partir de tumores de grado II y III por progresión tumoral.

Se han estudiado los siguientes genes supresores tumorales: PTEN (10q23.3);  MGMT (10q26.1); dos efectores de Ras: RASSF1A (3p21.3) y NORE1A (1q32.1); BLU (3p21.3); y CDKN2A (9p21) que codifica dos proteínas alternativas: p14ARF y p16INK4A.  La hipermetilación de las islas CpG de promotores puede silenciar estos genes, de manera que disminuya su expresión, contribuyendo a la génesis de diversos tipos de tumores.

MATERIAL Y MÉTODOS

El trabajo se realizó sobre 53 muestras humanas procedentes del Hospital de Cruces de Barakaldo (España) de astrocitomas de diversos grados y 10 líneas celulares de astrocitoma.
La detección de hipermetilación de promotores: se realizó mediante MSP (PCR específica de metilación) para tumores y líneas.
El estudio de expresión: se realizó por RT-PCR en RNA obtenido de las líneas.

RESULTADOS

Detección de hipermetilación de promotores (porcentaje de muestras hipermetiladas halladas):

Muestras tumorales: RASSF1A: 92% (49 de 53), BLU: 51% (27 de 53), NORE1A: 4% (2 de 52), PTEN: 0% (0 de 51), MGMT: 47% (25 de 53), p14: 0% (0 de 53), p16: 25% (13 de 53).

Líneas celulares: RASSF1A: 100% (10 de 10), BLU: 33% (3 de 9), NORE1A: 40% (4 de 10), PTEN: 20% (2 de 10), MGMT: 80% (8 de 10), p14: 0% (0 de 5), p16: 29% (2 de 7).

CONCLUSIONES

El gen RASSF1A presentó un alto grado de hipermetilación, tanto en los tumores  (92%) como en las líneas (100%), que se correspondió con una expresión baja o nula de dicho gen en la mayoría de las líneas celulares, indicando que podría ser un evento frecuente en la génesis de los astrocitomas.

La hipermetilación de BLU, NORE1A, p16 y MGMT parece contribuir también, aunque en menor medida, mientras que la de p14 y PTEN parece no estar implicada, ya que no se observó en ningún caso.


 

Introduccion    

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Los astrocitomas son el tipo de tumor intracraneal más frecuente, característico por invadir las regiones cerebrales próximas. Se clasifican en los siguientes tipos, de acuerdo con la OMS: Grado I, Astrocitoma pilocítico; Grado II, Astrocitoma difuso de bajo grado; Grado III, Astrocitoma anaplásico; Grado IV, Glioblastoma multiforme (GBM), que puede ser primario, formado de novo o secundario formados a partir de tumores de grado II y III por progresión tumoral.

Se han estudiado los siguientes genes supresores tumorales: PTEN (10q23.3);  MGMT (10q26.1); dos efectores de Ras: RASSF1A (3p21.3) y NORE1A (1q32.1); BLU (3p21.3); y CDKN2A (9p21) que codifica dos proteínas alternativas: p14ARF y p16INK4A.  La hipermetilación de las islas CpG de promotores puede silenciar estos genes, de manera que disminuya su expresión, contribuyendo a la génesis de diversos tipos de tumores.

 

Material y Métodos    

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El trabajo se realizó sobre 53 muestras humanas procedentes del Hospital de Cruces de Barakaldo (España) de astrocitomas de diversos grados y 10 líneas celulares de astrocitoma.
La detección de hipermetilación de promotores: se realizó mediante MSP (PCR específica de metilación) para tumores y líneas.
El estudio de expresión: se realizó por RT-PCR en RNA obtenido de las líneas.

 

Resultados    

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Detección de hipermetilación de promotores (porcentaje de muestras hipermetiladas halladas):

Muestras tumorales: RASSF1A: 92% (49 de 53), BLU: 51% (27 de 53), NORE1A: 4% (2 de 52), PTEN: 0% (0 de 51), MGMT: 47% (25 de 53), p14: 0% (0 de 53), p16: 25% (13 de 53).

Líneas celulares: RASSF1A: 100% (10 de 10), BLU: 33% (3 de 9), NORE1A: 40% (4 de 10), PTEN: 20% (2 de 10), MGMT: 80% (8 de 10), p14: 0% (0 de 5), p16: 29% (2 de 7).

 

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Figura 1 -

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Figura 2 -

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Figura 3 -

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Conclusiones    

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El gen RASSF1A presentó un alto grado de hipermetilación, tanto en los tumores  (92%) como en las líneas (100%), que se correspondió con una expresión baja o nula de dicho gen en la mayoría de las líneas celulares, indicando que podría ser un evento frecuente en la génesis de los astrocitomas.

La hipermetilación de BLU, NORE1A, p16 y MGMT parece contribuir también, aunque en menor medida, mientras que la de p14 y PTEN parece no estar implicada, ya que no se observó en ningún caso.

 

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Comentarios

- Cesáreo Corbacho Cuevas (11/10/2005 20:35:10)

¿Sería interesante plantearse la correlación entre la metilación de los genes estudiados y el grado histológico de los tumores o es un evento tan frecuente que siempre encontraríamos metilación de los mismos, independientemente del grado?

- Javier Saez Castresana (17/10/2005 15:52:24)

En respuesta al comentario de Cesareo Corbacho Cuevas, es cierto que se debería hacer una correlación entre metilación y grado histológico de los tumores. Pero la limitación de número de tumores de que disponemos invalida tal estudio; apenas disponemos de astrocitomas de bajo grado (I y II), y casi la totalidad de los casos estudiados son de alto grado (III y IV). Muchas gracias por el comentario.

- Juan Pablo Garcia de la Torre (02/11/2005 10:19:17)

En referencia a los comentarios previos y a la espera de nuevos estudios, probablemente el incremento de grado en los atrocitomas, asi como en otros tumores, puede estar asociado a un mayor grado de metilación de genes supresores, pero probablemente se asocie a activación de oncogenes y otras alteraciones genéticas que se suman incrementando la agresividad tumoral. Enhorabuena a los autores.

 

 

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