Direccion de contacto
fiogf49gjkf0d Unidad de Biologia de Tumores Cerebrales,
Universidad de Navarra,
Irunlarrea 1,
31008 Pamplona,
España,
e-mail: jscastresana@unav.es
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DETECCIÓN DE HIPERMETILACIÓN DE GENES SUPRESORES TUMORALES EN ASTROCITOMAS
Aiala Lorente*, Paula Lazcoz**, Jose Maria Rivera***, Jesus Garibi***, Javier S. Castresana*
* Universidad de Navarra ESPAÑA ** Universidad Publica de Navarra ESPAÑA *** Hospital de Cruces ESPAÑA
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Resumen
fiogf49gjkf0d INTRODUCCIÓN
Los astrocitomas son el tipo de tumor intracraneal más frecuente,
característico por invadir las regiones cerebrales próximas. Se
clasifican en los siguientes tipos, de acuerdo con la OMS: Grado I,
Astrocitoma pilocítico; Grado II, Astrocitoma difuso de bajo grado;
Grado III, Astrocitoma anaplásico; Grado IV, Glioblastoma multiforme
(GBM), que puede ser primario, formado de novo o secundario formados a
partir de tumores de grado II y III por progresión tumoral.
Se han estudiado los siguientes genes supresores tumorales: PTEN
(10q23.3); MGMT (10q26.1); dos efectores de Ras: RASSF1A (3p21.3)
y NORE1A (1q32.1); BLU (3p21.3); y CDKN2A (9p21) que codifica dos
proteínas alternativas: p14ARF y p16INK4A. La hipermetilación de
las islas CpG de promotores puede silenciar estos genes, de manera que
disminuya su expresión, contribuyendo a la génesis de diversos tipos de
tumores.
MATERIAL Y MÉTODOS
El trabajo se realizó sobre 53 muestras humanas procedentes del
Hospital de Cruces de Barakaldo (España) de astrocitomas de diversos
grados y 10 líneas celulares de astrocitoma.
La detección de hipermetilación de promotores: se realizó mediante MSP (PCR específica de metilación) para tumores y líneas.
El estudio de expresión: se realizó por RT-PCR en RNA obtenido de las líneas.
RESULTADOS
Detección de hipermetilación de promotores (porcentaje de muestras hipermetiladas halladas):
Muestras tumorales: RASSF1A: 92% (49 de 53), BLU: 51% (27 de 53),
NORE1A: 4% (2 de 52), PTEN: 0% (0 de 51), MGMT: 47% (25 de 53), p14: 0%
(0 de 53), p16: 25% (13 de 53).
Líneas celulares: RASSF1A: 100% (10 de 10), BLU: 33% (3 de 9), NORE1A:
40% (4 de 10), PTEN: 20% (2 de 10), MGMT: 80% (8 de 10), p14: 0% (0 de
5), p16: 29% (2 de 7).
CONCLUSIONES
El gen RASSF1A presentó un alto grado de hipermetilación, tanto en los
tumores (92%) como en las líneas (100%), que se correspondió con
una expresión baja o nula de dicho gen en la mayoría de las líneas
celulares, indicando que podría ser un evento frecuente en la génesis
de los astrocitomas.
La hipermetilación de BLU, NORE1A, p16 y MGMT parece contribuir
también, aunque en menor medida, mientras que la de p14 y PTEN parece
no estar implicada, ya que no se observó en ningún caso.
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Introduccion
fiogf49gjkf0d
Los astrocitomas son el tipo de tumor intracraneal más frecuente,
característico por invadir las regiones cerebrales próximas. Se
clasifican en los siguientes tipos, de acuerdo con la OMS: Grado I,
Astrocitoma pilocítico; Grado II, Astrocitoma difuso de bajo grado;
Grado III, Astrocitoma anaplásico; Grado IV, Glioblastoma multiforme
(GBM), que puede ser primario, formado de novo o secundario formados a
partir de tumores de grado II y III por progresión tumoral.
Se han estudiado los siguientes genes supresores tumorales: PTEN
(10q23.3); MGMT (10q26.1); dos efectores de Ras: RASSF1A (3p21.3)
y NORE1A (1q32.1); BLU (3p21.3); y CDKN2A (9p21) que codifica dos
proteínas alternativas: p14ARF y p16INK4A. La hipermetilación de
las islas CpG de promotores puede silenciar estos genes, de manera que
disminuya su expresión, contribuyendo a la génesis de diversos tipos de
tumores.
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Material y Métodos
fiogf49gjkf0d
El trabajo se realizó sobre 53 muestras humanas procedentes del
Hospital de Cruces de Barakaldo (España) de astrocitomas de diversos
grados y 10 líneas celulares de astrocitoma.
La detección de hipermetilación de promotores: se realizó mediante MSP (PCR específica de metilación) para tumores y líneas.
El estudio de expresión: se realizó por RT-PCR en RNA obtenido de las líneas.
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Resultados
fiogf49gjkf0d
Detección de hipermetilación de promotores (porcentaje de muestras hipermetiladas halladas):
Muestras tumorales: RASSF1A: 92% (49 de 53), BLU: 51% (27 de 53),
NORE1A: 4% (2 de 52), PTEN: 0% (0 de 51), MGMT: 47% (25 de 53), p14: 0%
(0 de 53), p16: 25% (13 de 53).
Líneas celulares: RASSF1A: 100% (10 de 10), BLU: 33% (3 de 9), NORE1A:
40% (4 de 10), PTEN: 20% (2 de 10), MGMT: 80% (8 de 10), p14: 0% (0 de
5), p16: 29% (2 de 7).
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Figura 1 - fiogf49gjkf0d
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Figura 2 - fiogf49gjkf0d
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Figura 3 - fiogf49gjkf0d
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Conclusiones
fiogf49gjkf0d
El gen RASSF1A presentó un alto grado de hipermetilación, tanto en los
tumores (92%) como en las líneas (100%), que se correspondió con
una expresión baja o nula de dicho gen en la mayoría de las líneas
celulares, indicando que podría ser un evento frecuente en la génesis
de los astrocitomas.
La hipermetilación de BLU, NORE1A, p16 y MGMT parece contribuir
también, aunque en menor medida, mientras que la de p14 y PTEN parece
no estar implicada, ya que no se observó en ningún caso.
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Comentarios
- Cesáreo Corbacho Cuevas (11/10/2005 20:35:10)
¿Sería interesante plantearse la correlación entre la metilación de los genes estudiados y el grado histológico de los tumores o es un evento tan frecuente que siempre encontraríamos metilación de los mismos, independientemente del grado?
- Javier Saez Castresana (17/10/2005 15:52:24)
En respuesta al comentario de Cesareo Corbacho Cuevas, es cierto que se debería hacer una correlación entre metilación y grado histológico de los tumores. Pero la limitación de número de tumores de que disponemos invalida tal estudio; apenas disponemos de astrocitomas de bajo grado (I y II), y casi la totalidad de los casos estudiados son de alto grado (III y IV). Muchas gracias por el comentario.
- Juan Pablo Garcia de la Torre (02/11/2005 10:19:17)
En referencia a los comentarios previos y a la espera de nuevos estudios, probablemente el incremento de grado en los atrocitomas, asi como en otros tumores, puede estar asociado a un mayor grado de metilación de genes supresores, pero probablemente se asocie a activación de oncogenes y otras alteraciones genéticas que se suman incrementando la agresividad tumoral. Enhorabuena a los autores.
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