Direccion de contacto
fiogf49gjkf0d Unidad de Biología de Tumores Cerebrales,
Universidad de Navarra,
Irunlarrea 1,
31008 Pamplona,
España,
email: jscastresana@unav.es
|
|
ESTUDIO DE LA REGIÓN CROMOSÓMICA 3p21 EN TUMORES NEUROBLÁSTICOS: ANÁLISIS DE PÉRDIDA DE HETEROCIGOSIDAD (LOH) Y/O INESTABILIDAD DE MICROSATÉLITES (MSI)
Paula Lazcoz*, Manuel Nistal**, Ignacio Encio*, Javier S. Castresana***
* Universidad Publica de Navarra ESPAÑA
** Hospital La Paz ESPAÑA
*** Universidad de Navarra ESPAÑA
|
|
|
Resumen
fiogf49gjkf0d
Introducción
Los tumores neuroblásticos son los tumores sólidos extracraneales más
frecuentes durante la infancia. Dentro de estos tumores se distinguen
los ganglioneuromas, ganglioneuroblastomas y neuroblastomas, siendo
estos últimos los más malignos. Las alteraciones genéticas más
frecuentes en estos tumores son la amplificación de MYCN y las
deleciones de 1p, 11q y 14q.
La región cromosómica 3p21 abarca distintos genes entre los que se
encuentran RASSF1A y BLU, dos genes supresores de tumores que aparecen
alterados en diversas neoplasias. La alteración más frecuentemente
observada en estos genes es la hipermetilación de su promotor, la cual
podría estar asociada a la pérdida de heterocigosidad (LOH) y/o la
inestabilidad de microsatélites (MSI). Se ha descrito LOH en esta
región en tumores de pulmón, colon, estómago, nasofaringe y
neuroblastomas, entre otros.
Material y métodos
- Se dispuso de DNA genómico extraído de 21 neuroblastomas así como de
sangre periférica de cada paciente (control negativo de lesión genética)
- Se realizó la técnica de PCR sobre DNA tumoral y DNA proveniente de
sangre periférica de cada paciente para determinar la frecuencia de LOH
y/o MSI en 3p21 mediante la amplificación de los siguientes
microsatélites: D3S3507, D3S3522, D3S3615 y D3S3624.
Resultados
Aunque se partió de un total de 21 pares sangre/tumor tan sólo fueron
analizables de 13 a 16 dependiendo del microsatélite estudiado. Los
resultados obtenidos se resumen en la siguiente tabla.
Alteracion
| D3S3507
| D3S3522 | D3S3615
| D3S3624 | LOH
| 1/16
(6%) | 0/13 | 2/14
(14%) | 0/14 | MSI
| 1/16
(6%) | 2/13 (15%) | 2/14
(14%) | 3/14 (21%) | |
LOH+MSI | 2/16 (12%) | 2/13 (15%) | 4/14 (28%) | 3/14 (21%)
|
Conclusiones
La LOH y/o la MSI en la región cromosómica 3p21 parecen ser un tipo de
alteración poco frecuente en los tumores neuroblásticos aunque podrían
estar implicadas en la génesis de un pequeño porcentaje de los mismos.
|
|
|
Introduccion
fiogf49gjkf0d Los tumores neuroblásticos son los tumores sólidos extracraneales más
frecuentes durante la infancia. Dentro de estos tumores se distinguen
los ganglioneuromas, ganglioneuroblastomas y neuroblastomas, siendo
estos últimos los más malignos. Las alteraciones genéticas más
frecuentes en estos tumores son la amplificación de MYCN y las
deleciones de 1p, 11q y 14q, algunas de las cuales, como la
amplificación de MYCN, son factores de mal pronóstico (1-7).
La región cromosómica 3p21 abarca distintos genes entre los que se
encuentran RASSF1A y BLU, dos genes supresores de tumores que aparecen
alterados en diversas neoplasias. La alteración más frecuentemente
observada en estos genes es la hipermetilación de su promotor, la cual
podría estar asociada a la pérdida de heterocigosidad (LOH) y/o la
inestabilidad de microsatélites (MSI). Se ha descrito LOH en esta
región en tumores de pulmón, colon, estómago, nasofaringe y
neuroblastomas, entre otros (8-13).
|
|
|
Material y Métodos
fiogf49gjkf0d - Se dispuso de DNA genómico extraído de 21 neuroblastomas así como de
sangre periférica de cada paciente (control negativo de lesión genética)
- Se realizó la técnica de PCR sobre DNA tumoral y DNA proveniente de
sangre periférica de cada paciente para determinar la frecuencia de LOH
y/o MSI en 3p21 mediante la amplificación de los siguientes
microsatélites: D3S3507, D3S3522, D3S3615 y D3S3624.
|
|
|
Resultados
fiogf49gjkf0d
Aunque se partió de un total de 21 pares sangre/tumor tan sólo fueron
analizables de 13 a 16 dependiendo del microsatélite estudiado. Los
resultados obtenidos se resumen en la siguiente tabla.
Alteracion
| D3S3507
| D3S3522 | D3S3615
| D3S3624 | LOH
| 1/16
(6%) | 0/13 | 2/14
(14%) | 0/14 | MSI
| 1/16
(6%) | 2/13 (15%) | 2/14
(14%) | 3/14 (21%) | |
LOH+MSI | 2/16 (12%) | 2/13 (15%) | 4/14 (28%) | 3/14 (21%) |
.JPG) fiogf49gjkf0dFigura 1. Pérdida de heterocigosidad e inestabilidad de microsatélites a nivel del microsatélite D3S3522 en tumores neuroblásticos.
Gel de acrilamida (19:1) al 15% teñido con bromuro de etidio (0,5 μg/ml). La muestra número 64 mostró inestabilidad de microsatélites, mientras que la número 77 presentaba pérdida de heterocigosidad. Se utilizaron dos marcadores de peso molecular: M1 (10bp DNA Ladder, Invitrogen) y M2 (1Kb Plus DNA Ladder, Invitrogen) para determinar el tamaño de las bandas.
">
Figura 1 - fiogf49gjkf0d Figura 1. Pérdida de heterocigosidad e inestabilidad de microsatélites a nivel del microsatélite D3S3522 en tumores neuroblásticos.
Gel de acrilamida (19:1) al 15% teñido con bromuro de etidio (0,5 μg/ml). La muestra número 64 mostró inestabilidad de microsatélites, mientras que la número 77 presentaba pérdida de heterocigosidad. Se utilizaron dos marcadores de peso molecular: M1 (10bp DNA Ladder, Invitrogen) y M2 (1Kb Plus DNA Ladder, Invitrogen) para determinar el tamaño de las bandas.
|
|
|
Conclusiones
fiogf49gjkf0d La LOH y/o la MSI en la región cromosómica 3p21 parecen ser un tipo de
alteración poco frecuente en los tumores neuroblásticos aunque podrían
estar implicadas en la génesis de un pequeño porcentaje de los mismos.
|
|
|
Bibliografía
1. Jaime Mora, William L. Gerald, Jing Qin and Nai-Kong V. Cheung.
“Molecular Genetics of Neuroblastoma and the Implications for Clinical
Management: A Review of the MSKCC Experience”. The Oncologist 6:
263-268, 2001.
2. Shimada H, Ambros IM, Dehner LP, Hata J, Joshi VV and Roald B.
“Terminology and morphologic criteria of neuroblastic tumors:
recommendations by the Internacional Neuroblastoma Pathology
Committee”. Cancer 86(2): 349-363, 1999.
3. Francisco López-Lara Martín, Carmen González San Segundo, Juan
Antonio Santos Miranda y Álvaro Sanz Rubiales. “Manual de Oncología
Clínica”, 1999.
4. Jay L. Grosfeld. “Risk-based Management of Solid Tumors in Children”. The American Journal of Surgery 180: 322-327, 2000.
5. Frank Westermann and Manfred Schwab. “Genetic parameters of neuroblastomas”. Cancer Letters 184: 127-147, 2002.
6. N Bown. “Neuroblastoma tumour genetics: clinical and biological aspects”. Journal of Clinical Pathology 54: 897-910, 2001.
7. Thorner PS and Squire JA. “Molecular genetics in the diagnosis and
prognosis of solid pediatric tumors”. Pediatr Dev Pathol 1: 337-365,
1998.
8. Marsit CJ, Hasegawa M, Hirao T, et al. Loss of heterozygosity of
chromosome 3p21 is associated with mutant TP53 and better patient
survival in non-small-cell lung cancer. Cancer Res 2004; 64:8702-7.
9. Sakamoto N, Terai T, Ajioka Y, et al. Frequent hypermethylation of
RASSF1A in early flat-type colorectal tumors. Oncogene 2004; 23:8900-7.
10. Pizzi S, Azzoni C, Bassi D, Bottarelli L, Milione M, Bordi C.
Genetic alterations in poorly differentiated endocrine carcinomas of
the gastrointestinal tract. Cancer 2003; 98:1273-82.
11. Xiong W, Zeng ZY, Xia JH, et al. A susceptibility locus at
chromosome 3p21 linked to familial nasopharyngeal carcinoma. Cancer Res
2004; 64:1972-4.
12. Chen QR, Bilke S, Wei JS, et al. cDNA array-CGH profiling
identifies genomic alterations specific to stage and MYCN-amplification
in neuroblastoma. BMC Genomics 2004; 5:70.
13. Tonini GP, Romani M. Genetic and epigenetic alterations in neuroblastoma. Cancer Lett 2003;
197:69-73.
|
|
|
Comentarios
|
|
|
|
|
Comunciación libre
PDF