Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica
ISBN: 978-84-692-76778

COMUNICACIONES

Nº 1992.

Utilidad de la hematoxilina fosfotúngstica ácida para la demostración de fibras elásticas comparada con la técnica de Verhoeff

Neil Paton[1], Novuyo Nomaqhiza[2], Jeevamoney Govender[3], Mirta García Jardón[1]
(1) Departamento de Anatomía Patológica, Universidad Walter Sisulu. REPUBLICA SUDAFRICANA
(2) Technologist Manager Department of Anatomical Pathology. NHLS, Mthatha Branch REPUBLICA SUDAFRICANA
(3) Departamento Anatomia Patologica, Universidad Walter Sisulu REPUBLICA SUDAFRICANA

Resumen

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Se presentan los resultados comparativos mediante el uso de ambas técnicas, en una biopsia de piel con elastosis y degeneración de fibras elásticas. Las imágenes muestran como la técnica de Verhoeff es mucho menos selectiva/específica cuando se la compara con la hematoxilina ácida fosfotúngstica. La primera tiñe todas las fibras elástica (normales y anormales) mientras que la segunda solamente muestra las normales, y la ausencia de fibras elásticas se hace más evidente.
Se presenta una comunicación corta, comparando la utilidad de ambas e ilustrándola com imágenes del mismo caso.

 

Introducción    

Las alteraciones de las fibras elásticas y colágenas en la piel son comunes a muchos trastornos. A veces se necesita hacer un diagnostico diferencial entre ambas, o en lesiones donde alguna de ellas puede estar afectada, y no siempre se consigue.
Esta comunicación muestra brevemente como la técnica usada influencia y a veces puede afectar la interpretación de sus resultados.

 

Material y Métodos    

Diseño del estudio:
Se selecciono una lesión de piel de un paciente con queratosis solar (actínica) coloreada con hematoxilina y eosina (figura 1 y 2). Se realizaron secciones adicionales y se colorearon con la técnica de Verhoeff, según su método descrito en 1908:
 
Técnica de Verhoeff
Preparación de la coloración:
a) Hematoxilina 5g
    Alcohol absoluto 100 ml
 
b) Cloruro ferrico    10 g
    Agua destilada 100 ml
 
c) Solución de Yodo de Lugol
    Yodo                     1 g
    Yoduro de potasio    2 g
    Agua destilada      100 ml
 
d) Solución de trabajo:
Solución (a)              20 ml
Solución (b)                8 ml
Solución (c)                8 ml
 
Agregadas en ese mismo orden y mezclándolas entre una y otra.
 
Método:
  1. Desparafinar las secciones y colocarlas húmedas.
  2. Cubrirlas con la solución de trabajo de 15 a 30 min.
  3. Lavarlas en agua
  4. Diferenciar en 2% de cloruro ferrico acuoso hasta que la fibra elastica aparezca negra o el fondo se torne gris.
  5. Lávese con agua.
  6. Lávese en alcohol al 95% para remover los residuos de yodo.
  7. Contrastese al gusto.
  8. Enjuague para remover el exceso de colorant
  9. Dehidrate en alcohol rapidamente
  10. Aclare en xilol y monte  el cubreobjetos. 
Hematoxilina acida fosfotungstica (HAF)
 
Solución preparada utilizando hemateina.
 
Hemateina                  0.5   g
Acido fosfotungstico     5     g
Agua destilada             500 ml
La hemateina se disuelve en 100 ml de agua destilada, y el acido fosfotungstico en los restantes 400 ml. Las dos soluciones de mezclan y se colocan en un pomo sellado. Se deja reposar y esta lista para usarse 24 h después.
 
La HAF se oxida químicamente con el permanganato de potasio.
Hematoxilina                                                  0.5  g
Acido fosfotungstico                                      10    g
Agua destilada                                              500  ml
Permanganato de potasio acuoso al 0.25 %         25  ml
 
La hematoxilina se disuelve en 100 ml de agua destilada y el acido fosfotungstico en los 400 ml restantes. Se mezclan las dos soluciones y se agrega la solución de permanganato de potasio. La coloración puede usarse al día siguiente pero la actividad “pico” no se alcanza hasta 7 días después. La oxidación continua de la hematoxilina indica una relativamente corta duración de la solución.
 
Solución de HAF oxidada naturalmente
Hematoxilina              0.5 g
Acido fosfotungstico   5    g
Agua destilada        500   ml
 
Los sólidos se disuelven en porciones separadas de agua destilada y después se mezclan en las proporciones indicadas mas arriba. Se deja madurar la solución naturalmente en un pomo tapado (no sellado) en un lugar iluminado y tibio por varios meses.
 
Método:
  1. Desparafinar en xilol y rehidratar en alcoholes diluidos hasta llevarla al agua.
  2. Colocar la sección en una solución de dicromato acido por 30 min.
  3. Lavar en agua corriente
  4. Tratar con la solución de permanganato acido por 1 minuto
  5. Lavar en agua corriente.
  6. Blanquear en acido oxálico al 1%
  7. Lavar en agua corriente.
  8. Colorear en solución de HAF de Mallory toda la noche.
Deshidratar rápido en alcohol, aclarar en xilol y montar

 

  Figura 1 - Keratosis solar. HE 10X
Figura 1 - Keratosis solar. HE 10X

  Figura 2 - Similar a la anterior HE 40X
Figura 2 - Similar a la anterior HE 40X

Resultados    

 
Fibras elásticas negras (Figura 3 y 4)
 
Contraste: varía según la sustancia usada.
 
Esta técnica no es selectiva, y tiñe todo tipo de fibra elástica, tanto las normales, como las dañadas o destruidas. La siguiente técnica (Hematoxilina acida fosfotungstica) demuestra lo anterior)
 
Estrías musculares, fibras neurogliales, fibrina y amebas en azul oscuro.
Núcleos, cilios y eritrocitos en azul
Mielina en azul claro
Citoplasma rosa carmelita pálido.
 
Las imágenes en hematoxilina y eosina muestran una zona pálida en el dermis superior (figura 1 y 2). Las coloreadas por el método de Verhoeff (Figura 3 y 4) tiñen todas las fibras del dermis,
La misma lesión coloreada con la HAF de Mallory evidencia solamente las fibras elásticas preservadas, mientras que las lesionadas o destruidas parcialmente quedan sin colorear(Figuras 5) y (6) .
 

 

  Figura 3 - Verhoeff, 10X
Figura 3 - Verhoeff, 10X

  Figura 4 - Verhoeff, 40X
Figura 4 - Verhoeff, 40X

  Figura 5 Si se compara con el Verhoeff, se hace evidente la falta de fibras elasticas. HAF 10X
Figura 5 Si se compara con el Verhoeff, se hace evidente la falta de fibras elasticas. HAF 10X

  Figura 6 - HAF, 10X Fibras elasticas normales en color intenso, en un fondo claro donde dejan de colorearse las anormales.
Figura 6 - HAF, 10X Fibras elasticas normales en color intenso, en un fondo claro donde dejan de colorearse las anormales.

Conclusiones    

La hematoxilina acida fosfotúngstica, usada tradicionalmente para demostrar las estriaciones del músculo esquelético, es de utilidad en el diagnostico de lesión y ausencia de fibras elásticas en el dermis.

 

Bibliografía    

1.- Fitzpatrick`s Dermatology in General Medicine, 7e [[Part 2. Disorders Presenting in Skin and Mucous Membranes > Section 9. Disorders of the Dermal Connective Tissue]].
 
2.-  Bórquez, PM;  Garrido, OL; Manterola, CD; Peña, PS; Schlageter, CT y cols:           
 Estudio de fibras colágenas y elásticas del tejido conjuntivo de pacientes con y sin hernia inguinal primaria. Rev Méd Chile 2003; 131: 1273-1279
 
3- Urba´n, Z. and Boyd, CD: Elastic-Fiber Pathologies: Primary Defects in Assembly—and Secondary Disorders in Transport and Delivery. Am. J. Hum. Genet. (2000) 67:4–7,

 

 

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