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Discusión
La citología recogida en medio líqudio ha aportado la posibilidad de añadir más de una técnica complementaria al diagnostico citológico. Si disponemos solamente de extensiones, podemos aplicar en ellas un número más limitado de técnicas especiales, que si disponemos de material conservado en medio liquido.
Además, frente a la citología convencional en el ámbito ginecológico, y en base a los protocolos existentes, por lo que respecta a la detección de VPH, se ahorra una visita a la paciente, con el consiguiente ahorro de coste psicológico para la paciente y la ayuda a la disminución de la presión asistencial en consulta externa.
La citología en medio líquido ginecológica permite trabajar con el material conservado en medio líquido, en el sentido de obtener más cantidad de laminillas sobre los que se pueden aplicar tinciones especiales y otras pruebas. En nuestras manos, se pueden obtener una media de 7 laminillas incluyendo la diagnostica.
Permite además proceder a la congelación del material restante una vez que se han realizado las pruebas que se desee y proceder a su descongelación en cualquier momento. Las células muestran buena preservación tanto desde el punto de vista morfológico como desde el punto de vista molecular, pudiendose aplicar sobre ellas técnicas de detección de ácidos nucleicos, tanto AN como ARN. Para congelar el material restante se centrifugan las muestras a 2800 RPM durante 10 min; el pellet obtenido se coloca en ependorf y se congela a menos 75ºC. Para recuperar el material, se saca del congelador y se deja a temperatura ambiente durante 1-2 horas, redisolviéndose en 30 cc de preserv-cyt. A partir de ahí se pueden obtener las laminillas y proceder a aplicar las técnicas que se desee sobre ellas, o bien proceder al estudio de ácidos nucleicos.
Asimismo, permite la lectura automatizada de las citologías, como screening previo al repaso de cada una de ellas por los citotécnicos. Nosotros tenemos experiencia en Imager (Hologic, Boxbourg, Masachussetts). Este método incrementa la sensibilidad para la detección ASCUS y de lesiones de bajo grado y la especificidad para lesiones de alto grado de modo que su aplicación mejora notablemente el screening. En realidad se automatiza la lectura de las citologías, lo que permite al citotécnico focalizar en los campos que ha marcado el sistema, cosa que redunda en la disminución del cansancio por parte del citotécnico y en el incremento de la capacidad diagnostica del mismo. El sistema NO DIAGNOSTICA, quien diagnostica es el citotécnico y el patólogo. Es un método aprobado por la FDA, que además de mejorar el screening, mejora también el rendimiento de los laboratorios de citología, la eficiencia de los citotécnicos y de los citopatólogos.
Por el momento, en nuestro Laboratorio hemos aplicado, sobre la citologis liquida, las siguientes técnicas:
- determinacion de HPV, por captura de híbridos, de segunda generación permitiendo estudios acerca del valor de la carga viral y por PCR, permitiendo la genotipación.
- Determinación de M-.RNA de oncoproteinas, en material congelado y descongelado
- Estudios de hibridacion in situ fluorescente para estudiar pérdidas, ganancias y amplificaciones de diversos cromosomas en lesiones displásicas.
- Inmunohistoquimica para p16
- Estudios de integación, utilizando PCR en tiempo real para E2 y E6.
Si se utiliza material fijado en preserv-cyt, los resultados son mejores que si utilizamos material congelado y descongelado, pero si utilizamos este ultimo material, los resultados no son despreciables.
Otro de los detalles a tener en cuenta, es que para ralizar estudios tanto a nivel clinico como a nivel de investigación, es importante decidir previamente la estrategia para llevar a cabo el estudio y la secuencia de pruebas en especial si se quiere utilizar la captura de híbridos. Este es un método de detección de VPH cuyo resultado depende de la cantidad de material presente en la muestra de modo que para obtener un resultado optimo se gasta una cantidad de material considerable limitando la aplicación de otras pruebas a posterori.Por tanto debe cuestionarse la aplicación de este método si lo que se pretende es aplicar otras tecnicas, i aplicar PCR para detección de HPV en vez de captura de híbridos.
Este mismo concepto debe tenerse en cuenta si estudiamos muestras provenientes de otras localizaciones anatomicas como son orina, uretra o ano. En estas loicalizaciones, se obtiene mucho menos material de modo que la técnica de captura de híbridos puede resultar ineficaz para detectar HPV, debiendo aplicar técnicas de PCR.
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PONENCIAS