10º Congreso Virtual Hispanoamericano de Anatomía Patológica

Congreso Virtual sobre Anatomía Patológica

ISBN: 978-84-692-76778

COMUNICACIONES

Nº 1645. Citopatología

Direccion de contacto
Hospital Universitario de Guadalajara. C/ Donantes de sangre s/n 19002 Guadalajara - España

Citologia de orina. Comparativa del procesado en citologia líquida y membrana

Gima Varona Esquivel^[1], Gerardo Patiño Toledano^[1], Raquel Castillo Castillo^[1], Laura Gómez Yécora^[1], Alfredo Ramos Pastor^[2]
(1) Hospital Universitario de Guadalajara ESPAÑA
(2) Hospital Universitario "Principe de Asturias" ESPAÑA

Resumen

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INTRODUCCIÓN

Ante la variedad de métodos utilizados en el procesado de orinas para su estudio citológico y la disparidad de resultados, nos planteamos la necesidad de realizar un estudio comparativo entre los dos métodos, que bajo nuestra experiencia proporcionan los mejores resultados para el diagnóstico,ya que en ambos casos la cantidad de orina procesada es mayor a la de otros métodos.

MATERIAL Y METODOS

-Equipos de filtración de membrana.
-Sistema de procesado de citología líquida.
-Muestras de orinas de diferentes pacientes elegidos al azar.

CONCLUSION

Evaluados varios casos de muestras procesadas con ambos métodos, demostramos mejoras significativas en la calidad morfológica de la muestra debido a su mejor conservación, cantidad de material para futuras técnicas especiales (IHQ,PCR), como en la eliminación de material de fondo, dejando como único punto negativo su mayor coste.

Ante la variedad de métodos utilizados en el procesado de orinas para su estudio citológico, como son el cytospin, la centrifugación y extensión directa, la filtración a través de sistemas de membrana (nucleopore y millipore) y preparación en base líquida, se ha hecho un estudio comparativo entre los dos métodos, que bajo nuestra experiencia proporcionan la mayor cantidad de células para su estudio y los mejores resultados para el diagnóstico, estos son el sistema de filtrado de membrana nucleopore y la preparación en base líquida (LBP).

Las muestras, elegidas al azar entre los pacientes que vienen a nuestro servicio de Anatomía Patológica, son procesadas con los dos métodos de elección: el sistema de filtrado nucleopore y la LBP.

Al pedirles a los pacientes una cantidad aproximada de 100cc de orina, tenemos muestra más que suficiente para utilizarlas con los dos métodos de procesado.

El material utilizado es el siguiente:

- Muestras de orina de diferentes pacientes

- Equipos de filtrado de membrana nucleopore de 20 mm de diametro.

- Sistema de procesado de LBP de 20 mm de diametro (Thin Prep).

La técnica de membrana nucleopore, se basa en el filtrado de la muestra a través de un soporte (holder) que contiene una membrana de policarbonato de aproximadamente 5μ de diámetro.

Su procedimiento técnico es el siguiente:

- Colocar la membrana en el portafiltros con la cara brillante hacia arriba, que corresponda con el orificio de entrada.

- Filtrar con una jeringa unos 5-10 cc de suero fisiológico para así humedecer el filtro.

- Filtrar muestra hasta que se note dificultad al paso de la orina.

- Filtrar 5-10 cc de alcohol de 50º.

- Retirar el filtro del holder y colocar la membrana en un portaobjetos, con la cara celular hacia arriba y sujetar la membrana al porta con una pinza.

- Fijar, como mínimo 30 minutos, en el alcohol de 96º y proceder a la tinción Papanicolaou hasta el paso alcohol absoluto-xilol.

- Colocar la membrana con la cara celular sobre un portaobjetos nuevo y se presiona sobre papel absorbente para que las células se adhieran.

- Introducir el porta en una cubeta de coplin con triclorometano hasta la disolución de la membrana o bien si la muestra es muy celular, colocar en unas paralelas en horizontal añadiéndoles el triclorometano.

- Dejar secar y montar. (foto 1)

El sistema de procesado de preparaciones en base líquida, se basa en la obtención, en la superficie de un portaobjetos, de una capa fina y uniforme de material. El procedimiento técnico es el siguiente:

- Centrifugar 50cc de orina en fresco durante 10 minutos a 1800 r.p.m.

- Decantar el sobrenadante y resuspender el botón celular.

- Añadir 30cc de solución de lavado repitiendo los dos pasos anteriores.

- Evaluar la apariencia del botón celular, si es muy hemático se repite el proceso a partir del segundo paso y si no continuar al paso siguiente.

- Si el botón celular es menor de 1 ml. pasar 2 gotas al vial de trabajo.

- Si el botón celular es mayor de 1 ml. diluir con solución de lavado y pasar 1 gota al vial.

- Fijar 15 minutos.

- Procesar la muestra en el procesador de citología en base líquida.

- Teñir con Papanicolaou. (Foto 2)

Foto 1 - Técnica de membrana Nucleopore

Foto 2 - Procesado de preparaciones en base líquida (LBP)

Método de procesado

- La técnica de membrana nucleopore requiere una continua manipulación directa de la muestra, y sumo cuidado por parte del técnico en la elaboración del proceso, el cual esta sujeto a múltiples variables (cantidad de muestra que admite el filtro, material que se adhiere al porta, disolución de la membrana, etc.)

- La técnica de la LBP no requiere manipulación directa por parte del técnico al ser un proceso automatizado y por lo tanto sujeto a muy pocas variables.

Cantidad de material

Evaluadas las muestras de orinas procesadas con ambos métodos, observamos que la cantidad de células traspasadas al portaobjetos para su visualización es similar (Foto 3-4), pero con la LBP, dispondremos de material restante bien conservado en el vial para realizar estudios posteriores, ya que la orina en fresco se degenera y cristaliza, aun conservada en nevera. (Foto 5)

Calidad técnica

- Patrón de extendido:

- Con el método de membrana el extendido es multicapa, con lo que hay superposición del material obtenido (Foto 6)

- Con la LBP el extendido es monocapa, con lo que el material celular es uniforme y distribuido homogéneamente. La disposición arquitectural se mantiene y hay muy poco solapamiento de células (Foto 7)

- Patrón de fondo:

- Con el método de membrana en el fondo aparecen todo tipo de sedimentos, hematíes, células inflamatorias, restos de membrana, etc. que a veces dificultan, o hacen imposible la visualización de las células (Foto 8)

- Con la LBP, el fondo es limpio, el componente inflamatorio y la diátesis están dispersas de forma homogénea, o agrupadas sin dificultar la visualización de las células, microorganismos, etc. (Foto 9)

- Tinción:

Las diferencias tintoriales de ambos métodos radican en que la LBP presenta menos tinción de fondo, menos hipercromatismo nuclear y una imagen microscópica mas nítida debido a la mejor conservación de las células, apreciándose mejor los diferentes componentes celulares (Foto 10)

- Detalle morfológico:

Las diferencias morfológicas celulares entre ambos métodos están relacionados con el líquido fijador. La LBP tiende a redondear las células y reducirlas de tamaño (Foto 11-12), pero proporciona una mayor variabilidad en la tinción nuclear con lo que el detalle de la cromatina se aprecia más claramente. Además refuerza y preserva mejor los detalles nucleares y citoplasmáticos (Foto 13) que el método de membrana, donde los detalles morfológicos están menos reforzados (Foto 14) y produce una pequeña distorsión artefactual (Foto 15)

Representatividad

Con ambos métodos se obtienen preparaciones representativas de la totalidad de las células contenidas en la orina a estudio, ya que al porta se adhieren una muestra al azar de todas ellas (Foto 3-4-11-12)

Foto 3 - Membrana 10x

Foto 4 - LBP 10x

Foto 5 - Membrana. Sedimento e inflamación en el fondo de la preparación, insatisfactoria para estudio.

Foto 6 - Membrana. Superposición celular.

Foto 7 - LBP. Monocapa.

Foto 8 - Componente inflamatorio y restos de membrana que dificultan la visualización

Foto 9 - Microorganismos y componente inflamatorio en LBP.

Foto 10 - Imagen nitida de LBP.

Foto 11 - LBP. Morfología redondeada en grupo celular.

Foto 12 - Membrana. Dispersión celular

Foto 13 - LBP. Polyomavirus, nitidez y fino detalle morfológico

Foto 14 - Membrana. Polyomavirus. Detalles morfológicos menos reforzados.

Foto 15 - Imagen con ligera distorsión de la morfología celular. Membrana

Ventajas de la preparación en base líquida sobre la membrana nucleopore:

1. Menor dificultad técnica del procesado de la muestra

2. Mejor calidad técnica obtenida por:

- Menor número de muestras inadecuadas al reducirse la superposición celular y el exceso de material hemático, inflamatorio, de fondo, etc.

- Aumento de la sensibilidad y especificidad debido a la mejor preservación de las células y una mejor visualización al no estar ocultas por células inflamatorias, sangre u otras células epiteliales.

3.Reducción del tiempo de screening citológico. La disposición de las células en capa fina reduciendo la superposición, reforzando la morfología celular y la ausencia de artefactos permite reducir el tiempo de observación.

4.Posibilidad de realizar estudios complementarios sin necesidad de tomar una nueva muestra al paciente

5.Conservación del material sobrante. Las células pueden conservarse en el vial durante aproximadamente 6 semanas.

Inconvenientes de la LBP sobre la membrana:

1.Necesidad de aparataje y material específico

2.Mayor coste económico.

Nuestro agradecimiento a:

- Mª Luisa Lezana, por su ayuda en el procesado de las citologías.

- Pablito P. A.

- BLANCA PALOMEQUE CASTRO - ESPAÑA (09/11/2009 19:57:12)

También creo que es mayor la calidad del procesado en base líquida para muestras de orina.
Una comunicación clara , didáctica y con unas fotos estupendas.
Un saludo

- Gima Varona Esquivel - ESPAÑA (10/11/2009 18:50:35)

Muchas gracias Blanca, saludos para ti también.

- Nuria Nogales - ESPAÑA (12/11/2009 18:24:43)

Creo entender que seguís usando los dos métodos?Nosotros también usamos el medio líquido para el procesado de todos los líquidos y los resultados son realmente buenos. Nunca he usado el sistema de Nucleopore, gracias por la información.
Saludos.

- Gima Varona Esquivel - ESPAÑA (12/11/2009 20:11:44)

Hola Nuria.
No, no seguimos usando los dos metodos, de rutina diaria en nuestro laboratorio utilizamos la citología en medio líquido.
Procesamos estas orinas con los distintos metodos solo para la exposicion del trabajo.
Estoy contigo en que los resultados son excelentes, lo que facilita el diagnóstico y algo muy importante, que el material sobrante esta conservado en optimas condiciones.

- Rafael Martínez Girón - ESPAÑA (15/11/2009 12:39:28)

Cytospin, Millipore, Citología en monocapa... Hacia el procesado impecable?
Buena exposición de la técnica citológica. Felicitaciones por la ponencia.
Saludos desde Asturias.

- Raquel Castillo - ESPAÑA (Autor) (15/11/2009 19:48:04)

Muchas gracias por tu comentario Rafael; la verdad es que con la citologia liquida a la hora de hacer el screnning se gana muchisimo.

- Gima Varona Esquivel - ESPAÑA (17/11/2009 18:21:16)

Hola Dr. Martínez Girón
Creo que ese debe ser el proposito de todo buen técnico, hacer un procesado impecable de cualquier técnica, para poder realizar un buen diagnóstico.
Gracias y un saludo

- FRANCISCO JOSE MAZORRA MACHO - ESPAÑA (22/11/2009 1:43:56)

Claro, conciso y ....CONTUNDENTE. Muchas gracias.

- MARIA DEL MAR OLMO FERNANDEZ - ESPAÑA (23/11/2009 10:16:29)

La implantación de la citología en medio liquido está revolucionando el trabajo en los laboratorios debido a la reducción del tiempo de screenning como en la comodidad del procesado. Pero su alto coste frente a los métodos tradicionales está dificultando que en muchos laboratorios se trabaje con este sistema.
Gracias por la ponencia.

- Raquel Castillo - ESPAÑA (Autor) (23/11/2009 15:50:19)

Gracias a ti Francisco Jose por habernos leido.

- Raquel Castillo - ESPAÑA (Autor) (23/11/2009 15:54:03)

Tienes razón Maria del Mar el alto coste es un impedimento a la hora de implantarlo en los laboratorios, nosotros tenemos la suerte de contar con dicha técnica, con
paciencia e insistencia quizá os lo pongan,gracias por tu comentario.

- Lenny Marcela Terrazas Sánchez - ARGENTINA (25/11/2009 18:26:32)

Muy interesante el trabajo de comparacion entre estos dos sistemas de captura de celulas en medio liquido,tengo una pregunta , si el sistema de procesado en base liquido solo se puede utilizar en citologia de orina o tiene igual aplicacion para otros liquidos como ser de cavidad pleural,peritoneal.Gracias me gusto mucho su trabajo

- Ernesto Garcia-Ureta - ESPAÑA (26/11/2009 12:33:00)

Enhorabuena a los autores por su interesante trabajo. Nosotros hace tiempo que dejamos de utilizar la filtracion en membranas en base a las dificultades tecnicas y al timpo empleado para el procesamiento de las muestra. En la actualidad el empleo de la citologia liquida nos proporciona tambien unos buenos resultados.

- Raquel Castillo - ESPAÑA (Autor) (26/11/2009 19:22:02)

Muchas gracias por tu comentario Lenny Marcela, y con respecto a tu pregunta, la citologia liquida puede ser utilizada para todo tipo de liquidos ya sea pleural peritoneal,L.C.R, BAS,BAL, P.A.A.F...etc,obteniendo buenos resultados.

- Raquel Castillo - ESPAÑA (Autor) (26/11/2009 19:22:57)

Muchas gracias por tu comentario Ernesto.

- Gerardo Patiño Toledano - ESPAÑA (30/11/2009 11:57:11)

Gracias a todos los participantes y a sus comentarios en el foro. Con la aportación de todos hemos de obtener métodos de procesado que faciliten el diagnóstico y rentabilizen al máximo posible las muestras obtenidas.

- Laura Gomez - ESPAÑA (30/11/2009 16:06:53)

Gracias por los comentarios y aportes.

- Raquel Castillo - ESPAÑA (Autor) (30/11/2009 19:52:18)

Gracias a todos por participar en nuestro trabajo con vuestros comentarios; ha sido un placer participar en este décimo congreso con dicha comunicación, espero poder realizar un nuevo trabajo el próximo congreso; gracias a mis compañeros por sus ideas, trabajo y esfuerzo empleado en esta comunicación, ha sido un placer trabajar con vosotros.Hasta la próxima.

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