Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica
ISBN: 978-84-692-76778

COMUNICACIONES

2087. Patología Quirúrgica

Estudio inmunohistoquímico de las metaloproteasas y sus inhibidores en los casos invasivos puros e invasivos mixtos, así como en los carcinomas ductales in situ de mama

LUCÍA GONZÁLEZ-LLORENTE[1], LAURA MARÍN[1], SALOMÉ GONZÁLEZ-REYES[1], LUIS O. GONZÁLEZ[1], SARA JUNQUERA[1], JOSE M. DEL CASAR[1], ALEJANDRO ANDICOECHEA[1], JOSE M. GONZÁLEZ[1], FRANCISCO VIZOSO[2]
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El objetivo del estudio es evaluar los diferentes patrones de expresión de metaloproteasas (MMPs) y sus inhibidores (TIMPs) entre el carcinoma ductal in situ (DCIS) y el carcinoma ductal invasivo mixto (IDC) (ambos componentes de los casos de cáncer mixto en mama), así como en los casos de carcinoma ductal invasivo puro (IDC). Un estudio inmunohistoquímico fue realizado en 40 pacientes con DCIS mixto y 40 con IDC puro, usando la técnica de  tissue array y anticuerpos específicos frente MMPs y TIMPs. El componente IDC muestra una mayor expresión de MMP-9 Y 13 en células tumorales más que el componente DCIS; mientras los fibroblastos estromales del componente invasivo muestran mayores expresiones de MMP-2,7,9,13 Y 14, y TIMP-1,2 y 3, que los fibroblastos que rodean los ductos neoplásicos del componente DCIS. Asimismo, expresiones de MMP-14 y MMP-13, eran significativamente mayores en las células inflamatorias mononucleares de IDC en casos mixtos. Por el contrario,la expresión de MMP-1 era significativamente mayor en las células estromales del DCIS mixto con IDC. El IDC puro tiene expresiones significativamente mayores de MMP-1, 9, 11 y 14, y TIMP-1 y 3, más que en el caso el componente IDC mixto. Los resultados muestran asociaciones significativas de la expresión de MMPs por las células estromales periductales del componente DCIS de los casos mixtos y la ocurrencia de metástasis a distancia.

 

Nuestros datos sugieren que el perfil molecular de MMP/TIMP puede contribuir a una mejor caracterización de los carcinomas de mama tempranos, el cual puede contribuir en su comportamiento.


 

Introducción    

Actualmente el carcinoma ductal “in situ” (DCIS) resulta ser el 25% de los nuevos casos diagnosticados de cáncer de mama. DCIS es además el progenitor del carcinoma ductal invasivo (IDC).

 

Como marcadores biológicos potenciales en DCIS se encuentran las metaloproteasas (MMPs); moléculas implicadas en la degradación del tejido conectivo e invasión de las membranas basales. Ha sido identificado el impacto de las MMPs en el comportamiento de las células tumorales a través de la generación de un fenotipo más agresivo produciendo células resistentes a la apoptosis. Además las MMPs favorecen la angiogénesis en cáncer.

 La actividad de las MMPs es específicamente inhibida por los inhibidores de tejido de las metaloproteasas (TIMPs), los cuales son proteínas multifactoriales también involucradas en la inducción  de la proliferación y la inhibición de la apoptosis.

 

Por ello, en el presente estudio se comparan los diferentes patrones de expresión de MMPs y TIMPs entre ambos componentes de los casos mixtos de carcinoma de mama (DCIS e IDC), así como con el carcinoma ductal invasivo puro (IDC).

 

Material y Métodos    

Fue realizado un estudio inmunohistoquímico en 40 pacientes con cáncer de mama mixto y en 40 con IDC puro, usando arrays de tejido y anticuerpos específicos contra MMPs- 1, 2, 11, 13, 14 y TIMPs- 1, 2 y 3. También se realizó un Western blotting de cinco citosoles de IDC o de placenta humana (usado como control positivo), esta técnica se usó para confirmar la presencia de estas MMPs y TIMPs. El análisis de los datos se obtuvo usando el programa SPSS 17.0.

 

 - Ejemplos de microarrays de tejido con inmunotinción para cada proteína evaluada en pares de sets de DCIS (arriba) y componentes invasivos de casos mixtos (abajo). Aumento: 200x.
- Ejemplos de microarrays de tejido con inmunotinción para cada proteína evaluada en pares de sets de DCIS (arriba) y componentes invasivos de casos mixtos (abajo). Aumento: 200x.


 - Western blots representativo de la inmunoreactividad e las metaloproteasas (MMPs) y sus inhibidores (TIMPs). A. Ochenta microgramos de extractos citosólicos de cinco carcinomas de mama (líneas 1-5), fueron tratados con SDS-PAGE al 12% y transferidos a una membrana de nitrocelulosa y luego marcados con MMP-1, MMP-2, MMP-11, MMP-13, MMP-14, TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3 y b-actina (usada como control). Línea P: placenta humana (usada como control positivo).sn, no especificado.
- Western blots representativo de la inmunoreactividad e las metaloproteasas (MMPs) y sus inhibidores (TIMPs). A. Ochenta microgramos de extractos citosólicos de cinco carcinomas de mama (líneas 1-5), fueron tratados con SDS-PAGE al 12% y transferidos a una membrana de nitrocelulosa y luego marcados con MMP-1, MMP-2, MMP-11, MMP-13, MMP-14, TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3 y b-actina (usada como control). Línea P: placenta humana (usada como control positivo).sn, no especificado.




RESULTADOS    

El componente IDC muestra una mayor expresión de MMP-9 y MMP-13  en células tumorales que las correspondientes en el componente de carcinoma ductal in situ (DCIS) de los casos mixtos; mientras los fibroblastos estromales del componente invasivo muestran una mayor expresión de MMP-2, MMP-7, MMP-9, MMP-13 y MMP-14, TIMP-1 y TIMP-3, que los fibroblastos que rodean los ductos neoplásicos en el componente DCIS de los casos mixtos. Asimismo, la expresión de MMP-14 y TIMP-3 es significativamente mayor en las células inflamatorias mononucleares (MIC) del componente invasivo. Por el contrario, la expresión de MMP-1 era significativamente mayor en las células extromales del componente DCIS de los casos mixtos con IDC.

IDC puro tiene una expresión significativamente mayor de MMP-1, 9, 11 y 14, y TIMP-1 y 3, que el componente IDC de los casos mixtos.

 

 - Características clinico- patológicas de los tumores obtenidos de pacientes con IDC mixto e IDC puro.
- Características clinico- patológicas de los tumores obtenidos de pacientes con IDC mixto e IDC puro.


 - Porcentajes de tumores mostrando la expresión de MMPs y TIMPs por los diferentes tipos celulares.
- Porcentajes de tumores mostrando la expresión de MMPs y TIMPs por los diferentes tipos celulares.


 - Valores de MMP/TIMP ambos componentes de los casos mixtos y en IDC puro.
- Valores de MMP/TIMP ambos componentes de los casos mixtos y en IDC puro.


 - Análisis de Cox  univariante (HR) y multivariante (RR) de las relaciones entre la expresión de MMPs y TIMP y la supervivencia libre de recaídas.
- Análisis de Cox univariante (HR) y multivariante (RR) de las relaciones entre la expresión de MMPs y TIMP y la supervivencia libre de recaídas.




CONCLUSIONES    

Nuestros datos contribuyen a un mejor conocimiento de las diferentes fases de progresión de los cánceres de mama. Las variaciones en la expresión de MMPs y TIMPs, tanto por células tumorales como estromales, parecen tener un papel esencial creando un fenotipo invasivo en el cáncer de mama. Así, el perfil molecular de MMPs y TIMPs puede contribuir a una mejor caracterización de los carcinomas de mama tempranos, los cuales difieren en su comportamiento biológico y clínico.

 

Agradecimientos    

Querría agradecer al Dr Antonio Martínez Merino por su colaboración en la selección de los tejidos para la realización de los arrays.

 

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Comentarios

- Carolina Luque - ARGENTINA  (15/11/2009 16:50:00)

Muy interesante el trabajo. Nosotros realizamos un estudio de las Metaloproteasas relacionado con el Carcinoma Basocelular. gracias

- NATALIA MARTÍNEZ CASTILLO - URUGUAY  (18/11/2009 1:28:42)

Me pareció interesante el trabajo. gracias

- Luis Ovidio González - ESPAÑA  (19/11/2009 11:35:59)

Gracias por los comentarios, sé que es un trabajo duro de leer y que se escapa un poco a lo que solemos enfrentarnos los patólogos por ello reitero, si cabe, el mérito de haberlo leído y escrito un comentario. Muchas gracias en nombre de los autores.

 

 

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