Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica
ISBN: 978-84-692-76778

COMUNICACIONES

Nº 1632.

Procedimientos técnicos en la utilización de macrobloques

BLANCA PALOMEQUE CASTRO[1], NURIA NOGALES GONZALEZ[1], Mª JESÚS LAGO PÉREZ[1], MONTSERRAT SANZ ROMERA[1]
(1) HOSPITAL DEL HENARES Coslada.Madrid. ESPAÑA

Resumen

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-Los  macrobloques suelen estar limitados  a su utilización en prostatectomías radicales, pero también son una buena opción para aquellos casos en que se desea , ó bien mantener las relaciones anatómicas de los órganos, como es el caso de los fetos, ó realizar estudios microscópicos de secciones de tejido mayores de lo habitual de forma continua.
 
-El procesamiento de macrobloques no altera la rutina habitual del laboratorio, pues pueden incluirse con el resto de las biopsias en el procesador automático y para su corte sólo es necesario cambiar la pinza portabloques de un microtomo tipo Minot , que se realiza de forma muy sencilla.
No obstante , el manejo de este tipo de bloques tiene algunas peculiaridades que se deben tener en cuenta para sacar el mayor partido de los mismos, y obtener un corte final de calidad.
 
 
Describimos la mecánica de todo el proceso según nuestra experiencia: tipos de piezas , fijación de las mismas (con formol puro en el caso de piezas cerradas) , tallado , procesamiento, inclusión en parafina y realización de los macrobloques , corte en microtomo , tinción y archivo.

 

Fijación y tallado    

Cuando se desea realizar la fijación de piezas sin abrir (próstatas,  fetos de hasta 9-10 semanas , recto, etc )… la inclusión en formol puro  permite que esta fijación se realice de forma rápida , homogénea y eficaz.
 
Fetos: si su tamaño permite su estudio íntegro en macrobloque ,  se fijarán sin abrir en formol puro durante 24-48 horas, posteriormente se secciona longitudinalmente y se incluyen en dos macrocasetes (Fig. 1), procesándose de forma habitual en procesador automático.
 
Próstatas: se marca con tinta histológica, fijándose sin abrir en formol puro durante 24-48 horas. Tras la fijación, se seccionan perpendicularmente a la superficie posterior (rectal) de la próstata , tantas secciones como se consideren necesarias hasta incluir la próstata completa. El ápex y la base se tallan perpendicularmente a los anteriores utilizando los casetes habituales.
 
Intestino grueso y Recto: para incluir algún corte íntegro  de toda la circunferencia del mismo  podemos fijar la pieza  en formol puro : se abren los extremos , introduciendo  papel absorbente ó una gasa a través de toda la luz. Se deposita la pieza en una bandeja alargada cubriéndola de formol puro (Fig. 2), tras 24-48 horas se talla, incluyendo tantos cortes en macrobloques como se considere necesario.(Fig. 3)
 
En el caso del recto puede ser útil en piezas quirúrgicas tumorales de pacientes a los que se les ha sometido a radioterapia previa, para estudiar afectación residual de bordes.
 
Otros: Pueden incluirse en macrobloques cualquier tipo de piezas (Figs. 4,5,6) aunque debe tenerse en cuenta que en  aquellas de consistencia muy blanda ó con gran componente graso, será más difícil mantener su integridad al  realizar el corte.(Fig. 7)
 
En cualquier caso, cuando no sea posible realizar cortes de calidad de un macrobloque determinado,  se puede deshacer el mismo y seccionarlo en cuatro para incluirlo en bloques convencionales y por tanto no se perdería material.
 
El  grosor de las secciones completas debe ser como mínimo de 5-6 mm, para evitar  que se ondulen durante el procesamiento y se pierdan bordes en el proceso de desbastado y corte de los bloques. Un grosor mayor  impediría un buen procesado .
 
No deben realizarse los cortes con las hojas de bisturí habituales, sino con cuchillas de al menos 10 cm., para conseguir una superficie de corte uniforme. Las cuchillas desechables de microtomo recuperadas son una buen buena opción.(Fig. 8)

 

  Figura 1. Feto de 10 semanas seccionado por la mitad para realizar macrobloques
Figura 1. Feto de 10 semanas seccionado por la mitad para realizar macrobloques

  Figura 2. Segmento de intestino grueso con papel de filtro recorriendo la luz para fijación con formol puro
Figura 2. Segmento de intestino grueso con papel de filtro recorriendo la luz para fijación con formol puro

  Figura 3. Serie de macrobloques de recto seccionados perpendicularmente a la luz
Figura 3. Serie de macrobloques de recto seccionados perpendicularmente a la luz

  Figura 4. Macrobloque de sección renal
Figura 4. Macrobloque de sección renal

  Figura 5. Fragmento cerebral de feto con 23 semanas de gestación
Figura 5. Fragmento cerebral de feto con 23 semanas de gestación

  Figura 6. Serie correspondiente a pancreas procedente de duodenopancreatectomía extraido mediante técnica de Whipple
Figura 6. Serie correspondiente a pancreas procedente de duodenopancreatectomía extraido mediante técnica de Whipple

  Figura 7. Fragmento de intestino grueso, con gran cantidad de grasa periférica que puede impedir realizar un buen corte
Figura 7. Fragmento de intestino grueso, con gran cantidad de grasa periférica que puede impedir realizar un buen corte

  Figura 8. Mango de tallar con cuchillas de microtomo recicladas
Figura 8. Mango de tallar con cuchillas de microtomo recicladas

Procesamiento    

Los tejidos en macrocasetes pueden procesarse en procesador automático incorporándolos a la rutina del laboratorio, pero , debido a su tamaño, mejora la calidad si el procesador tiene activado el sistema de agitación.
Por el mismo motivo, no deben colocarse en el procesador directamente unos encima de otros, sino introducir algún casete vacío entre ellos para permitir una buena circulación de los líquidos .
Un mal procesamiento de estos tejidos, hará que haya áreas insuficientemente impregnadas ( Fig. 9) y por tanto puede hacer imposible obtener un buen corte.

 

  Figura 9. Imagen macroscópica de tejido con procesamiento deficiente
Figura 9. Imagen macroscópica de tejido con procesamiento deficiente

Inclusión en parafina y realización de los macrobloques    

Se pueden utilizar tanto moldes de plástico desechables como metálicos (Fig.  10), en el primer caso debe evitarse reutilizarlos, pues el calor de la placa hará que el fondo de plástico pueda combarse en sucesivas utilizaciones  y no obtendremos una superficie del bloque totalmente plana.
Es muy útil la utilización de algún instrumento para presionar el corte de tejido hacia el fondo del molde, con lo que tanto bordes como el resto del tejido estarán alineados. (Fig. 11)
 
Dependiendo de si el molde es metálico ó de plástico desechable (el primero es algo menor que el segundo) , del tipo de macrocasete utilizado y del tipo de pinza portabloques , la colocación del tejido en el molde varía:
En el caso de la pinza para microtomo Leica, el tejido debe colocarse centrado en el molde, dejando un pequeño margen de parafina en las zonas superior e inferior, pues , como veremos posteriormente, se eliminarán parte de esos márgenes.
Para la pinza del microtomo Microm, el tejido debe situarse dejando el margen sólo en la parte superior.
 
 Esto es debido a que el tamaño del macrobloque suele ser algo mayor que el recorrido del portabloques sobre la cuchilla , por tanto es conveniente realizar una prueba inicial con el material  de nuestro laboratorio para evaluar los márgenes óptimos.
 
Para evitar que el macrobloque se fracture durante el corte,  cuando se está realizando hay que rellenar el molde con la  parafina caliente superando el margen donde se apoya el casete  antes de colocar éste ,de esta forma la parafina solidificará de forma homogénea (Fig.12) 
 
Si el tejido tiene componente graso, la calidad del posterior corte mejora si se deja en parafina caliente hasta el día siguiente.

 

  Figura 10. Moldes para macrobloques y convencional
Figura 10. Moldes para macrobloques y convencional

  Figura 11. Utensilio para alinear la superficie de la muestra.
Figura 11. Utensilio para alinear la superficie de la muestra.

  Figura 12. Nivel adecuado para rellenar de parafina antes de colocar el casete.
Figura 12. Nivel adecuado para rellenar de parafina antes de colocar el casete.

Corte en microtomo    

Hay dos tipos de sistema de cambio del portabloques para microtomos tipo Minot:
uno de ellos se realiza a través de un vástago que sostiene el portabloques (Microm )     (Fig.  13), el otro desliza el portabloques en una placa sujeta al microtomo ( Leica)   (Fig. 14). La ventaja de este segundo sistema es que no hay que orientar de nuevo el portabloques cada vez que se cambia la pinza, lo que ahorra tiempo.
 
Como ya hemos dicho, el tamaño del macrobloque suele ser algo mayor que el recorrido del portabloques sobre la cuchilla, por tanto debemos eliminar parte del margen superior e inferior (ó superior en su caso) del macrobloque  para facilitar el corte. Esto puede realizarse apoyando en un ángulo de 45 grados el borde del bloque sobre la placa caliente  de la estación de parafina.(Fig.15)
 
El desbastado y los cortes (3-4 micras) se realizan de la misma forma que los convencionales. Tras el desbastado se debe volver a enfriar el bloque ; para evitar retirarlo del portabloques  podemos aplicar un cristal previamente enfriado en la placa fría. Es conveniente utilizar una cuchilla nueva antes de  recoger el corte definitivo.
 
De igual forma que en los bloques convencionales , cuando la muestra presenta calcificaciones (lo que es frecuente en el caso de las próstatas) podemos dejar la superficie del macrobloque sobre decalcificante hasta que obtengamos un buen corte.

 

  Figura 13. Pinza para macrobloque de casa comercial MICROM
Figura 13. Pinza para macrobloque de casa comercial MICROM

  Figura 14. Pinza para macrobloque de la casa comercial LEICA
Figura 14. Pinza para macrobloque de la casa comercial LEICA

  Figura 15. Eliminando exceso de parafina
Figura 15. Eliminando exceso de parafina

Tinción    

El protocolo de Hematoxilina-eosina es el mismo que el del resto de las muestras.
Existen adaptadores  para  las cestillas de los teñidores automáticos (Fig. 16) que permiten incluir estos portaobjetos en la rutina del teñidor. En caso de que el teñidor lleve incorporado un montador automático se deberá crear un programa de tinción que finalice en el último xilol para efectuar su montaje a mano.
Figs. 17,18,19,20

 

  Figura 16. Cestillo de teñidor automático con adaptador para macrocristales
Figura 16. Cestillo de teñidor automático con adaptador para macrocristales

  Figura 17. Hematoxilina-eosina de feto de 9 semanas
Figura 17. Hematoxilina-eosina de feto de 9 semanas

  Figura 18. Hematoxilina-eosina de secciones seriadas de globo ocular
Figura 18. Hematoxilina-eosina de secciones seriadas de globo ocular

  Figura 19. Hematoxilina-eosina de cortes consecutivos de recto
Figura 19. Hematoxilina-eosina de cortes consecutivos de recto

  Figura 20. Hematoxilina-eosina próstata
Figura 20. Hematoxilina-eosina próstata

Archivo    

Al tener mayor superficie expuesta al aire, algunos tejidos en macrobloque pueden secarse y retraerse con el paso del tiempo  (Fig. 21) impidiendo realizar nuevos cortes , por lo que es conveniente cubrir esta superficie con una ligera capa de parafina antes de su archivo.
 
 “Casa Alvarez” ha adaptado las guías interiores en los cajones de sus archivadores para bloques , pudiendo ordenarse en ellos los macrobloques en forma horizontal (Fig 22)
En cuanto a los portaobjetos (de 75x50 mm), pueden utilizarse archivadores de diapositivas . Hay que tener en cuenta que   deben dejarse secar suficientemente debido al montaje manual. Para ello, durante este tiempo utilizamos cajas de transporte de portaobjetos convencionales.(Fig. 23 ).
 

 

Figura 21. Bloque con retracción del tejido



Figura 22. Archivador de macrobloques





Figura 23 . Archivo de los portaobjetos correspondientes a macrobloques.




 

 

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