ISBN: 978-84-692-76778
COMUNICACIONES
Nº 1764. Otras disciplinas
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Ana Belén Meseguer Henarejos[1], David Armero Barranco[1], Nuria Álvarez Sánchez[2], Julián Castillo[3], Obdulio Benavente-García[3], Vicente Vicente Ortega[2], Miguel Alcaraz Baños[1] |
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cialis pillolagenerico cialis 5 mg openAntecedentes: El cisplatino es un fármaco utilizado en el tratamiento del cáncer de próstata que, combinado con radiación, presenta efectos sinérgicos. El ácido carnósico es el principal polifenol del romero y presenta propiedades antioxidantes y antimutagénicas, además de haber demostrado poseer efectos beneficiosos sobre varias líneas celulares de leucemia y cáncer de colon. El dimetil sulfóxido (DMSO) es un compuesto antioxidante sulfurado que presenta una gran actividad eliminadora de radicales hidroxilo.
Objetivo: Estudiar el efecto de la combinación de la irradiación con rayos X y el tratamiento con ácido carnósico y del DMSO sobre la línea celular de carcinoma de próstata TRAMP-C1, en comparación con el cisplatino, un conocido radiosensibilizante.
Material y Métodos: Administramos cisplatino (12,5, 25 μM), ácido carnósico (10, 20 μM) o DMSO (0,1%, 0,2%) a cultivos de la línea celular de carcinoma de próstata TRAMP-C1; tras 15 minutos, las células fueron irradiadas con rayos X (4, 6, 8, 10 Gy). Pasadas 24 o 48 horas de los tratamientos, realizamos el test colorimétrico del MTT para evaluar la viabilidad celular de los cultivos.
Resultados: El tratamiento únicamente con rayos X o con cada uno de los compuestos ensayados inhibió el crecimiento tanto a 24 como a 48 horas; en general, la inhibición del crecimiento provocada por la radiación y los compuestos de forma aislada no superó el 20%. Sin embargo, la combinación de cisplatino o de ácido carnósico con rayos X provocó un aumento significativo de la inhibición del crecimiento que llegó al 80% y dependió de la dosis de compuesto, de la intensidad de la radiación y del tiempo. Los efectos del tratamiento con rayos X y DMSO fueron similares a los de la irradiación aislada.
Conclusión: El cisplatino y el ácido carnósico actuaron como radiosensibilizantes en esta línea de carcinoma de próstata.
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Los rayos X y los rayos γ generan especies reactivas de oxígeno (ROS) en los organismos e inducen lesiones del ADN celular que llevan a mutaciones y aberraciones cromosómicas o a la muerte de la célula (1, 2, 3, 4).
Diversos autores han demostrado que ciertos compuestos de plantas, como son los polifenoles, flavonoides, catequinas y procianidinas, tienen capacidad para eliminar las ROS e inhibir los efectos de los rayos X y rayos γ sobre las células, tanto in vivo como in vitro (2, 4, 5, 6, 7, 8). Los polifenoles representan un grupo interesante de antioxidantes que puede reducir procesos peroxidativos en tejidos a través de diferentes mecanismos (9, 10, 11). La dieta mediterránea, rica en frutas frescas y hortalizas, se ha asociado con una baja incidencia de enfermedad cardiovascular y cáncer, particularmente por su alta proporción de de componentes bioactivos tales como vitaminas y polifenoles. Debido a la actividad antioxidante de muchos de estos compuestos, se ha investigado su posible uso como radioprotectores (7, 8, 12, 13).
El cisplatino es un fármaco que contiene platino en su estructura, que actúa inhibiendo la multiplicación de las células tumorales. Forma uniones entre las cadenas de la doble hélice de DNA, provocando interferencias importantes en los procesos de división. Se utiliza en el tratamiento del cáncer de próstata en el que, combinado con radiación, presenta efectos sinérgicos (14).
El DMSO (dimetil sulfóxido) es un compuesto que contiene sulfuro y que puede ser considerado como un agente radioprotector según datos estructurales y experimentales (15). Es un clásico eliminador de radicales, con una capacidad para eliminar radicales hidroxilo in vitro mayor que la mostrada por muchos flavonoides: un 30% mayor que quercetina, un 40% mayor que diosmina y un 50% mayor que la catequina (16, 17). Sin embargo, cuando se aplica con dosis radioprotectoras, en ausencia de cualquier irradiación posterior, es altamente tóxico en animales (18, 19, 20).
El ácido carnósico es uno de los compuestos polifenólicos con actividad antioxidante que han sido identificados en el romero (Rosmarinus officinalis L.) (21, 22, 23, 24, 25, 26). El ácido carnósico mejora la actividad antitumoral de la vitamina D3 y sus análogos (27, 28), inhibe la proliferación de las células de leucemia mieloide humana HL-60 y U937 (29), estimula la síntesis del factor de crecimiento del nervio en células de gliobastoma humano T98G (30), e inhibe las funciones de la célula endotelial como un agente quimioprotector novedoso y potente del cáncer (31).
El objetivo de nuestro estudio ha sido estudiar el efecto de la combinación de la irradiación con rayos X y el tratamiento con ácido carnósico y del DMSO sobre la línea celular de carcinoma de próstata TRAMP-C1, en comparación con el cisplatino, un conocido radiosensibilizante.
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Reactivos. El medio Dulbecco`s Modified Eagle`s Medium (DMEM), el medio RPMI 1640, la glutamina, la dehidroandrosterona, la insulina, la penicilina, la estreptomicina, el 3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT), el dimetil sulfóxido (DMSO), el cisplatino y el Hoechst 33258 procedían de Sigma Co. (España). El suero bovino fetal (SBF) y el Nu-Serum se compraron a Gibco (EEUU) y a BD (EEUU), respectivamente. El ácido carnósico fue cedido por Nutrafur-Furfural Español (España).
Líneas celulares. Hemos utilizado la línea de carcinoma de próstata murino TRAMP-C1 (ATCC, EEUU). La línea TRAMP-C1 fue mantenida en medio DMEM con 4,5 g/l de glucosa suplementado con SBF (5%), Nu-Serum (5%), glutamina (4 mM), dehidroandrosterona (10 nM), insulina (10 mg/ml), penicilina (100 UI/ml) y estreptomicina (100 μg/ml) y cultivada a 37ºC con un 8% de CO2. Regularmente comprobamos la ausencia de contaminación por Mycoplasma spp. mediante la tinción del DNA con fluorescencia directa con Hoechst 33258.
Ensayo de viabilidad celular (MTT). Utilizamos la técnica descrita por Carmichael et al (32, 33)y por Alley et al (34), adaptada a nuestras condiciones de cultivo (35) para cuantificar la viabilidad celular.
Las células fueron cultivadas en placas de 96 pocillos a una densidad adecuada (2000 células TRAMP-C1 por pocillo) durante 24 horas, tras lo que añadimos los tratamientos recién preparados (cisplatino (12,5, 25 μM), ácido carnósico (10, 20 μM) o DMSO (0,1%, 0,2%), realizando 6 réplicas por cada tratamiento; 15 minutos después, irradiamos las placas en un irradiador de rayos X (Yxlon Smart) aplicando intensidades de radiación de 4, 6, 8 y 10 Gy.
Pasadas 24 y 48 horas de comenzar el tratamiento, eliminamos el medio e incubamos las células en las mismas condiciones de cultivo descritas, con MTT (1 mg/ml) durante 4 horas. Pasado ese tiempo, eliminamos cuidadosamente el medio y el MTT no metabolizado y añadimos 100 μl de DMSO a cada pocillo para solubilizar el formazano producido por las células viables. Leímos las placas en un espectrofotómetro de placas Multiskan MCC/340P, usando una longitud de onda de 570 nm para la lectura y de 690 nm como longitud de onda de referencia.
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El tratamiento únicamente con rayos X o con cada uno de los compuestos ensayados inhibió el crecimiento tanto a 24 como a 48 horas; en general, la inhibición del crecimiento provocada por la radiación y los compuestos de forma aislada no superó el 20%, salvo en el caso del ácido carnósico 20 μM, que causó inhibiciones del crecimiento del 51.83% y el 51.77% a las 24 y 48 horas respectivamente. Sin embargo, la combinación de cisplatino (Fig. 1) o de ácido carnósico (Fig. 2) con rayos X provocó un aumento significativo de la inhibición del crecimiento que llegó al 85% y dependió de la dosis de compuesto, de la intensidad de la radiación y del tiempo.
En general, los efectos del tratamiento con rayos X y DMSO fueron muy débiles, similares a los de la irradiación aislada, excepto con las dosis de irradiación más elevadas (8 y 10 Gy). Así, al combinar 8Gy junto con cualquiera de las concentraciones de DMSO (0.1 y 0.2%) el porcentaje de inhibición está entre 27-38%. También hay un aumento del porcentaje de inhibición al combinar 10 Gy junto con DMSO (0.1 y 0.2%) a las 48 horas (en torno al 40%) (Fig. 3).
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Los efectos biológicos de las radiaciones ionizantes, que incluyen los rayos X, se deben, en su mayor parte, a la generación de ROS, capaces de oxidar el ADN, lípidos y proteínas y causar aberraciones genéticas (2, 3, 4), y también a la alteración de diversos receptores (EGFR), enzimas celulares (COX-2), moléculas señalizadoras, factores de transcripción (NF-kB, STAT3) y reguladores de la apoptosis celular (Bcl-2) (36).
El ácido carnósico, principal compuesto polifenólico del romero (Rosmarinus officinalis L.), tiene reconocidas propiedades antioxidantes y antimutagénicas (12). Además, diversos estudios in vitro han demostrado que provoca la disminución de la proliferación celular, la inducción de apoptosis y el bloqueo del ciclo celular en varias líneas celulares de leucemia y cáncer de colon, bien de forma aislada, bien potenciando los efectos de otros compuestos (37). Recientemente, un estudio ha demostrado que el ácido carnósico inhibe la expresión de moléculas de adhesión, altera la translocación al núcleo de NF-κB e inhibe la producción de radicales libres de oxígeno en una línea celular de leucemia (38).
En nuestro estudio, al comparar el ácido carnósico con el cisplatino, que es un conocido radiosensibilizante (14), el ácido carnósico ha demostrado tener un potencial radiosensibilizante mayor que el cisplatino. Concretamente a las 24 y 48 horas, el ácido carnósico 20 μM junto con 8 Gy fue más radiosensibilizante que el cisplatino 25 μM con la misma intensidad de radiación. Además del mayor potencial radiosensibilizante del ácido carnósico frente al cisplatino, este compuesto natural tiene la ventaja de no resultar tóxico, pues es un compuesto presente en la dieta mediterránea, mientras que el cisplatino puede provocar diversos daños, como daño hepático, renal, sordera, toxicidad ocular (incluyendo desprendimiento de la retina), mielosupresión significativa, náuseas y vómitos intratables y/o neuritis (39).
El DMSO es un agente radioprotector según datos estructurales y experimentales (15). A pesar de su capacidad como antioxidante, en nuestro estudio apenas se ha observado una sinergia con los rayos X, excepto a dosis elevadas de rayos X (8 Gy, 10 Gy). Sin embargo, y al igual que el cisplatino, el DMSO también presenta toxicidad; en animales resulta tóxico cuando se aplica a dosis elevadas (18, 19, 20).
Como conclusión podemos indicar que el cisplatino y el ácido carnósico actuaron como radiosensibilizantes en esta línea de carcinoma de próstata.
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- Julio Eduardo Arce Miranda - ARGENTINA (06/11/2009 19:17:07)
- Mª Piedad Ramirez Fernandez - ESPAÑA (10/11/2009 12:22:54)
- Mª Piedad Ramirez Fernandez - ESPAÑA (10/11/2009 13:21:41)
- Nuria Álvarez Sánchez - ESPAÑA (Autor) (12/11/2009 12:50:45)
- Addys Gonzalez Palomo - CUBA (16/11/2009 21:17:54)
- Nuria Álvarez Sánchez - ESPAÑA (Autor) (16/11/2009 22:11:33)
- José Víctor Bolarín Lucas - ESPAÑA (18/11/2009 10:23:28)
- Francisco José Gómez García - ESPAÑA (18/11/2009 11:04:43)
- Nuria Álvarez Sánchez - ESPAÑA (Autor) (20/11/2009 10:27:58)
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