RESUMEN
El objetivo del presente estudio es determinar la utilidad de la morfometría nuclear en el diagnóstico diferencial entre la hiperplasia ductal sin y con atipias y el carcinoma intraductal.
Utilizamos para ello un total de 46 muestras de parénquima mamario que fueron clasificadas como mama normal (n=9), hiperplasia ductal sin atipias (n=22), hiperplasia ductal atípica (n=5), carcinoma intraductal (n=13) y carcinoma ductal infiltrante bien diferenciado. Sobre las preparaciones correspondientes se realizaron mediciones de parámetros morfométricos de tamaño y forma nuclear usando un sistema de análisis de imagen no comercial y el software Imago de la Universidad de Córdoba.
Se observó un aumento progresivo en el tamaño nuclear desde la mama normal (área media: 34.45 m m2) al carcinoma ductal infiltrante (área media: 37.94 m m2). Así mismo se observó un aumento progresivo desde la hiperplasia epitelial sin atipias (área media: 29.43 m m2 a la atípica (área media: 45.32 m m2 y el carcinoma intraductal (área media: 51.81 m m2), con diferencias significativas entre la hiperplasia epitelial sin atipia y las otras dos (o<0.05 y p<0.01 respectivamente).
Consideramos que los resultados obtenidos apoyan el uso de la morfometría nuclear para la discriminación entre los procesos estudiados, permitiendo una mayor seguridad en la indicación del enfoque terapéutico adecuado cuando la muestra a evaluar es escasa.
PALABRAS CLAVE: Morfometría, lesiones proliferativas de la mama, hiperplasia ductal, carcinoma ductal de mama.
INTRODUCCION
En el proceso de carcinogénesis en la mama se reconoce una secuencia de eventos que pasan por una proliferación de las células ductales (hiperplasia ductal sin atipias), que posteriormente sufre cambios displásicos (hiperplasia ductal atípica) para llegar a constituir el carcinoma ductal ("in situ" y posteriormente infiltrante) (1,2). Esta secuencia viene apoyada por el reconocimiento de cambios moleculares en los distintos estadios de progresión (3,4), si bien también se invocan otras vías en la generación del carcinoma ductal (5)
Por otro lado, aunque existen criterios histopatológicos establecidos para la discriminación entre estas entidades, la distinción entre hiperplasia ductal sin y con atipias y con el carcinoma in situ puede llegar a ser difícil y poco reproducible, como han mostrado diversos estudios a lo largo del tiempo (1,6).
En este contexto la morfometría puede llegar a ser útil, ya que ha demostrado su eficiencia y reproducibilidad en la discriminación entre lesiones preneoplásicas y neoplásicas, así como en la gradación de lesiones preneoplásicas, en diversos órganos, como cérvix (7), endometrio (8), etc. y en el campo de la patología mamaria ha sido aplicada a la obtención del grado nuclear de tumores infiltrantes (9).
Estudiamos en este contexto las características morfométricas nucleares de las lesiones proliferativas y neoplásicas de la mama mediante un sistema de análisis de imagen para determinar los parámetros que permitan discriminar entre las mismas.
MATERIAL Y METODOS
Se recolectaron 46 casos de patología mamaria del archivo del Hospital Universitario Reina Sofía de Córdoba, que tras su revisión por dos patólogos fueron clasificados en las cinco categorías diagnósticas utilizadas en este trabajo (figura 1):
De los bloques de parafina correspondientes a las áreas de interés se realizaron secciones de 6 m m que fueron teñidas con hematoxilina-eosina y sobre la que se realizó la cuantificación de los parámetros morfométricos nucleares.
El sistema de análisis de imagen, previamente utilizado por nuestro grupo (10) consiste en un microscopio Olympus BH-2 modificado por Bico A/S (Glostrup, Dinamarca) para métodos estereológicos, equipado con un sistema de motores que permite un movimiento automatizado del portaobjetos en los ejes ‘x’ e ‘y’ y con ello una selección sistemática de los campos de visión. La fuente de luz es una lámpara halógena de 10oW cuya potencia es modificable por el observador. El microscopio está conectado a una cámara Hitachi VK-C150ED que envía las imágenes observadas al sistema computerizado.
Dicho sistema consiste en un computador Ambra, PC-compatible conectado a un monitor estándar para el manejo de programas y a un monitor de alta resolución para la observación de las imágenes adquiridas. El computador se encuentra equipado con una tarjeta digitalizadora Data Translation DT2851 y con el software Imago3, procesador de imágenes creado por el Servicio de Inteligencia Artificial de la Universidad de Córdoba para la estimación de parámetros morfométricos sobre imágenes biológicas previamente digitalizadas.
Con este sistema se obtuvieron los siguientes parámetros morfométricos:
-Perímetro.
-Área.
-Radios máximo, mínimo y medio.
-Diámetro equivalente al círculo.
-Factor forma circular.
Los datos generados por el programa fueron tabulados y analizados estadísticamente usando el paquete estadístico SPSS/PC+, mediante el cual se obtuvo la estadística descriptiva y se realizó la comparación de medias mediante análisis de la varianza. Las comparaciones de pares de medias se realizaron con los tests de Scheffe y L.S.D.
RESULTADOS
Los resultados de la estadística básica se muestran en la tabla 1 y la gráfica 1 muestra los diagramas de caja para cada variable morfométrica en estudio.
El análisis de la varianza mostró diferencias estadísticamente significativas entre los distintos grupos. En concreto, la hiperplasia ductal sin atipias y atípica mostraban diferencias respecto al área, radios nucleares y diámetro equivalente al círculo (p<0.05). Por otro lado, también se observaron diferencias entre la hiperplasia ductal sin atipias y el carcinoma intraductal en el caso del área, perímetro, radios nucleares y diámetro equivalente al círculo (p<0.01) y el carcinoma intraductal y ductal infiltrante mostraron diferencias respecto al área (p<0.05), perímetro, radio medio y mínimo, diámetro equivalente al círculo y factor forma (p<0.01).
DISCUSION
A pesar de que diversos autores reconozcan otras posibles vías en el origen del carcinoma ductal de mama (5), la secuencia hiperplasia ductal - hiperplasia ductal atípica – carcinoma intraductal ha sido reconocida en diversos estudios (1-3), y en el reconocimiento de las entidades integradas en esta secuencia se basa la actitud terapéutica a realizar en pacientes con nódulos mamarios.
Por otro lado, la discriminación entre ambos tipos de hiperplasia, así como entre hiperplasia atípica y carcinoma intraductal requiere la aplicación estricta de una serie de criterios histopatológicos con resultados que en muchas ocasiones no son reproducibles (1,6).
Es por esta razón por la que se han ensayado diversos métodos complementarios para ayudar en esta discriminación (11). Entre este tipo de técnicas se encuentra la morfometría nuclear, que ya ha mostrado su utilidad y reproducibilidad en el carcinoma de mama invasivo (9,12).
Nuestros resultados muestran un incremento progresivo en el valor de todos los parámetros morfométricos estudiados desde la mama normal al carcinoma intraductal, lo que concuerda con la secuencia de eventos que lleva a la generación del carcinoma ductal de mama.
Por otro lado, la existencia de diferencias significativas entre hiperplasia ductal sin atipias, hiperplasia ductal atípica y carcinoma intraductal permite considerar la morfometría como una herramienta útil para la discriminación entre estas lesiones, como también apuntan otros trabajos (13,14), posiblemente en combinación con otras características nucleares como la ploidía de ADN (14), la textura nuclear (15) o las determinaciones estereológicas de volumen nuclear (16,17).
En conclusión, nuestros resultados aportan una evidencia más de la utilidad de la morfometría nuclear en la discriminación entre lesiones premalignas y malignas, en esta ocasión en la mama, si bien pensamos que la aplicación de otras técnicas y su integración dentro de un modelo de análisis discriminante sería de mayor utilidad, con el fin de poder aumentar la eficiencia y reproducibilidad de los diagnósticos patológicos en este campo.
REFERENCIAS
FIGURA
Figura 1: Características nucleares de las entidades sujeto de estudio: A) Hiperplasia ductal sin atipias: los núcleos son ovales, sin pleomorfismo ni irregularidades del patrón cromatínico. B) Hiperplasia ductal atípica: mayor variación del tamaño nuclear e irregularidad. Presencia de ocasionales nucleolos. C) Carcinoma intraductal: Núcleos irregulares, de mayor tamaño con prominente nucleolo. D) Carcinoma ductal infiltrante: máximo tamaño y pleomorfismo nuclear. (todas las figuras, HE, izquierda 10x; derecha 40x). |
TABLA 1: Resultados de la estadística univariante para los parámetros morfométricos obtenidos. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Area
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Perímetro
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Radio medio
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Radio máximo
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Radio mínimo
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Diámetro equivalente al círculo
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Factor forma circular
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Abreviaturas
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