Efecto de la administración de sacarina de sodio sobre el área de gránulos de mucina de las células caliciformes del intestino delgado del ratón cepa Balb/C

Adriana del Carmen Elias^[1], Susi Davolio^[2], Norma Sosa^[2], Georgina Torres Nieto de Mercau^[2], Diego Abdala^[2]
(1) Cátedra de Bioestadística, Facultad de Bioquímica,Química y Farmacia, Universidad Nacional de Tucumán. ARGENTINA
(2) Dpto Biomédico(Or.Histología), Facultad de Medicina, Universidad Nacional de Tucumán ARGENTINA

RESUMEN

Introducción: Los gránulos de mucina conforman  el material de secreción de las células caliciformes del intestino delgado. En trabajos experimentales previos, los autores  encontraron disminución tanto en el número de células caliciformes como en el número de gránulos, como consecuencia de la administración de sacarina por medio de inyección. Objetivo: analizar si se observan también alteraciones en el área de proyección, de gránulos, en fotografías obtenidas con microscopio electrónico. Material y Métodos: Se utilizaron 6 lotes de 10 ratones endocriados, adultos, de 2 meses de vida, de la cepa Balb/c, alimentados con la misma dieta y bebida.  Seleccionados aleatoriamente para formar: Tres Grupos Testigos (GT) y tres Grupos Experimentales(GE). A cada GE se  inoculo por via intraperitoneal 1 mg de Sacarina de Sodio Sigma S-1002, lote 44HO189/1ml solución fisiológica. A GE1 durante 15 días, a GE2 durante 30 días y a GE3 durante 60 días. A cada GT se le inoculo 0,1 ml de solución fisiológica salina durante 15, 30 y 60 días. Las unidades experimentales se sacrificaron, se disecaron los duodenos del intestino delgado. Cada muestra fue fijada por inmersión en glutaraldehido al 1,5% en buffer cacodilato 0,05 M, pH 7,2 por dos horas y lavados luego con buffer  cacodilato 0,05M. La post-fijación se realizo en ácido ósmico al 1% en buffer cacodilato 0,05M, pH 7,2 por 1 hora a 4°C. El material fue deshidratado en baños sucesivos de acetona de graduación creciente y embebido posteriormente en EPO. Los cortes histológicos fueron teñidos y observados con microscopio de transmisión (ZEIS, EM109). Se fotografiaron 3 zonas de cada preparado a 7000x . De cada fotografía se seleccionaron aleatoriamente 5 gránulos, luego con el programa ImageTools se midieron las áreas proyectadas en pixel^2. Se realizó un estudio exploratorio descriptivo, ANOVA(Kruskall-Wallis), análisis gráfico y se calcularon Tasas de Variaciones relativas(TVR) y Coeficientes de Variabilidad Relativa(CVR) para analizar incrementos/disminuciones y variabilidad respectivamente.

Resultados:

Kruskall-Wallis(p<0,001). Se observaron diferencias significativas entre las medianas de los grupos GE respecto a GT

Discusión: En 15 y 30 días disminuye el área granular efecto que se invierte a los 60 días. Como el volumen de mucina en el intestino delgado está relacionado con el número y tamaño de los gránulos secretados, cabe la pregunta si la disminución del número se ve compensada con el tamaño de los gránulos en la producción del mucus a largo plazo.

Célula Caliciforme con Granulos de Mucina -

Introducción    

Las células caliciformes son glándulas unicelulares secretoras de moco que se distribuyen entre las células absorbentes del epitelio intestinal. El material de secreción aparece en forma de grandes gránulos pálidos, electrónicamente densos.
Los gránulos de mucina conforman  el material de secreción de las células caliciformes del intestino delgado. El número y tamaño adecuado de gránulos secretado por las células caliciformes está  relacionado con el volumen apropiado de mucina producido en el intestino delgado. En trabajos experimentales previos, los autores  encontraron: alteraciones en las microvellosidades del intestino delgado, disminución en el número de células caliciformes, y disminución del número de gránulos de mucina como consecuencia de la administración de sacarina por medio de inyección.

Objetivo: analizar si se observan  alteraciones en el área de proyección, de gránulos, de  en fotografías obtenidas con microscopio electrónico.

LABORATORIO DE HISTOLOGIA-FACULTAD DE MEDICINA-UNT -

RATONES CEPA BALB C - GRUPO EXPERIMENTAL -

Material y Métodos    

Se utilizaron 6 lotes de 10 ratones endocriados, adultos, de 2 meses de vida, de la cepa Balb/c, alimentados con la misma dieta y bebida ad-libitum.  Seleccionados aleatoriamente para formar: Tres Grupos Testigos (GT) y tres Grupos Experimentales(GE).
A cada GE se  inoculo por via intraperitoneal 1 mg de Sacarina de Sodio Sigma S-1002, lote 44HO189/1ml solución fisiológica. A GE1 durante 15 días, a GE2 durante 30 días y a GE3 durante 60 días.
A cada GT se le inoculo 0,1 ml de solución fisiológica salina durante 15, 30 y 60 días.

Las unidades experimentales se sacrificaron, se disecaron los duodenos del intestino delgado. Cada muestra fue fijada por inmersión en glutaraldehido al 1,5% en buffer cacodilato 0,05 M, pH 7,2 por dos horas y lavados luego con buffer  cacodilato 0,05M. La post-fijación se realizo en ácido ósmico al 1% en buffer cacodilato 0,05M, pH 7,2 por 1 hora a 4°C. El material fue deshidratado en baños sucesivos de acetona de graduación creciente y embebido posteriormente en EPO.
Los cortes histológicos fueron teñidos y observados con microscopio de transmisión (ZEIS, EM109). Se fotografiaron 3 zonas de cada preparado a 7000x .
De cada fotografía se seleccionaron aleatoriamente 5 gránulos, luego con el programa ImageTools se midieron las áreas proyectadas en pixel^2. 
El diseño del estudio fue experimental de casos y controles. El  estudio estadístico fue exploratorio descriptivo, ANOVA(Kruskall-Wallis), análisis gráfico y se calcularon Tasas de Variaciones relativas(TVR) y Coeficientes de Variabilidad Relativa(CVR) para analizar incrementos/disminuciones y variabilidad respectivamente.

Se definió Tasa de Variación relativa:

           GE-GT
  TVR= --------- .100
             GT              

(valores positivos indican incrementos, valores negativos indican disminuciones)

y como Coeficiente de Variabilidad Relativa:

                    SD
   CVR= ------------------- 100 (medida de variabilidad relativa)
           media aritmética

(valores menores al 20% indican poca variabilidad)

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Resultados    

Para estudiar estas diferencias se utilizaron métodos analíticos considerando Tasas de Variaciones Relativas (TVR)  y gráficos (Gráfico Nº 1: Box-Plot).

Tabla Nº 2:

Es posible notar que al comparar las medianas de los grupos experimentales con los grupos testigos  a los 15 y 30 días de exposición se observa disminución y a los 60 días  incremento en el área de gránulos. Este resultado tambien se puede notar en el  Gráfico Nº 1.

Gráfico Nº 1 - Distribución del Area de Gránulos de Mucina según días de Exposición y Grupo

Discusión    

En 15 y 30 días disminuye el área granular efecto que se invierte a los 60 días. Recordando que en trabajos anteriores encontramos disminución en el número de gránulos por efecto de la administración de Sacarina y como el volumen de mucina en el intestino delgado está relacionado con el número y tamaño de los gránulos secretados, cabe la pregunta si la disminución del número se ve compensada con el tamaño de los gránulos en la producción del mucus a largo plazo y si este último sufre alguna modificación en cuanto a su calidad.

Conclusiones    

Basandonos en nuestros estudios experimentales, podemos inferir que la ingesta crónica de edulcorantes provoca una disminución del número de granulos de mucina, de modo que estarían empaquetados en forma más laxa lo que determinaría una expansión de los mismos dentro de la célula.  

Bibliografía    

1 - Torresani M, Cardone C, Palermo C, Rodríguez V, Viegener C, Garavano C, Di Sanzo M, Llaría C. MANEJO Y CONSUMO DE PRODUCTOS DIETÉTICOS Y EDULCORANTES NO NUTRITIVOS. Rev Esp Nutr Comunitaria .2001. 7(3-4):61-68.

2 - Davolio S, Elias A del C, Vitalone HH, Torres Nieto de Mercau GN, Sosa N, Mercau G, Gomez SO, Abdala D. PASAJE DE LA SACARINA DE SODIO A TRAVES DE LA BARRERA HEMATOENCEFALICA EN EL SNC DE RATONES DE LA CEPA BALB C- PRUEBAS EXPERIMENTALES, 2007,  Nº819, Comunicación libre (ID trabajo=819, tipo=2). url: www.conganat.org/9congreso/trabajo.asp 

3 - Torres de Mercau G, Riera de Martinez N, Mercau GA, Martinez Riera N, Soria de Santos N, Vitalone H.  ALTERACIONES EN LA CITOMEMBRANA Y CÉLULAS DE SUPERFICIE DEL INTESTINO GRUESO POR ACCIÓN DE LOS EDULCORANTES. Acta Gastroenterológica Latinoamericana. 1995.  25, N° 1: 35- 39.

4 - Torres de Mercau G, Martinez Villa NR, Vitalone H, Mercau G, Gamundi S, Martinez Riera N, Soria N. EFECTO DE LA SACARINA DE SODIO SOBRE EL EPITELIO TRAQUEAL DEL RATÓN. Medicina (Buenos Aires).1997. 57: 437- 440.

5 - Torres de Mercau G, Riera de Martines Villa N, VitaloneHH, Mercau GA, Gamundi SS, Martinez Riera N, Soria N; PERMANENT MORPHOLOGICAL ALTERATIONS INDUCED BY SODIUM SACCHARIN ON MICE LARGE INTESTINE EPITHELIUM.  BIOCELL. 1997. 21(2): 115- 118.

6 - Susi Davolio, Adriana del Carmen Elías, Sergio Gómez, Georgina Nydia Torres Nieto  de Mercau, Guillermo Adolfo Mercau, Diego Abdala. INFLUENCIA DE LA SACARINA DE SODIO SOBRE EL NÚMERO DE CELULAS CALICIFORMES EN EL INTESTINO DELGADO DEL RATON. 2005. www.conganat.org/7congreso/469.pdf.

Comentarios

- Silvia Gómez Arce - ESPAÑA  (13/11/2009 12:39:03)

Muy interesante el artículo. En las microvellosidades ¿observaron disminución? si es así, los ratones ¿no presentaron síntomas de malabsorción como vómitos, diarreas, pérdida de peso, ...?
Enhorabuena por el artículo.

- IGNACIO J. CLAROS GONZÁLEZ - ESPAÑA  (13/11/2009 19:20:42)

Se me ha planteado la misma duda que a Dª Silvia Gómez Arce el efecto sobre la microvellosidades, sin desmerecer en absoluto la calidad del trabajo

- José Víctor Bolarín Lucas - ESPAÑA  (18/11/2009 10:38:30)

Interesante

- SUSI DAVOLIO - ARGENTINA  (27/11/2009 21:14:01)

Estimados doctores, efectivamente durante las experiencias pudimos observar tanto diarreas como perdidas de pesos, lo cual exponemos en otros trabajos que publicaremos pronto. También debo agregar que macroscópicamente observamos en el intestino delgado de estos animales micro ulceraciones.
De todos modos, nuestros estudios experimentales continúan y siempre descubrimos algo nuevo, lo que nos lleva a ampliar nuestros horizontes en la temática de los edulcorantes, sobre la cual aún queda mucho por conocer.
Agradezco en nombre de todo el equipo vuestro interes y opiniones que para nosotros son muy valiosas.