Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica
ISBN: 978-84-692-76778

COMUNICACIONES

2099. Patología Quirúrgica


Direccion de contacto
citogenisa@hotmail.com

Cáncer gástrico: factores pronósticos moleculares mediante Tissue Microarray de bajo costo.

Dr. Jorge Ugalde Puyol[1], Dra. Ma. Isabel Pérez Rovalino[2], Dra Aracelli Palta[3], Dra. Marcia Patiño[2]
(1) Instituto del Cáncer Solca - Cuenca ECUADOR
(2) Instituto del Cáncer Solca-Cuenca ECUADOR
(3) Instituto del Cáncer Solca Cuenca ECUADOR

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Introducción: El descubrimiento de marcadores moleculares proporciona información pronóstica y constituyen nuevos blancos terapéuticos en el tratamiento del cáncer gástrico. Los factores de crecimiento epidérmico (Her-2/neu), de adhesión celular (E-Cadherina) y proteína P53 permiten valorar la biología neoplásica.
Métodos: Se estudia 79 casos de adenocarcinoma gástrico, durante el período  2007-2008. Se valora la sobreexpresión de  Her-2/neu, p53 y E-Cadherina, usando  la técnica de home tissue microarray (TMA), correlacionando la expresión molecular  con la edad,  tipo histológico y la etapa clínica.
Resultados: La edad media de prevalencia de cáncer gástrico fue de 62.8 años, la variedad intestinal representó 73.4% de la serie. Con una sobreexpresión de la proteína Her-2/neu del 18.99%, el p53 el 49.37% y la E-Cadherina con el 32.91%. En cuanto a la correlación de los marcadores con la etapa clínica el Her-2/neu es independiente, el p53 expresó en mayor porcentaje en estadíos más avanzados desde  etapa IIIA (39.24%), y la E-Cadherina expresó en la etapa I en el 100% y en la etapa IV la expresión fue inversa. No existió relación entre la sobreexpresión del Her-2/neu y del p53.
Conclusión: La edad media fue de 62 años, con predominio de patrón intestinal, la E-Cadherina no expresa en los de alto grado, la positividad del p53 se relacionó con la etapa clínica. El Her2/neu se expresó más en la forma difusa. La técnica de TMA (Home) a bajo costo constituye una herramienta útil para la investigación de factores diagnósticos y moleculares en patología neoplásica.

 

Introducción    

El cáncer gástrico es el tumor maligno más frecuente en el mundo. Según los registros de Tumores del Ecuador; en Quito ocupa el tercero y cuarto lugar, y en el cantón Cuenca ocupa el segundo y tercer lugar para hombres y mujeres respectivamente. En Guayaquil el segundo y cuarto  y en Loja es primero y tercero en su orden.

Según las tasas de incidencia de 214 Registros publicados en “Cáncer incidente in Five Continents Vol. VIII”, las tasas de incidencia de la población del cantón Cuenca se ubica en el puesto 43 en los hombres y en el 27 en las mujeres [i].

La incidencia aumenta progresivamente con la edad con una frecuencia mayor entre los 50 y 70 años.

Hasta el momento el diagnóstico se ha basado principalmente en criterios clínico-epidemiológicos,  con el aporte importante del estudio endoscópico, que ha permitido el manejo de lesiones tempranas, y precancerosas, y el estudio histológico que basaba su diagnóstico principalmente en los aspectos morfológicos.

Pero los avances en el campo de la patología molecular han brindado nuevas expectativas tanto para el diagnóstico como para el tratamiento en el cáncer gástrico, la integración de estos nuevos conocimientos  han permitido descubrir los diferentes mecanismos de invasión y de metástasis. Las diferentes secuencias y eventos como la motilidad, angiogenesis,  invasión de los vasos,  supervivencia en la circulación,  adhesión a las células endoteliales y extravasación, son pasos guiados molecularmente [ii]en los que intervienen moléculas de adhesión celular, factores de crecimiento, factores de motilidad, enzimas de degradación de la matríz, la mayoría de estos factores son considerados actualmente como factores pronósticos.

Las células del cáncer gástrico expresan una variedad de factores de crecimiento y sus receptores, estos factores inducen no solo el crecimiento celular sino también la degradación de la matriz extracelular y la angiogénesis  para la invasión tumoral y la proliferación. La amplificación y  sobreexpresión del gen Her-2 /neu o cerb-B2, siendo un gen   receptor de  membrana tirosin kinasa,  miembro de la familia de los receptores de los factores de crecimiento epidérmico, en el carcinoma de la glándula mamaria   funciona como un oncogén, la amplificación del gen induce la sobreexpresión de la proteína en la membrana celular, por lo tanto es un marcador de características clínico patológicas adversas y pobre pronóstico. Siendo  un marcador predictivo de la terapia con el anticuerpo monoclonal trastuzumab en pacientes con cáncer de mama con enfermedad metastásica [iii]. La amplificación del Her2/neu  se ha encontrado en otros tumores malignos  como el cáncer de ovario [iv], pulmón, colon, y carcinoma gástrico.


Las moléculas de adhesión celular pueden funcionar como supresores tumorales. La E-cadherina juega un rol importante en los tejidos epiteliales, por que regula la morfogénesis e inhibe la infiltración tumoral [v].
 
Múltiples mutaciones  del gen E-cadherina que actua a nivel del ciclo celular , CDH1 han sido descritas en relación al desarrollo de cáncer gástrico difuso hereditario en pacientes jóvenes. No se han identificado mutaciones en pacientes con cáncer gástrico familiar de tipo intestinal [vi] [vii] [viii].

El objetivo del presente estudio fue investigar los factores pronósticos moleculares (E- Cadherina, Her2/Neu y p53) en cáncer gástrico utilizando la técnica de múltibloque o tissue microarray (TMA home) de bajo costo y relacionar con las variables  de edad, sexo, tipo histológico, etapa clínica y ganglios linfáticos.

 

Material y Métodos    

Selección de pacientes:
En el  presente estudio  se incluyeron  todas las muestras de gastrectomía durante el año 2008 realizadas en el  Instituto del Cáncer Solca-Cuenca-Ecuador . El universo constituyó 79 piezas las mismas que fueron procesadas en el Departamento de Anatomía Patológica.

Tissue Microarray
La elaboración del multibloque o Tissue Microarray (TMA), hemos realizado en base a los conocimientos ya establecidos por los diferentes investigadores y adaptado a nuestro medio en relación a nuestros recursos.
Previa la comprobación de la zona neoplásica en el bloque fuente, se ubicó la misma mediante la visión al microscopio de la placa de Hematoxilina-Eosina. Se señaló procediéndose a la toma de tres cilindros por cada muestra del tumor , los que son sembrados en el multibloque , ordenados de forma vertical y relacionados por coordenadas para su ubicación y análisis posterior.

Técnica de Inmunohistoquímica
La expresión de los marcadores Cerb-B2 o Her-2/neu (CB11), E-Cadherina (36B5) , y P53(DO-7) se realizaron mediante las técnicas de Inmunohistoquímica en los cortes de TMA-home , las muestras se cortaron en 4 um de espesor, la recuperación antigénica fue realizada en olla de presión digital por 15 minutos en tampón citrato para el Her-2 y p53 y Edta para la E-Cadherina, La inhibición de la peroxidasa endógena se realizó con peróxido de hidrógeno al 3% durante 10 minutos, se incubaron con el anticuerpo primario con la dilución correspondiente Cerb-B2 (1:200), p53 (1:2000), E-Cadherina (1:50)   durante 30 minutos. El método utilizado para la detección fue el de estreptoavidina-biotina marcada con peroxidasa y el cromógeno del revelado fue diaminobencidina (DAB).

Estudio estadístico
Los datos se ingresaron en una  base diseñada en SPSS 15.0. Versión evaluación.
La variables analizadas fueron: Edad, Sexo, Tipo Histológico , Etapa Clínica y Ganglios linfáticos.

 

Resultados    

La edad promedio fue de 62, 8 años, con un comportamiento bimodal a los 40 años la primera y a los 60 la segunda. (fig:1).

 

 

En cuanto al sexo, hubo una distribución similar  del cáncer gástrico en ambos sexos como indica el cuadro  1

 

Cuadro 1.  Tipo histológico vs. Sexo

Tipo histológico

Sexo

Total

Hombre

%

Mujer

%

Lauren T

30

51,72

28

48,28

58

Laurend D

8

57,14

6

42,86

14

Lauren M

2

28,57

5

71,43

7

Total

40

50,63

39

49,37

79

 

 

 

 

 

 

Fuente base de datos

 

 

La variedad histológica se presentó; con un 73,42% para la forma tubular, un 17,72% para la forma difusa y la forma mixta constituyòel 8,86%.  Cuadro 2

 

Cuadro 2. Tipo Histológico  vs. Edad

Edad

Tipo histológico

Total

Lauren T

%

Lauren D

%

Lauren M

%

 

25 – 34

2

50,00

2

50,00

0

0,00

4

35 – 44

5

50,00

3

30,00

2

20,00

10

45 – 54

4

50,00

3

37,50

1

12,50

8

55 – 64

9

69,23

3

23,08

1

7,69

13

65 – 74

19

79,17

3

12,50

2

8,33

24

75 – 84

15

93,75

0

0,00

1

6,25

16

85+

4

100,00

0

0,00

0

0,00

4

Total

58

73,42

14

17,72

7

8,86

79

Fuente base de datos

 

 

La expresión de la proteína Her2/neu fue de un  18,99 % , de estos el 60% se observo en la variedad tubular o intestinal y el 40 % distribuidos  en partes iguales para la formas histológicas difusa y mixta. Cuadro 3. Fig 1-2

 

Cuadro 3 . Expresión Her2/neu vs. Tipo Histológico

Tipo histológico

Her2/neu

Total

Negativo

%

Positivo

%

Lauren T

49

84,48

9

15,52

58

Lauren M

4

57,14

3

42,86

7

Laurend D

11

78,57

3

21,43

14

Total

64

81,01

15

18,99

79

 Fuente base de datos

 

 

 La E-Cadherina  no expresó en el 67,07% y  expresa   en un 32,91 % de las neoplasias, en la forma tubular la  negatividad se observó en el 60%, en las formas difusa, n el 78% y en las mixtas fue del 100%.  Cuadro 4. Fig 3-4

 

Cuadro 4. E-Cadherina vs Tipo histológico

Tipo histológico

E-Cadherina

Total

Negativo

%

Positivo

%

Lauren T

35,00

60,34

23,00

39,66

58,00

Lauren M

7,00

100,00

0,00

0,00

7,00

Laurend D

11,00

78,57

3,00

21,43

14,00

Total

53,00

67,09

26,00

32,91

79,00

Fuente base de datos

 

 

Los resultados de la sobrexpresión del p53 muestra positividad en el 49,37%, distribuyéndose de forma similar tanto en la forma tubular como difusa. Cuadro5. Fig5-6

 

Cuadro 5. P53 VS Tipo Histológico

Tipo histológico

P 53

Total

Negativo

%

Positivo

%

Lauren T

26

44,83

32

55,17

58

Lauren M

5

71,43

2

28,57

7

Laurend D

9

64,29

5

35,71

14

Total

40

50,63

39

49,37

79

Fuente base de datos

 

Analizando la etapa clínica podemos observar que las serie representa el mayor número de casos desde la etapa III. Las etapas tempranas corresponden al 18,98 %.

La sobrexpresión de  Her2-/neu o Cerb-B2 en relación a la etapa clínica fue el 18,99%, sin tendencia a relacionarse con los casos  clínicos tempranos o avanzados. (Cuadro: 6)

 

Cuadro 6. Her2/neu vs  Etapa Clínica

Etapa Clínica

Her2/neu

Total

Negativo

%

Positivo

%

0

2

100,00

0

0,00

2

I

2

100,00

0

0,00

2

I A

2

66,67

1

33,33

3

I B

3

100,00

0

0,00

3

II

3

42,86

4

57,14

7

II A

2

66,67

1

33,33

3

II B

0

0,00

1

100,00

1

III A

20

90,91

2

9,09

22

III B

9

81,82

2

18,18

11

IV

21

84,00

4

16,00

25

Total

64

81,01

15

18,99

79

Fuente base de datos

 

 

La E-Cadherina expresó en la etapa I y en la etapa IV la expresión fue inversa (cuadro 7)

 

Cuadro 7. E-Cadherina vs  Etapa Clínica

 



Discusión    

La edad de presentación media es de 62.8 años,  con un comportamiento bimodal, observándose dos picos, uno a los 40 años y otro a los 60 años. En relación al sexo, no hay diferencia notoria. La variedad histológica  tubular de  la clasificación de Lauren es la que predomina en la serie, conservando la relación entre la forma tubular, mixta y difusa. 

El 18,99% de la serie es positiva para Her2-Neu,  valores observados por Wataru Yasu [i] ,  y es independiente de la forma histológica y a la edad. Hecho importante por la posibilidad de beneficio de terapia “target”, que modificará la sobrevida libre de enfermedad y el pronóstico.

Scarpa y More, [ii] analizan los cambios moleculares de la E Cadherina, en relación a las variedades histológicas con compromiso familiar, su pérdida de expresión y su pronóstico, Nosotros observamos  pérdida de la expresión de E-Cadherina,  en el  67,09 %, , que debe relacionarse con la etapa clínica al diagnóstico,  dicha baja expresión  no se relacionó con las variedades histológicas,  por lo que deben ser realizadas de forma independiente.
La disminución  de la expresión de E Cadherina, relacionada posibilidad de presencia de metástasis  por la pérdida de  adhesión celular, se presentó  en  etapas más avanzadas ( IIIa en adelante), constituyendo el 51% de la serie y si este hallazgo relacionamos con la presencia o ausencia de metástasis ganglionar, se reconoce que, los pacientes con pérdida de la expresión tienen la   posibilidad del 67%, de tener ganglios positivos.   

La mitad de la serie es positiva para sobre expresión de la proteína p53, no existe una expresión particular en relación a la forma histológica,  pero cuando se relaciona con la etapa clínica, los casos con sobre-expresión  se observa en las etapas clínicas avanzadas. Los estudios de  Takashi Matozaki, [iii]demuestran la  frecuencia de de sobreexpresión y mutaciones de p53 en cánceres gástricos y entapas  tempranas. Feng Ji, et al,  [iv]relacionan la sobre expresión de FAT10,  y  las mutaciones en p53, con la posible correlación con metástasis ganglionar y progresión de tumor y que puede promover la invasión neoplásica.

 

Conclusiones    

· La E-Cadherina no expresa en las neoplasias  de alto grado.

· La positividad del p53 se relacionó con la etapa clínica.

· El her2/neu tuvo una mayor expresión  en la forma difusa.

· La técnica de TMA (Home) a bajo costo constituye una herramienta útil para la investigación de factores diagnósticos y moleculares en patología neoplásica.

 

Bibliografía    

1. Registro de tumors de Cuenca. SOLCA-Cuenca, Quinto informe, Incidencia del cáncer en el cantón Cuenca, 1996-2004. 39-47.

2. Werner M, Becker KF, Hofler H. Gastric adenocarcinoma: pathomorphology and molecular pathology. J Cancer Res Clin Oncol 2001;127:207–16.

3. Piccart-Gebhart MJ, Procter M, Leyland-Jones B, Goldhirsch A, Untch M, Smith I, Gianni L, Baselga J, Bell R, Jackisch C, Cameron D, Dowsett M, Barrios CH, Steger G, Huang CS, Andersson M, Inbar M, Lichinitser M, Lang I, Nitz U, Iwata H, Thomssen C, Lohrisch C, Suter TM, Ruschoff J, Suto T, Greatorex V, Ward C, Straehle C, McFadden E, Dolci MS, Gelber RD (2005) Trastuzumab after adjuvant chemotherapy in HER2-positive breast cancer. N Engl J Med 353: 1659–1672

4. Tuefferd M, Couturier J, Penault-Llorca F et al (2007) HER2 status in ovarian carcinomas: a multicenter GINECO study of 320 patients. PLoS ONE 2:1138

5. Hendrik-Tobias Arkenau. Gastric cancer in the era of molecularly targeted agents: current drug development strategies, J Cancer Res Clin Oncol.

6. Gayther SA, Gorringe KL, Ramus SJ, Huntsman D, Roviello F, Grehan N, Machado JC, Pinto E, Seruca R, Halling K, MacLeod P, Powell SM, Jackson CE, Ponder BA, Caldas C: Identification of germ-line E-cadherin mutations in gastric cancer families of European origin. Cancer Res, 58: 4086- 4089, 1998.

7. Stone J, Bevan S, Cunningham D, Hill A, Rahman N, Peto J, Marossy A, Houlston RS: Low frequency of germline Ecadherin mutations in familial and nonfamilial gastric cancer. Br J Cancer, 79: 1935-1937, 1999.

8. Huntsman DG, Carneiro F, Lewis FR, MacLeod PM, Hayashi A, Monaghan KG, Maung R, Seruca R, Jackson CE, Caldas C: Early gastric cancer in young, asymptomatic carriers of germ-line E-cadherin mutations. N Engl J Med, 344: 1904-1909, 2001.

 

Comentarios

- Diaz Anyolina - REPUBLICA DOMINICANA  (03/11/2009 3:45:09)

Escelente ponencia. Soy residente de Patología y pretendo realizar mi trabajo de investigacion final sobre el inmunomarcaje con Herb 2 neu en carcinomas gástricos, por lo que este será una fuente bibliográfica de primera línea.

- Israel Bernal - ESPAÑA  (03/11/2009 10:19:09)

Me gustaría saber si no se realizo un control con pacientes sanos para realizar la comparación o pacientes con otra patología gástrica? Y si el único criterio de inclusión de esas 79 muestras fue que mostraran la patología o hubo algún criterio de exclusión?

- Cira J Velasco Elizalde - CUBA  (05/11/2009 5:30:42)

Concuerdo con Israel que se debía hacer un grupo control para ver como se expresan en tejido no tumoral, o con otras patologías gástricas que pudieran ser lesiones premalignas, como la gastritis atrófica o la infección por Hp, dado que este está catalogado como carcinogénico tipo I

- MARIA ISABEL PEREZ ROVALINO - ECUADOR (Autor) (10/11/2009 2:44:10)

Contestación a Israel, el trabajo se realizó en 79 muestras con diagnóstico de Ca Gástrico, no se comparó con otras patologías gástricas ni en tejido normal.

- MARIO CASTILLO GUTIÈRREZ - MEJICO  (11/11/2009 3:44:30)

MEXICO
Hola, meparece que el diagnostico de ca, se lograba con he, y los marcaje son para determinar el pronostico segun su expesiòn, y en patologìas benignas, no serian positivas a meenos que tuvieran factor genico activo, su ponencia es muy ilustrativa y de gran ayuda para el paciente gracias felicitaciones

- JORGE UGALDE - ECUADOR  (14/11/2009 22:03:52)

Para Mario: Pues si, el diagnóstico de ca gástrico se hace mediante H.E, los marcadores moleculares ayudan al clínico a saber su comportamiento y en caso de Her2-Neu, la posibilidad de terapia Target. Gracias por tu apreciación. J.Ugalde . Autor,.

- Sirced Salazar - CUBA  (16/11/2009 17:55:07)


Sirced
Mis felicitaciones,

El estudio me parece provechoso, y de todas maneras es una investigación y si seria interesante comparar con lesione consideradas premaligna, y seria otra investigación que aportaría mucho, nosotros tenemos un trabajo con marcadores que incluye la E- Caderina en carcinomas mucoepidermoides de GS que tan solo lo terminemos y se publique se los hacemos llegar si es de su interés. No puedo observar bien la foto del Her-2, me parece que hay marcaje citoplasmático, eso no es un problema, mi opinión es que siempre que se hace una investigaron, se debe señalar el patrón de marcaje, eso es evidencia científica y experiencia acumulada para mejores interpretaciones futuras, en Inmuno- histoquímica aun no esta dicho todo, para nada.

- MARIA SALOME GONZALEZ REYES - ESPAÑA  (18/11/2009 14:58:19)

Buen trabajo, actualmente nuestro laboratorio está buscando otros posibles marcadores de cáncer gástrico. ¿habeis pensadpo en validar los resultados de la inmunohistoquímica por alguna otra técnica molecular?

- Luis Ovidio González - ESPAÑA  (18/11/2009 23:27:47)

Felicidades por el trabajo y especialmente por el uso de TMA. Nosotros los hemos inscorporado hace unos años a nuestros estudios y coincido en que es una gran técnica, fácil de realizar aunque laboriosa y que permite realizar estudios de inmunohistoquimica complejos en un número elevado de pacientes y a un coste razonable.

- Alfredo Puertas Cantería - ESPAÑA  (20/11/2009 23:18:13)

Un trabajo interesante, que pone de manifiesto los derroteros moleculares que tomará nuestra especialidad en el futuro. Sin duda debemos habituarnos a esta nueva y prometedora tecnología, sin perder la formación morfológica de vista, y animarnos a realizar trabajos de este tipo. Un aspecto muy importante es la coordinación con otros equipos. ¿Manteneis colaboración con otros grupos de investigación, con los que compartir y comparar resultados?. Un saludo cordial y ánimo para continuar.

- Clóvis Klock - BRASIL  (23/11/2009 13:08:13)

Un trabajo muy interessante. Parabens

- MARIA ISABEL PEREZ ROVALINO - ECUADOR (Autor) (24/11/2009 1:42:34)

Para Ma. Salomé, la amplificación del gen Her-2 la venimos realizando en mama tanto por CISH como FISH con muy buenos resultado, y ahora estamos con CISH dual , técnica que también la utilizaremos en los casos de cáncer gástrico indeterminados.

- Isabel Marquina - ESPAÑA  (24/11/2009 9:07:59)

Interesante, sobre todo el uso de TMA, que es idóneo para estudiar gran número de casos con un bajo coste.

- Victor Leonel Argueta Sandoval - GUATEMALA  (24/11/2009 16:28:46)

Buen trabajo, si lo pensamos como marcadores para mejores tratamientos y pronóstico de la neoplasia. Felicitaciones.

- Ernesto Manuel Hernández Valdés - CUBA  (24/11/2009 16:53:58)

Nos gusta mucho el trabajo. Soy cirujano general y somos "fanáticos" de la cirugía oncológica. Todo muy bien interesante. Felicitaciones.

- MAGDALI DEL ROCIO MURILLO BACILIO - ECUADOR  (26/11/2009 0:53:41)

El trabajo y la perspectiva que buscan los autores muy buena. Se les felicita haber desarrollado una técnica muy práctica y sencilla como el home tissue microarray, que es de bajo costo y no complicada de realizarle

- Enric Condom Mundó - ESPAÑA  (27/11/2009 15:18:47)

felicitaciones
que diametro de aguja utilizais para este TMA? hay discordancias en las tinciones IHQ entre distintas muestras o patrones histològicas del mismo caso?
saludos

- Enric Condom Mundó - ESPAÑA  (27/11/2009 15:19:02)

felicitaciones
que diametro de aguja utilizais para este TMA? hay discordancias en las tinciones IHQ entre distintas muestras o patrones histològicas del mismo caso?
saludos

- Juan Carlos Alvarez Fernández - ESPAÑA  (30/11/2009 20:30:46)

Al igual que el comunicante anterior me gustaría saber si en el caso del Her-2 se ha comprobado si hay diferencias entre la muestra de TMA y una seccion amplia del tumor.

 

 

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